2.1.3 Агар Сабуро

Питательная среда предназначена для выращивания и подсчета общего числа дрожжевых и плесневых грибов. Представляет собой студнеобразную массу темно-ко­ричневого цвета.

Агар Сабуро с глюкозой и хлорамфениколом рекомендуют для селектив-ного культивирования дрожжевых и плесневых грибов, а Агар Сабуро с глюкозой используют также для культивирования кислотолюбивых бактерий.

Состав: пептон ферментативный, глюкоза, агар.

Приготовление: размешать 65,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать в течение 15 мин. При разливе необходимо следить за тем, чтобы края пробирки были сухими, иначе пробки будут прилипать к стеклу. [13]

2.1.4 Стерилизация текучим паром

Текучим паром (100°С) обрабатывают предметы, портящиеся от сухого жара, и некоторые питательные среды, не выдерживающие более высокой температуры (например, среды с углеводами). Данную стерилизацию выполняют в кипятильнике Коха в течение трёх дней по 30 минут ежедневно. Эту стерилизацию называют дробной.

Кипятильник Коха представляет собой высокий металлический цилиндр с двойным дном, свободно закрывающийся конусообразной крышкой с отверстием для термометра. Снаружи цилиндр покрыт асбестом или линолеумом. На дно кипятильника наливают воду, устанавливают подставку с отверстиями для прохождения пара, на которую помещают стерилизуемые предметы. Продолжительность стерилизации отсчитывают с момента интенсивного выхода пара из-под крышки и повышения температуры до 100°С.

При однократном прогреве при температуре 100°С за 30 минут погибают вегетативные клетки, споры, не многих организмов остаётся жизнеспособными. После такого прогрева среду помещают на 24 часа в термостат при температуре 28 – 30°С. Споры, сохранившиеся при первом нагревании, успевают за это время прорасти в вегетативные формы, которые при последующем нагревании погибают. Всю операцию повторяют три раза.

2.1.5 Учет численности бактерий в воздухе.

Для определения количества бактерий в воздухе я использовал метод Коха (осаждение клеток микроорганизмов на плотных питательных средах). Суть его сводится к следующему. Стерильные чашки Петри с питательной средой (МПА, Сабуро, ГА) открывают в исследуемом помещении на 5 минут. Частицы пыли с бактериями под действием силы тяжести оседают на поверхность плотной среды. Через 48 часов инкубации при 28 - 30°С больше пыли осевшие бактерии образуют на среде колонии, которые можно подсчитать. Поскольку некоторые микроорганизмы развиваются медленно, окончательно подсчитывают колонии на пятые сутки.

На площади в 100см² за 5 минут осаждается примерно столько бактерий, сколько находится в 10 л воздуха (0,01 м³). Зная, что площадь чашки Петри, по этим данным можно подсчитать количество клеток в 1м³ воздуха. Для этого число колоний, выросших в чашке Петри, относят к общей площади чашки (πr²=78,5), затем пересчитывают, сколько таких колоний поместилось бы на 100 см², и переводят на 1 м³ воздуха.

Формула для расчёта нахождения

клеток на кубическом метре.

Чашки Петри с агар-агаром в исследуемых помещениях лучше размещать по две или три. После подсчёта в них микроорганизмов выводят среднее арифметическое.

Для определения качественного состава микроорганизмов колонии на чашках группируют по культуральным признакам, из каждой группы готовят препараты и микроскопируют. По морфологическим и культуральным приз-накам устанавливают род, а в отдельных случаях и вид бактерий.

Если чашки выставляют в разных помещениях в одно и то же время, то по результатам анализа можно судить об относительной чистоте воздуха каждого помещения. Чем больше пыли в воздухе, тем больше в нём микроорганизмов.