
- •I. Химические свойства белков
- •Работа с автоматической пипеткой
- •1.1 Реакция Фоля
- •1.2 Реакция Адамкевича
- •1.3 Реакция Сакагучи
- •1.4 Ксантопротеиновая реакция
- •1.5 Нингидриновая реакция
- •1.6 Обнаружение отпечатков пальцев на бумаге
- •1.7 Биуретовая реакция
- •II. Методы количественного определения белков
- •Работа со спектрофотометром
- •2.1 Метод ультрафиолетового поглощения
- •2.2 Биуретовый метод (микро-модификация)
- •III Методы анализа аминокислот
- •3.1 Радиальная хроматография
- •3.2 Тонкослойная хроматография
- •3.3 Определение содержания аминокислот формольным титрованием
- •IV Физико-химические свойства белков Коллоидные свойства
- •Диализ белков
- •Растворимость белков
- •4.2. Влияние нейтральных солей на растворимость белков
- •4.3 Осаждение при нагревании
- •4.4 Осаждение органическими растворителями
- •4.6 Осаждение органическими кислотами
- •4.7 Осаждение алкалоидными реактивами
- •4.8 Осаждение солями тяжелых металлов
- •Электрофорез белков
- •4.9 Электрофорез по Леммли
- •Вопросы к коллоквиуму по теме «Белки»
- •Использованная литература
- •Приложение. Плотность водных растворов hCl при 20°с
- •Плотности водных растворов hno3 при 20°с
- •Плотности водных растворов h2so4 при 20°с
- •Плотности водных растворов уксусной кислоты при 20°с
Растворимость белков
Большинство белков хорошо растворимо в воде, что обусловлено наличием на «поверхности» их молекул полярных и заряженных групп, способных связываться с молекулами воды (то есть гидратироваться). Гидратация молекул белка - обязательное условие их растворения. Боковые радикалы некоторых аминокислот, способны диссоциировать в воде и формировать ионные группы, несущие заряд. Заряженные группы белка активно взаимодействуют с молекулами воды за счет ион-дипольных взаимодействий. Боковые радикалы других аминокислот не заряжены, но сильнополярны (-NH2-группа аспарагина и глутамина, - ОН-группа серина и треонина) образуют с молекулами воды водородные связи.
Растворимость белков сильно зависит от условий среды. Растворимые белки при определенных условиях могут терять растворимость и выпадать в осадок. Осаждение белков используют для их выделения и фракционирования, а также получения безбелковых фильтратов в исследовательской и производственной практике.
Чтобы добиться выпадения белка в осадок нужно либо снизить заряд белковых молекул, либо разрушить их гидратную оболочку (дегидратировать).
Реакции осаждения белков делят на две группы:
1) необратимые реакции осаждения, при которых белки претерпевают глубокие изменения и не могут быть снова растворены в первоначальном растворителе.
2) обратимые реакции осаждения, при которых осажденный белок может быть вновь растворен
В первом случае наступает денатурация, т.е. изменение нативной конформации белка сопровождающаяся утратой биологической активности. К необратимым реакциям относится осаждение белка солями тяжелых металлов, алкалоидными реактивами, минеральными и органическими кислотами и осаждение при нагревании. Во втором случае осаждаемые белки не подвергаются глубоким изменениям, молекула белка при этом сохраняет свои первоначальные, нативные, включая биологические, свойства и не подвергается заметной денатурации. К обратимым реакциям осаждения следует отнести осаждение белков органическими растворителями (спиртом и ацетоном) и высаливание белков нейтральными солями.
В качестве отчета о проделанной работе (работы 4.2 - 4.8) заполните таблицу
Белок |
Использованный осадитель и его концентрация |
Осадок (есть/нет) |
||
альбумин |
дистиллированная вода |
|
||
глобулин |
|
|||
альбумин |
5% NaCl |
|
||
глобулин |
|
|||
альбумин |
полунасыщенный раствор (NH4)2SO4 |
|
||
глобулин |
|
|||
альбумин |
насыщенный раствор (NH4)2SO4 |
|
||
яичный белок (1%) |
нагревание |
нейтральная среда |
|
|
слабокислая среда |
|
|||
сильнокислая среда |
|
|||
сильнокислая среда + электролит |
|
|||
щелочная среда |
|
|||
этанол |
|
|||
этанол + NaCl |
|
|||
H2SO4 конц. |
подслоение |
|
||
смешивание |
|
|||
НCl конц. |
подслоение |
|
||
смешивание |
|
|||
HNO3 |
подслоение |
|
||
смешивание |
|
|||
трихлоруксусная кислота |
|
|||
сульфосалициловая кислота |
|
|||
пикриновая кислота |
|
|||
танин |
|
|||
железосинеродистый калий |
|
|||
сульфат меди |
|
|||
ацетат свинца |
|