Техника посева на питательные среды
Общие правила: Бактериологические посевы - это манипуляции, включающие нанесение (внесение) петлей, пипеткой или другим инструментом содержащего бактерии материала на (в) питательные среды с целью выделения чистой культуры, ее накопления, хранения, определения многообразных свойств. Посевы должны проводиться таким образом, чтобы достигнуть поставленной цели (например, получение изолированных колоний) и в то же время предупредить возможность контаминации посевного материала и питательных сред микробами окружающей среды, а также заражения людей и контаминации окружающих объектов микробами, находящимися в посевном материале.
Посевы бактериологические производят в спецодежде, в специальных боксах и лабораториях, содержащих минимальное число микроорганизмов, около пламени горелки, стерильными инструментами в стерильные среды и при строгом соблюдении других условий асептики.
Перед проведением посевов необходимо оборудовать рабочее место, добавив к стационарному оборудованию исследуемый материал, инструменты, питательные среды, которые предварительно подписывают (номер исследуемого материала и дату посева).
Техника посева с помощью бактериальной петли из пробирки в пробирку:
1. Пробирку с посевным материалом и пробирку со средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне, а их основания находились поверх кисти. Обычно пробирку с посевным материалом держат ближе к себе.
2. В правой руке держат бактериальную петлю, как писчее перо, и стерилизуют ее в пламени спиртовки (горелки) трехкратно.
3. Четвертым и пятым пальцами и краем ладони правой руки вынимают из пробирок обе пробки одновременно. Извлекают пробки не рывком, а плавно: легкими винтовыми движениями.
4. Вынув пробки, края, пробирок обжигают в пламени спиртовки.
5. Прокаленную петлю вводят через пламя спиртовки в пробирку с посевным материалом (культурой), охлаждают петлю о внутреннюю стенку пробирки, (или погружая ее в конденсационную жидкость) и, набрав немного материала (одну петлю), осторожно переносят в пробирку со средой, не касаясь стенок и краев пробирок.
6. При посеве в жидкую среду петлю с посевным материалом слегка погружают в жидкость (бульон), материал растирают на стенке пробирки и смывают средой.
7. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя спиртовки, закрывают пробирки; после этого прокаливают петлю.
Техника посева из пробирки в чашку Петри:
Предварительно разделите чашку Петри со стороны дна восковым карандашом крест- накрест на 4 равных сектора.
1. Пробирку с посевным материалом (культурой) держат в левой руке, петлю - в правой. Петлю прожигают, вынимают пробку, прогревают края пробирки и закрывают ее пробкой и ставят пробирку в штатив.
2. Левой рукой берут чашку Петри со средой и слегка приоткрывают крышку, держа ее большим и указательным пальцами.
3. Петлю с посевным материалом вводят под крышку чашки Петри и снимают избыток посевного материала одним из способов:
а) материал втирают петлей в поверхность среды у края чашки, несколько раз проводя петлей из стороны в сторону (делают небольшую площадку);
б) прокалывают агар петлей у края чашки.
4.Затем засевают материал на этот же сектор, делая параллельные штрихи с интервалом в 4-5 мм от края сектора (чашки) к центру чашки по поверхности среды, поочередно на всех секторах.
Некоторые методы посевов на плотные питательные среды
Метод |
Принцип метода |
Область применения |
Посев однократным истощающим штрихом |
|
|
Посев истощающим штрихом секторами |
|
|
Посев на скошенный агар |
|
|
Метод Шукевича |
|
|
Посев уколом |
|
|
Метод Дригальского |
|
|
Метод Коха |
|
|
Метод мембранных фильтров |
|
|
Практическая часть
Первый этап выделения чистой культуры:
Продолжение идентификации культур №1,2,3
З
адание
1. Посев
культур на МПБ однократным истощающим
штрихом
Нарисуйте схему посева. Укажите цель посева культур на среду МПБ__________________________________________________________
Проведите посев, соблюдая правила и технику посева.
На следующем занятии оцените результаты посева__________________
______________________________________________________________
З адание 2. Посев культур на среду Эндо однократным истощающим штрихом
Нарисуйте схему посева. Укажите цель посева культур на среду Эндо__________________________________________________________
Проведите посев, соблюдая правила и технику посева.
На следующем занятии оцените результаты посева__________________
_ _____________________________________________________________
З адание 3. Посев культур на солевой агар однократным истощающим штрихом
Нарисуйте схему посева. Укажите цель посева культур на солевой агар__________________________________________________________
Проведите посев, соблюдая правила и технику посева.
На следующем занятии оцените результаты посева__________________
______________________________________________________________