- •Методы определения активности аминотрансфераз сыворотки крови
- •Методические указания к практическому занятию «Методы определения индикаторных ферментов в сыворотке крови »
- •1. Тема: Методы определения активности аминотрансфераз сыворотки крови
- •2. Практическое занятие для клинических интернов
- •3. Значение темы (актуальность изучаемой проблемы).
- •4. Цели обучения:
- •На основе теоретических знаний и практических умений обучающийся должен знать и уметь:
- •5. Основные понятия и положения темы (наглядные формы –таблицы и т.Д.)
- •5.1. Методы определения активности аминотрансфераз
- •Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови с использованием 2,4-динитрофенилгидразина
- •Индикаторная реакция
- •Основная реакция
- •5.2. . Преаналитический этап исследования активности ферментов аланинаминотрансфераза (АлАт)
- •Аспартатаминотрансфераза (АсАт)
5.2. . Преаналитический этап исследования активности ферментов аланинаминотрансфераза (АлАт)
Материал для исследования. Свежая негемолизированная сыворотка или плазма. Свежая капиллярная или венозная кровь, кровь, взятая с гепарином (для выполнения исследований на тест-полосках и анализаторе.
.Время взятия и доставки в лабораторию. При плановых исследованиях с 7 до 9 ч утра. При экстренных анализах — в любое время дня.
Подготовка пациента. Исключить прием алкоголя, физические нагрузки, прием лекарств, интерферирующих при определении активности АлАТ. Натощак, при взятии крови пациент находится в положении лежа или сидя.
Методика взятия. Кровь берется в химически чистую центрифужную пробирку или в коммерческую одноразовую пробирку под вакуумом. Для получения плазмы в качестве антикоагулянтов могут быть использованы гепарин и его соли (натрия или лития). Для определения активности АлАТ в лабораторию доставляют по возможности быстрее 1 мл крови или 0,5 мл сыворотки. На 1 определение в зависимости от метода требуется 0,02—0,1 мл сыворотки или плазмы.
Условия доставки и хранения. Свежая капиллярная или венозная кровь используются для анализа в течение 2—3 мин. Гепаринизированная кровь — в течение 1 ч, взятая в гепаринизированный капилляр — в течение 15 мин.
Исследование активности фермента в сыворотке или плазме должно быть произведено в день взятия биожидкости, поскольку активность АлАТ быстро снижается при хранении.
Рекомендуемые сроки хранения: в закрытой пробирке при комнатной температуре 3 дня, при 2—8°С — 7 дней и при замораживании при -20°С — не более 2 дней. Повторное оттаивание и замораживание недопустимы.
Примечания. С возрастом активность АлАТ имеет тенденцию к снижению. У женщин более низкие величины активности, чем у мужчин. При приеме алкоголя активность повышается, при прерывании запоя —снижается. Отчетливы сезонные изменения активности, так, пик ее наблюдается весной и падение — осенью. В течение дня наибольшая активность — в утренние часы с падением в послеобеденные часы. В плазме активность АлАТ статистически, но не клинически достоверно ниже, чем в сыворотке
Внутрииндивидуальная вариация 23,0%,
межиндивидуальная —41,1%.
Повышают активность АлАТ: курение, голодание, физические нагрузки, алкоголизм, травмы, отсутствие физической активности, литотрипсия, мышечный массаж, прием сахарозы.
Гемолиз вызывает значительное завышение результатов вследствие более
высокой активности фермента в эритроцитах, чем в сыворотке. Липемия может оказывать двоякое влияние: вызывать занижение результатов вследствие рассеяния света с 340 нм к 380 нм или завышение результатов. Истощение витамина В6 более снижает активность АлАТ, чем АсАТ. Лекарства, вызывающие гепатотоксический эффект и холестаз, вызывают повышение активности АлАТ.
Аналитическое снижение вызывают дофамин, метилдопа (в методах на тест-полосках),дипирон, ибупрофен, рифампин, кетопрофен, метотрексат
(в колориметрических методах); увеличение — ацетаминофен (в колориметрических методах), аминофеназон, аминосалициловая кислота, хлордиазэпоксид
