4.4 Осаждение органическими растворителями
Белки нерастворимы во многих полярных органических растворителях (спирт, ацетон, и др.). Однако их осаждение происходит только из нейтральных и слабокислых растворов и особенно полно в присутствие электролитов. Органические растворители дегидратируют частицы белка (разрушают водную оболочку) и тем самым понижают их устойчивость в растворе.
Кратковременное воздействие этилового спирта или ацетона не нарушает естественной структуры белка, тогда как продолжительное воздействие приводит к денатурации.
Ход работы:
В пробирку наливают 0,5 мл 1%-ного раствора яичного белка и 2 мл спирта или ацетона. Отметьте наличие/отсутствие осадка
Затем добавить 0,2 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Отметьте наличие/отсутствие осадка
4.5 Осаждение концентрированными минеральными кислотами
Осаждение белка под действием минеральных кислот происходит не только вследствие дегидратации и нейтрализации заряда белковых частиц, но и в результате образования солей, денатурации. В избытке серной или соляной кислот, а также при их длительном воздействии выпавший осадок денатурированного белка растворяется, по-видимому, за счет перезарядки белка и частичного гидролиза. В избытке азотной кислоты этого растворения не происходит (точный механизм этого явления не установлен, возможно, что ион NO3- мешает перезарядке белковой молекулы).
Ход работы.
В три пробирки наливают по 15-20 капель концентрированной соляной, серной и азотной кислот. Затем наклонив пробирку под углом 45°, осторожно по стенке пробирки, чтобы жидкости не смешивались (подслоение) налить 1 мл 1%-ного раствора белка. На границе двух слоев жидкости появляется осадок белка в виде тонкой пленки. Осторожно встряхивая пробирки, обнаруживают растворение осадка белка в случае осаждения соляной и серной кислотами, в пробирке с азотной кислотой белок не растворяется
4.6 Осаждение органическими кислотами
Белки из растворов могут осаждаться органическими кислотами, однако различные органические кислоты неодинаково действуют на белок. Трихлоруксусная (CCl3COOH) и сульфосалициловая кислоты (рис. 13) являются чувствительными и специфическими реактивами, вызывающими осаждение белков, и поэтому широко используются для доказательства наличия белка в растворе. Сульфосалициловая кислота осаждает не только белки, но и высокомолекулярные полипептиды.
Рис. 13. Сульфосалициловая кислота
Ход работы.
В две пробирки наливают по 0,5 мл 1%-ного раствора белка, в одну пробирку добавляют 200 мкл 10%-ного раствора сульфосалициловой, в другую 200 мкл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Отметьте наличие/отсутствие осадка.
4.7 Осаждение алкалоидными реактивами
Осаждение «алкалоидными» реактивами обусловлено наличием в белке азотистых гетероциклических группировок аналогично тем, которые находятся в молекулах алкалоидов. (Алкалоиды – низкомолекулярные азотосодержащие вещества основного характера, обладающие высокой биологической активностью). Более полное осаждение наблюдается при отрицательном заряде белковой молекулы (например, при достаточном подкислении), что облегчает взаимодействие белка с отрицательно заряженными ионами осадителя.
Ход работы.
В три пробирки наливают по 1 мл 1%-ного раствора яичного белка, и по 200 мкл 1%-ного раствора уксусной кислоты. Затем в первую пробирку приливают 200 мкл 10%-ного раствора пикриновой кислоты (рис. 14), во вторую 200 мкл насыщенного раствора танина, в третью – 200 мкл 5%-ного раствора железосинеродистого калия. Отмечают образование осадка.
Рис. 14. Пикриновая кислота