3.3. Среды для первичных посевов материала

и высевов со сред обогащения

Среды Плоскирева, ЭМС-агар, Эндо, ВСА выпускают в сухом виде. Приготовление сред из сухих препаратов в соответствии с указаниями на этикетках.

Среды с антибиотиками для выделения шигелл

Питательные среды с антибиотиками готовят путем добавления соответствующих препаратов антибиотиков к среде Плоскирева или ЭМС-агару. При выборе антибиотика исходят из результатов определения чувствительности к антибиотикам шигелл, выделяемых в данной местности. Подробности приготовления питательных сред с антибиотиками - см. "Методические рекомендации по применению селективно-дифференциальных сред с антибиотиками для выделения шигелл", МЗ СССР, 1974. Антибиотики могут быть также введены в среду путем диффузии их из вкладываемых под питательную среду в чашке Петри полосок фильтровальной бумаги, пропитанных растворами соответствующих антибиотиков ("метод подосок"). Полоски размером 4 х 0,5 см готовят из фильтровальной бумаги, укладывают "ребром" по 200 штук в чашки Петри и стерилизуют в автоклаве при 121 °C 30 минут, затем подсушивают и пропитывают растворами антибиотиков (левомицетин и тетрациклин в концентрациях 250 мкг/мл, стрептомицин - 500 мкг/мл). Могут быть использованы и другие антибиотики. На смачивание 200 полосок расходуют 12,5 мл раствора антибиотика. Пропитанные раствором антибиотика полоски подсушивают при 37 °C 18 - 20 часов. Готовые полоски хранят в банках с притертыми пробками в холодильнике не более 3-х месяцев.

Среда "Эт-2"

(для выделения эдвардсиелл)

Состав: Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) - 20 г

Маннит - 10 г

Глюкоза - 2,75 г

L-лизин - 5 г

или

DL-лизин - 10 г

Желчные соли (по Олькеницкому) - 2,5 г

Розоловая кислота (5-процентный спиртовой раствор) - 2 мл

Железо (III) - аммоний цитрат (смесь солей 1:1) - 0,8 г

а) Железо (III) цитрат (FeC H O )

6 5 7

б) Аммоний цитрат /(NH ) C H O /

4 3 6 5 7

Натрий тиосульфат (Na S O х 5H O) - 6,8 г

2 2 3 2

Агар - 25 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: в 20 мл воды растворяют тиосульфат натрия и смесь цитратов в указанных количествах. Все остальные ингредиенты растворяют в воде при подогревании в водяной бане до полного расплавления агара и добавляют приготовленный раствор солей, затем среду фильтруют, устанавливают pH 6,9 - 7,1. Стерилизуют при 112 °C 30 минут, разливают в чашки Петри.

3.4. Среды для первичной идентификации

Агар Клиглера

Коммерческая сухая среда готовится в соответствии с указаниями на этикетке препарата. Готовая к употреблению среда имеет красновато-бурый или оранжево-красный цвет, при скашивании следует оставлять столбик высотой 2 - 2,5 см.

Трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому

Состав: Агар питательный сухой - 25 г

Лактоза - 10 г

Сахароза - 10 г

Глюкоза - 1 г

Аммоний-железо (II) сульфат

/(FeSO х (NH ) SO х 6H O/ - 0,2 г

4 4 2 4 2

Натрия тиосульфат (Na S O х 5H O) - 0,3 г

2 2 3 2

Мочевина - 10 г

Феноловый красный (0,4-процентный водный р-р) - 4 мл

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: соли предварительно растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании на водяной бане. Сухой питательный агар расплавляют в оставшемся объеме воды при нагревании и помешивании. Затем все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2 - 7,4. Добавляют индикатор, хорошо перемешивают, разливают в пробирки по 6 - 7 мл. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 минут. Скашивают, оставляя столбик 2 - 2,5 см. Готовая среда бледно-розового цвета.