Інструкція до практичного заняття :”Визначення активності -амілази слини».
Принцип методу: Метод заснований на визначенні найменшої кількості амілази (при максимальному розведенні слини), що цілком розщеплює весь доданий крохмаль. Амілазна активність слини виражається кількістю 1,0 % розчину крохмалю в мілілітрах, що розщеплюється 1мл нерозведеної слини при температурі 38 С протягом 30 хв. У нормі амілазна активність слини дорівнює 160-320. Амілазна активність позначається А 38/30`. Цей метод широко використовується для визначення амілазної активності сечі.
Хід роботи. У 10 пробірок наливають по 1 мл води й у 1-у з них додають 1 мл розведеної в 10 разів слини. Уміст цієї пробірки перемішують, кілька разів втягуючи і випускаючи рідину з піпетки. Набирають у піпетку 1 мл змішують і переносять її в 2-у пробірку. Уміст цієї пробірки перемішують і 1 мл суміші переносять у 3-ю і т.д. до 10-ї пробірки. З 10-ї пробірки відбирають 1 мл суміші і виливають. В усі пробірки додають по 1 мл води і по 2 мл 0,1% розчину крохмалю, перемішують, струшують пробірки і поміщають у термостат при 38 С на 30 хвилин. Після інкубації пробірки прохолоджують водопровідною водою, додають по 1 краплі 0,1% розчину йоду і перемішують. При реакції з йодом рідина в пробірках офарблюється в жовтуватий, рожевий і фіолетовий колір. Відзначають останню пробірку з жовтуватим фарбуванням, де гідроліз крохмалю пройшов цілком і роблять розрахунок; отримані дані заносять у таблицю.
|
Розведення слини |
|||||||||
|
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
1:1280 |
1:2560 |
1:5120 |
1:10240 |
|
Пробірки |
|||||||||
|
1-а |
2-а |
3-я |
4-а |
5-а |
6-а |
7-а |
8-а |
9-а |
10-а |
Фар-бування з роз-чи-ном йоду |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Розрахунок: Відзначивши пробірку, де гідроліз крохмалю пройшов цілком при найменшій кількості ферменту, по кількості нерозведеної слини в даній пробірці розраховують амілазну активність слини по наступній пропорції: А мл слини розщепило 2 мл 0,1 % розчину крохмалю ,1 мл слини розщепив х мл розчину крохмалю, де А – кількість нерозведеної слини. Наприклад, жовтувате фарбування з'явилося в 4-й пробірці, де слина була розведена в 160 разів; 1/160 мол слини розщепили 2 мл 0,1% розчину крохмалю; 1 мл нерозведеної слини розщепив х мл 0,1% розчину крохмалю:
Х=2х1х160 =320мол 0,1% розчину крохмалю. Х=1
Отже, амілазна активність слини А 38 / 30 дорівнює 320.
ВИСНОВКИ:
Підпис викладача:
Додаток 1