- •Занятие №8.2 Тема: Основы санитарной микробиологии
- •Микрофлора почвы
- •Определите давность загрязнения почвы по результатам следующих тестов:
- •Определение количества бактерий-аммонификаторов
- •Определение хлоридов в почве
- •Выявление нитрифицирующих бактерий
- •Определение общего числа бактерий в 1 г почвы
- •Микрофлора воды
- •Микрофлора воздуха
- •Микрофлора пищевых продуктов
- •Микрофлора лекарственного сырья и лекарственных средств
- •Определение пирогенности растворов
Определение хлоридов в почве
Качественное определение основано на реакции азотнокислого серебра с хлоридами в водной вытяжке. Ход анализа. В пробирку наливают 10-15 мл исследуемой водной вытяжки и 2-3 капли раствора азотнокислого серебра. Образование белого хлопьевидного осадка указывает на наличие хлоридов.
Вывод:____________________________________________________
Выявление нитрифицирующих бактерий
Нитрифицирующие бактерии получают энергию в результате окисления восстановленных соединений азота (аммиака; азотистой кислоты). Впервые чистые культуры этих бактерий получил С.Н.Виноградский в 1892 г., установивший их хемолитоавтотрофную природу. В IX издании Определителя бактерий Берги все нитрифицирующие бактерии выделены в семейство Nitrobacteraceae и разделены на две группы в зависимости от того, какую фазу процесса они осуществляют. Первую фазу - окисление солей аммония до солей азотистой кислоты (нитритов) - осуществляют аммонийокисляющие бактерии (роды Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosolobus и др.):
NH4+ + 1,5O2 переходит в NO2- + Н2О + 2Н+
Вторую фазу - окисление нитритов до нитратов - осуществляют нитритокисляющие бактерии, относящиеся к родам Nitrobacter, Nitrococcus и др.:
NO2- + 1/2*O2 переходит в NO3-
Нитраты – соли азотной кислоты, например NaNO3, KNO3, NH4 NO3, Mg(NO3)2. Они являются нормальными продуктами обмена азотистых веществ любого живого организма.
|
Реакция с реактивом Грисса. Этот реактив состоит из сульфаниловой кислоты и α-нафтиламина. При взаимодействии реактива Грисса с нитритами появляется интенсивная красная окраска.
|
|
Реакция с 1%-го раствором дифениламина (HN(C6H5)2). При наличии нитратов жидкость в пробирке окрашивается в темно-синий цвет вследствие образования дифенилнитрозоамина. |
Вывод:
|
Вывод: |
||
Определение общего числа бактерий в 1 г почвы
Из взятой пробы отбирают 10 г почвы, высыпают её в стерильную чашку со 100 мл стерильной воды и растирают в течение 5 минут пестиком. После этого содержимое чашки переводят в склянку, взбалтывают 10 минут, дают отстояться в течение 2 минут (для глинистых почв – около 5 минут) и затем делают из почвенной суспензии ряд разведений на стерилизованной водопроводной воде, начиная от 0,1 до 0,0001 в зависимости от предполагаемого загрязнения. Из соответствующего разведения берут стерильной пипеткой 0,1 мл суспензии и наносят на поверхность плотных питательных сред. Чашки с посевами ставят в термостат при 25-30°С, 35-37°С и 55-60°С на 72 часа, после чего выросшие колонии подсчитывают обычным способом и результаты перечисляют на 1 г почвы.
Результаты посева:
№ |
Название среды |
Разведение |
Количество колоний |
КОЕ/0,1мл |
КОЕ/1мл |
Вывод |
1 |
МПА при 25-30°С, 48ч |
10-5 |
6 |
|
|
|
2 |
Среда Эндо при 35-37°С, 24ч |
10-3 |
43 |
|
|
|
3 |
Висмут-сульфитный агар, при 35-37°С, 24ч |
10-4 |
37 |
|
|
|
4 |
МПА при 55-60°С, 24ч |
10-4 |
8 |
|
|
|
ВЫВОД о степени загрязнения почвенного образца:
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
