8 Вопрос (Цитоплазма бактерий и включения. Способ окраски цитоплазмы и зерен волютина).

Цитоплазма бактерий занимает основной объем клетки и состоит из растворимых белков. Рибосомы бактерий имеют коэффициент сегментации 70 S в отличие от рибосом, характерных для эукариотических клеток (80 S). Поэтому некоторые антибиотики, действие которых основано на подавлении синтеза белка путем связывания их с рибосомами бактерий, не оказывают влияния на синтез белка эукариот. В цитоплазме бактерий нахожятся: нуклеоид, рибосомы, мезосомы. В цитоплазме имеются различные включения – полисахариды, поли-Bмасляная кислота и полифосфаты (волютин). Они накапливаются при избытке питательных веществ в окружающей среде и выполняют роль запасных веществ для питания и энергетических потребностей. Зерна волютина выявляются у дифтерийной палочки в виде интенсивно прокрашивающихся полюсов клетки. Методика окраски по Нейссеру:

1. Фиксированный мазок окрашивают ускуснокислой синей 1 минуту, затем сливают краску

2. промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 секунд

3. далее окрашивают везувином 1-3 мин

4. промывают водой, высушивают.

Зерна волютина окрашиваются в темно-синий, почти черный цвет.

9 Вопрос (Капсула бактерий, ее биологическая роль, способ обнаружения).

Капсула образуется только в организме человека и животных. Это слизистый слой, толщиной 0,2 мкм, имеющий четко очерченные внешние границы.

По химическому составу различают:

- капсулы, состоящие из полисахаридов, не содержащих азот

- капсулы, состоящие из полисахаридов, содержащих азот

- капсулы полипептидной природы (сибиреязвенные бациллы)

Капсула гидрофильна и включает большое количество воды. Многие бактерии образуют микрокапсулу – вокруг одной бактериальной клетки, выявляется при электронной микроскопии в виде микрофибрилл из мукополисахаридов, которые прилегают к клеточной стенке (чумная палочка). Макрокапсула – вокруг нескольких бактериальных клеток, выражен слизистый слой, снаружи покрывающий клеточную стенку (пневмококк, сибиреязвенные бациллы).

Функции капсулы:

1. препятствует фагоцитозу бактерий, действию бактериофагов

2. защита от высыхания

3. адгезивная – способствует прилипанию к поверхности клетки хозяина

4. определяет антигенную специфичность и иммуногенные свойства.

Капсула, в связи с гелеобразной консистенцией, плохо удерживает красители, поэтому для ее обнаружения используют метод негативного контрастирования, например, по Бури-Гинсу:

1. На середину предметного стекла наносят капельку черной туши и смешивают ее с каплей культуры капсульных бактерий с помощью петли.

2. краем другого предметного стекла делают мазок по типу кровяного. Мазок сушат на воздухе и фиксируют в пламени горелки.

3. Окрашивают 5 минут карболовым фуксином, разведенным водой 1:3

4. осторожно промывают водой, высушивают.

Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно выделяются на темном фоне препарата.

10 Вопрос (Спорообразование у микробов, биороль. Способ окраски спор).

Споры – это покоящиеся клетки с грамположительным типом строения клеточной стенки. У них низкая метаболическая активность. Образуются при неблагоприятных условиях окружающей среды. Внутри клетки образуется одна спора (эндоспора). Спора способствует сохранению вида и не является способом размножения. Споры обладают высокой устойчивостью к высушиванию, действию повышенной температуры и различных химических веществ. По диаметру споры могут быть больше (клостридии) и меньше (бациллы) вегетативных микроорганизмов.

Споры могут располагаться:

- центрально (сибиреязвенная бацилла)

- терминально (клостридия столбняка)

- субтерминально (клостридия ботулизма)

Стадии спорообразования:

1. подготовительная - в одном из участков клетки цитоплазма с частью нуклеоида уплотняется.

2. Проспора – цитоплазматическая мембрана врастает в цитоплазму и окружает уплотнившийся участок

3. Образование оболочки – между двумя мембранами, покрывающими проспору, формируется толстый слой кортекса (кора).

4. созревание – остальная часть клетки отмирает, формируется зрелая спора с плохо проницаемой многослойной оболочкой.

5. весь процесс занимает 18-20 часов.

Прорастание спор включает три стадии:

1. Активация – осуществляется различными воздействиями (кислая рН, свободные сульфгидрильные группы, повышением температуры, механическими повреждениями)

2. Начальная стадия – активация автолизина, который разрушает пептидогликан кортекса, в спору поступает вода, спора высвобождается от дипиколината кальция, разрушаются другие компоненты.

3. Стадия роста – появляется ростовая трубка, из которой вырастая новая вегетативная клетка

4. процесс прорастания занимает 5-6 часов.

Методы обнаружения спор:

Метод Циля-Нильсена:

1. фиксированный мазок покрывают полоской бумаги, на нее наносят карболовый фуксин Циля и несколько раз подогревают над пламенем горелки до появления паров, каждый раз подливая краситель

2. Бумагу снимают и обесцвечивают мазок в 5% растворе серной кислоты, затем промывают водой

3. на мазок наливабт раствор метиленового синего на 3-5 мин

4. препарат промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсионной системой.

5. споры окрашиваются в красный цвет

Окраска по Ожешки:

1. на нефиксированный мазок 0,5% р-р соляной кислоты

2. подогревают на пламени горелки 2-3 мин

3. кислоту слить

4. препарат промыть водой

5. просушить

6. фиксировать

7. окраска по Цилю-Нильсена

8. Споры – красный цвет.