2. Методы исследования

Дизайн исследования включает 2 блока: экспериментальный и клинический.

Для интеграции научных исследований в образовательной процесс и в практику здравоохранения к работе будут привлечены студенты (члены СНО).

Дизайн экспериментального исследования:

Для экспериментов будут использоваться лабораторные животные (кролики), которые будут находиться в специализированном помещении фирмы «Антиген» с характеристикой их содержания согласно международным правилам по этическому обращению с животными­.

Критерии включения, исключения и выбытия животных:

- критерии включения – здоровые, половозрелые животные обоего пола

- критерии исключения – больные кролики (изменение покровов, глаз, состава мочи, экскрементов, наличие ран.)

- критерии выбытия животных – данные о всех подопытных животных после начала эксперимента включаются в отчет.

Материалы и методы исследования:

Планируемое исследование будет состоять из двух блоков – экспериментального и клинического. Экспериментальное исследование будет проведено в двух сериях на 36 кроликах породы «Шиншилла» весом 4000 – 4500 грамм.

Аутожировая ткань будет забираться из сальника брюшной полости у 18 кроликов открытым способом с помощью специального шприца под внутримышечным наркозом 2% раствором Рометара и инфильтрационной анестезией 2 % раствора новокаина. Послеоперационная рана брюшной полости послойно ушивается кетгутом и викрилом. Полученная жировая ткань отправляться в лабораторию « Антиген», где будут приготавливаться аутологичные мезенхимальные стромальные клетки. Затем после их доставки в лабораторию начинается собственно эксперимент. Композит будет готовиться во время операции следующим образом: порошковый костный коллаген, гидроксилапатит в равных весовых пропорциях смешивается на стерильном стекле с последующим введением взвеси аутологичных мезенхимальных стромальных клеток и шпателем перемешивается с образованием густой пасты.

Экспериментальные животные будут распределены на две серии по 18 кроликов.

В первой серии эксперимента методика операции для обеих групп по 9 животных (основной и контрольной) будет одинаковой и заключается в следующем: Под внутримышечным наркозом 2% раствором Рометара и инфильтрационной анестезией 2% раствора новокаина производится разрез мягких тканей в поднижнечелюстной области длиной 3 см. Отслаиваются мягкие ткани и с помощью окончатой фрезы диаметром 1 см воспроизводятся стандартные сквозные дефекты нижнечелюстной кости в области её угла. Вместе с костным фрагментом резецируется и надкостница с обеих сторон челюсти. В контрольной группе животных воспроизведенные дефекты заполняются пастой из костного коллагена и гидроксилапатита, в подопытной же группе композитом в виде пасты из костного коллагена, гидроксилапатита и взвеси аутологичных мезенхимальных стромальных клеток. Введенный в послеоперационный дефект трансплантационный материал фиксируется мышечно – кожным лоскутом. Послеоперационная рана мягких тканей послойно ушивается кетгутом и викрилом.

Во второй серии эксперимента под таким же обезболиванием, как и в первой серии, кроликам в области центрального резца справа с помощью скальпеля и костной фрезы с вестибулярной поверхности альвеолярного отростка образуется слизисто - костный дефект ( экспериментальная рецессия )на одну треть длины корня. Животные разделяются на две группы. В котрольной группе эксперимента данной серии в дефект после соответствующей обработки оголенного корня зуба накладывается паста из костного коллагена и гидроксилапатита, закрывается пластинкой из аллокостного матрикса, подшитого викрилом к слизистой оболочки дефекта. В подопытной группе животных в дефект водится композитный материал на основе аутологичных мультипотентных стромальных клеток и закрывается пластинкой из аллкостного матрикса по аналогии с контрольной группой кроликов. Спустя 10 дней после оперативного вмешательства пластинка из аллокостного матрикса удаляется, а окончательно рана будет заживать вторичным натяжением.

Животные обеих серий будут выводиться из опыта путём введения в ушную вену 10 мл воздуха в сроки: 30, 90 и 120 суток после проведённой операции. У выведенных из опыта животных вычленяется послеоперационная половина нижней челюсти, проводится рентгенологическое исследование, а затем выпиливаются костные блоки в области оперативного вмешательства, фиксируются в 10% растворе нейтрального формалина, декальцинируется в азотной кислоте, обезвоживаются в спиртах, заливаются в парафин, готовятся серийные срезы толщиной 10-12 микрон и окрашиваются гематоксилин-эозином и по Вангизону.У животных второй серии дополнительно будет проводиться серийное фотографирование .

Клиническое исследование:

Клиническое исследование будет проведено у 30 больных с рецессией десневого края и 50 пациентов с одонтогенными кистами челюстей. Обе группы больных будут разделены на две подгруппы – основная и группа сравнения, соответственно по 15 и 25 больных. У больных основных групп жировая ткань для приготовления аутологичных мезенхимальных стромальных клеток будет забираться специальным шприцом из подкожно-жировой клетчатки в области живота.

В комплексном лечении больных с рецессией десневого края оперативное вмешательство будет проводиться по аналогичной методике, описанной в методах экспериментального исследования. При оперативном лечении одонтогенных кист челюстей диаметром более двух сантиметров будет использована общеизвестная методика цистэктомии с последующей пластикой послеоперационных костных полостей в группе сравнения трансплантационным материалом на основе костного коллагена и гидроксилапатита, а в основной группе композитным трасплантационным материалом на основе костного коллагена, гидроксилапатита и аутологичных мезенхимальных стромальных клеток. Оценка эффективности лечения будет проводится нами через 1 месяц, 3, 6, и 12 месяцев с использованием ортопантомографии и у 30 пациентов с рецессией десны фотографирование в те же сроки, что и рентгенография.