
- •I. Химические свойства белков
- •Работа с автоматической пипеткой
- •1.1 Реакция Фоля
- •1.2 Реакция Адамкевича
- •1.3 Реакция Сакагучи
- •1.4 Ксантопротеиновая реакция
- •1.5 Нингидриновая реакция
- •1.6 Обнаружение отпечатков пальцев на бумаге
- •1.7 Биуретовая реакция
- •II. Методы количественного определения белков
- •Работа со спектрофотометром
- •2.1 Метод ультрафиолетового поглощения
- •2.2 Биуретовый метод (микро-модификация)
- •III Методы анализа аминокислот
- •3.1 Радиальная хроматография
- •3.2 Тонкослойная хроматография
- •3.3 Определение содержания аминокислот формольным титрованием
- •IV Физико-химические свойства белков Коллоидные свойства
- •Диализ белков
- •Растворимость белков
- •4.2. Влияние нейтральных солей на растворимость белков
- •4.3 Осаждение при нагревании
- •4.4 Осаждение органическими растворителями
- •4.6 Осаждение органическими кислотами
- •4.7 Осаждение алкалоидными реактивами
- •4.8 Осаждение солями тяжелых металлов
- •Электрофорез белков
- •4.9 Электрофорез по Леммли
- •Вопросы к коллоквиуму по теме «Белки»
- •Использованная литература
- •Приложение. Плотность водных растворов hCl при 20°с
- •Плотности водных растворов hno3 при 20°с
- •Плотности водных растворов h2so4 при 20°с
- •Плотности водных растворов уксусной кислоты при 20°с
Работа со спектрофотометром
Для определения оптической плотности растворов используется спектрофотометр UVmini 1240 (Shimadzu, Япония). Данный прибор работает в интервале длин волн 190 – 1100 нм и собран по однолучевой схеме. Спектрофотометр (рис. 3) снабжен жидкокристаллическим дисплеем (1), отражающим состояние инструмента и значение оптической плотности; клавиатурой (2), служащей для управления и кюветным отделением (3), в которое помещается исследуемый раствор. Винты (4), находящиеся на передней поверхности прибора служат для крепления кюветодержателя внутри кюветного отделения.
Рис. 3. Спектрофотометр UVmini 1240. А – вид сверху. Б – вид спереди.
1 – жидкокристаллический дисплей, 2 – клавиатура, 3 – кюветное отделение, 4 – винты крепления кюветодержателя
На задней поверхности спектрофотометра (рис. 4) находится разъем для подключения сетевого шнура (1), отсек с плавкими предохранителями (2) и сетевой выключатель(3), необходимые для подключения электропитания. Также на задней поверхности прибора находятся разъемы для подключения персональному компьютеру (RS-232 – порт, 4), дополнительных модулей (5, 6) и принтера (7).
Рис. 4. Задняя поверхность спектрофотометра UVmini 1240.
Пояснения см. в тексте
Клавиатура спектрофотометра UVmini 1240 (рис. 5) служит для управления прибором. Кнопка «START/STOP» (1) служит для запуска измерения. Кнопка «AUTO ZERO» (2) служит для обнуления текущего значения оптической плотности, то есть установки начала отсчета для определения оптической плотности пробы. Кнопка «GOTO WL» (3) служит для установки длины световой волны, на которой проводятся измерения. Кнопка «ENTER» (4) служит для подтверждения ввода параметров работы прибора. Кнопки курсора (5) служат для перемещения по меню и изменения значения числовых параметров работы прибора. Функциональные кнопки (6) соответствуют функциям, обозначаемым в нижней строке дисплея прибора. Кнопка «RETURN» (7) служит для переключения между текущим и предыдущим окнами меню. С помощью кнопки «LCD CONT» (8) настраивается контрастность дисплея. Кнопка «PRINT» (9) позволяет вывести на печать текущий вид дисплея. Числовые клавиши (10) служат для ввода числовых значений (например, длины волны). Кнопка «CE» предназначена для сброса неправильных числовых значений.
Рис. 5. Клавиатура спектрофотометра UVmini 1240.
Пояснения см. в тексте
Для проведения измерений с помощью спектрофотометра, необходимо:
Подключить прибор к электрической сети.
Включить сетевой выключатель на задней поверхности прибора.
После включения прибора в сеть начинается самотестирование спектрофотометра – происходит проверка исправности всех его узлов
Дождаться окончания самотестирования прибора.
При успешном прохождении самотестирования на дисплее прибора появляется таблица, содержащая перечень проверенных узлов (рис. 6)
Рис. 6. Таблица самотестирования спектрофотометра UVmini 1240
По окончании самотестирования перейти в фотометрический режим.
После успешного самотестирования автоматически вслед за таблицей самотестирования на дисплее появляется меню для выбора режима работы спектрофотометра (рис. 7)
Рис.7. Меню выбора режима работы спектрофотометра UVmini 1240
Чтобы перейти в фотометрический режим работы необходимо на клавиатуре нажать «1» на числовой клавиатуре. После этого на дисплее появляется окно фотометрического режима спектрофотометра (рис. 8)
Рис. 8. Окно фотометрического режима.
После перехода в фотометрический режим установить длину световой волны, необходимой для измерения.
Для установки длины, волны необходимо нажать кнопку «GOTO WL», а затем ввести значение длины волны с числовой клавиатуры, по окончании нажать клавишу «ENTER». На дисплее появляется текущее значение длины волны и оптической плотности.
После установки длины волны необходимо установить нулевое значение оптической плотности.
От данного значения будет отсчитываться оптическая плотность исследуемых растворов. Для установки нуля в кюветодержатель установить кювету с раствором сравнения. Затем нажать кнопку «AUTO ZERO», значение оптической плотности на дисплее примет нулевое значение. Необходимо помнить, что при каждой смене длины волны и раствора сравнения необходимо заново устанавливать ноль оптической плотности.