Інструкція до практичного заняття: «Кількісне визначення холестерину в крові і кетонових тіл у сечі»

Робота 1. Реакція Лібермана – Бурхардта на холестерин.

Принцип методу заснований на здатності розчину холестерину в хлороформі давати з оцтовим ангідридом і концентрованою сірчаною кислотою зелене фарбування.

Хід роботи: До 1 мл хлороформного екстракту холестерину додають 10 крапель оцтового ангідриду і 2 краплі конц. сірчаної кислоти, добре перемішують і спостерігають зелене фарбування.

Робота 2. Визначення загального холестерину в сироватці крові по методу Ілько.

Принцип методу заснований на реакції Лібермана – Бурхардта (див. вище).

Хід роботи: На дно сухої мірної пробірки вносять 0,1 мл сироватки крові. Відмірюють циліндром 2,1 мл реактива 1 (суміш крижаної оцтової кислоти, оцтового ангідриду і концентрованої сірчаної кислоти) і переливають у пробірку із сироваткою, перемішують, струшують і поміщають у термостат при температурі 37 град. С на 20 хвилин (чи при кімнатній температурі). При цьому розвивається зелене фарбування. Потім фотометрують на ФЕКє в кюветі на 5 мм проти води при червоному світлофільтрі. Для визначення вмісту холестерину по знайденій оптичній щільності користаються готовим каліброваним графіком. Знайдену концентрацію холестерину множать на 1000, тому що сироватки в досвід береться 0,1 мл. Коефіцієнт перерахування в одиниці СІ (ммоль/л) дорівнює 0,0258.

Норма – 2,97 – 8,79 ммоль/л холестерину в сироватці крові (115- 340 мг/%).

Клініко-діагностичне значення.

Гіперхолестеринемія спостерігається при атеросклерозі, цукровому діабеті, гіпотиреозі, механічній жовтяниці. Гіпохолестеринемія спостерігається при голодуванні, туберкульозі, гіпертиреозі.

Робота 3. Якісні реакції на ацетон і ацетооцтову кислоту.

Проба Легаля на ацетон.

Принцип роботи. Ацетон і ацетооцтова кислота в лужному середовищі утворюють з нітропрусидом натрію оранжево-червоне фарбування.

Хід роботи. У пробірку наливають 5 крапель сечі, 5 крапель 10% розчину лугу і 5 крапель свіжевиготовленого нітропрусида натрію. З'являється оранжево-червоне фарбування, що після додавання 10 крапель крижаної оцтової кислоти переходить у вишнево – червоне фарбування.

Реакція Герхардта на ацетооцтову кислоту. До 5 крапель сечі додають по краплях 5% р-н хлорного заліза. При цьому випадає осад – сульфат фосфорнокислого заліза. При наявності ацетоацетату від подальшого додатка хлорного заліза з'явиться вишнево – червоне фарбування. При кип'ятінні процес протікає швидко.

Клініко-діагностичне значення.

Гіперкетонемія і кетонурія спостерігаються при цукровому діабеті, голодуванні, гіперпродукції гормонів – антагоністів інсуліну.

ВИСНОВКИ:

Підпис викладача.

Додаток 1.

Граф логічної структури по темі «Кількісне визначення холестерину в крові і кетонових тіл у сечі»

ВМІСТ ХОЛЕСТЕРИНУ В КРОВІ І КЕТОНОВИХ ТІЛ У СЕЧІ

НОРМА

ПАТОЛОГІЯ

Вміст холестерину у крові 2,97-8,79ммоль/л

Відсутність кетонових тіл у сечі

Гіперхолестеринемія

Кетонурія

Атеросклероз

Жовчнокам'яна хвороба

Гіперліпідемії

Цукровий діабет

Голодування

ВИЗНАЧЕННЯ ЗАГАЛЬНИХ ЛІПІДІВ У СИРОВАТЦІ КРОВІ

Актуальність теми.

Ліпіди організму, що виконують різні функції, постійно включаються в метаболічні перетворення, регульовані гормонами. Тісний взаємозв'язок крові з усіма тканинами організму дозволяє виявити зміни в обміні ліпідів через специфічні компоненти крові - плазменні ліпопротеїди. У плазмі крові їх виявлено кілька класів. Знайдено, що при ряді захворювань ліпопротеїдний спектр сироватки крові може змінюватися. Для лікаря спостереження за ліпопротеїдним спектром сироватки крові дозволяє судити про динаміку патологічного процесу, а також ефективності терапевтичних заходів.

Після цього вам треба ознайомитися з цілями заняття та обміркувати іх , усвідомити необхідність вивчення цієї теми.

Загальна мета.

Вміти інтерпретувати ліпопротеїдний спектр сироватки крові в залежності від стану ліпідного обміну організму для використання на наступних кафедрах при поясненні порушень метаболізму і їхніх клінічних проявів.

Конкретні цілі: Вихідний рівень знань-умінь:

Уміти:

1. Інтерпретувати ліпопротеїдний спектр сироватки крові.	1. Інтерпретувати особливості структури поверхнево-активних речовин і їхню функцію в забезпеченні стійкості колоїдних систем (каф.біоорганічної хімії).
2 .Інтерпретувати механізм біосинтезу жирних кислот і тригліцеридів, його регуляцію і порушення в залежності від стану організму.	2. Довести приналежність фосфатидів до поверхнево-активних речовин (каф.біоорганічної хімії).
3. Інтерпретувати механізм біосинтезу фосфатидів і його порушення в залежності від стану організму.	3. Інтерпретувати реакції гідрування, декарбоксилирування й етерифікації (каф.біоорганічної хімії).
4. Довести зв'язок обміну ліпідів із променем вуглеводів
5. Аналізувати дані по змісту ліпідів сироватки крові для характеристики ліпідного обміну організму.

Для перевірки вихідного рівня знань-умінь пропонується виконати ряд завдань.

Завдання для самоперевірки і самокорекції вихідного рівня знань-умінь.

Завдання1. У два циліндри з рідинами, що не змішуються, ( наприклад, вода і толуол) додали: у 1-й - тригліцерид, у другий-фосфатидилсерін. Як відбудеться розподіл доданих речовин у такій системі?

А. Тригліцерид і фосфатидилсерин виявляться у водяній фазі

В. Тригліцерид і фосфатидилсерин виявляться у фазі органічного розчинника

(толуолу)

С. Тригліцерид буде знаходитися у фазі органічного розчинника, фосфатиди-

серін в водяній фазі

Д. Тригліцерид буде знаходитися у водяній фазі, фосфатидилсерин – фазі органі-

чного розчинника

Е. Тригліцерид- у фазі органічного розчинника, фосфатидилсерин - на границі

розділу водяної фази й органічного розчинника (толуолу).

Завдання 2. У виробництві маргаринів одним з основних етапів є гідрогенізація жирів. Визначите, якого виду жири змінюються в цьому процесі?

А. Дилинолеостеарат

В. Дипальмитостеарат

С. Тристеарат

Д. Пальмитодистеарат

Е. Олеопальмитостеарат

Завдання 3. У парфумерії експериментатори, підбираючи різні компоненти, знаходять потрібні аромати. З'єднавши бензиловий спирт із пропіонатом, вони одержали арамат жасмину. До якого класу відноситься отримана речовина?

А. Глікозид

В. Складний ефір

С. Простий ефір

Д. Алкен

Е. Оксикислота.

Завдання 4. Дослідник для готування стійкої емульсії жиру випробував кілька речовин. Назвіть, з якою речовиною він не одержав потрібного результату?

А. З ацетоном

В. Зі стеаратом натрію

С. З фосфатидилхоліном

Д. З білком

Е. Зі стеоратом калію

Завдання 5. Намагаючись перевірити хімічну структуру серина, експериментатор виконав кілька реакцій. В одній з них він спостерігав виділення газу, що викликав помутніння вапняної води. У якого типу реакції утвориться такий газ?

А. Дегідратації

В. Дегідрування

С. Декарбоксилируваання

Д. Дезамінування

Е. Дефосфорилювання

Завдання 6. У лабораторії фумарову кислоту спочатку перетворили в бурштинову, а потім, нагріваючи при додаванні спирту, синтезували потрібну речовину. До якого класу з'єднань відноситься отримана речовина?

А. Напівацеталь

В. Простий ефір

С. Складний ефір

Д. Амід

Е.Ангідрид

Завдання 7 . У лабораторії фумарову кислоту спочатку перетворили в бурштинову, а потім, нагріваючи при додаванні спирту, синтезували потрібну речовину. Назвіть тип реакції першої стадії синтезу.

А. Дегідрування

В. Гідратація

С. Декарбоксилирування

Д. Гідрування

Е. Дегідратація

Правильність рішення перевірте, зіставивши їх з еталонами відповідей.

Еталони відповідей до рішення завдань для самоперевірки і самоконтролю вихідного рівня знань-умінь:

1.- Е, 2.-А, Е, 3.-В

Інформацію для заповнення вихідних знань-умінь можна знайти в наступній літературі.

1.Тюкавкина Н.А.,Бауков Ю.И. Биоорганическая химия. -М.: “Медицина”, 1991. – С.207, 431-434.

2.Садовничая Л.П., Хухрянский В.Г., Цыганенко А.Я.Биофизическая химия.- К.: “ Высшая школа”, 1986.-С.167-173, 222-224.

3.Лекції по биоорганической химии.

Зміст навчання.

Зміст навчання повинен забезпечувати досягнення цілей навчання, чому сприяє граф логічної структури досліджуваної теми (Додаток 1).