
- •Предисловие
- •Глава 1. Основы клинической лабораторной диагностики
- •Клиническая лабораторная диагностика взаимосвязана с такими дисциплинами, как:
- •Основные требования к помещению медицинских лабораторий
- •Техника безопасности (тб)
- •Методы разделения компонентов биоматериала
- •Оптические методы количественного анализа
- •Глава 2. Доказательная лабораторная медицина
- •Глава 3. Преаналитический этап лабораторных исследований
- •Система очистки воды (Elix).
- •Ультразвуковая посудомоечная машина
- •Инструкция по проведению преаналитического этапа работы
- •1. Общая информация
- •2. Консультации и эффективность
- •4. Форма заявки
- •5. Информация о подготовке пациентов
- •6. Сбор проб
- •7. Транспортировка и обработка проб
- •8. Экспериментальные исследования
- •10. Конфиденииальность и безопасность
- •Памятка для пациента Общеклиническое исследование крови
- •Памятка для пациента Общеклиническое исследование мочи
- •Памятка для пациента Проба Нечипоренко
- •Памятка для пациента Исследование мочи по Зимницкому
- •Учебная задача. Анализ клинической ситуации
- •Глава 4. Общеклинические лабораторные исследования Общеклиническое исследование мочи
- •Физические свойства
- •Патологические примеси в моче
- •Микроскопическое исследование осадка
- •С хема 4.1. Логическая схема оценки нефротического синдрома
- •Фаза полиурии Протеинурия
- •Исследование мочи Исследование крови Цилиндрурия
- •Изостеинурия рИзостеинурия Гематурия
- •Гипер- фосфатемия
- •Цилиндрурия
- •Протеинурия
- •Изостеинурия Изостеинурия
- •Гематурия
- •Гипокальциемия Метаболический ацидоз
- •Проба по Нечипоренко
- •Экспресс - анализатор мочи «Doc-u-Reader»
- •Определяемые параметры мочи
- •Общеклиническое исследование мокроты
- •Исследование мокроты методом флотации
- •Слизь из носа
- •Общеклиническое исследование спинномозговой жидкости
- •Показатели спинномозговой жидкости при патологии
- •Общеклиническое исследование желудочного содержимого
- •Показатели желудочного содержимого при заболеваниях
- •Микроскопическое исследование желчи
- •Общеклиническое исследование кала
- •Копрограмма при патологии
- •Простейшие в кале
- •Общеклиническое исследование отделяемого из влагалища
- •Общеклиническое исследование отделяемого из уретры
- •Общие свойства
- •Микроскопическое исследование
- •Общеклиническое исследование семенной жидкости
- •Макроскопическое исследование
- •Микроскопическое исследование
- •Глава 5. Лабораторная гематология
- •Некоторые параметры общеклинических исследований крови
- •Гемоглобин
- •Концентрации гемоглобина.
- •Гематокрит
- •С хема 5.1. Формула гематокрита
- •Количество эритроцитов
- •Увеличением количества эритроцитов
- •Среднее содержание гемоглобина в эритроците (мсн)
- •Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (мнс)
- •Показатель распределения эритроцитов по объему (rdw)
- •Цветовой показатель
- •Количество тромбоцитов
- •Количество лейкоцитов
- •Лейкоцитарная формула крови
- •Лейкоцитарной формулы
- •Нейтрофилы
- •Базофилы
- •Лимфоциты
- •Содержания лимфоцитов
- •Моноциты
- •Изменения морфологии эритроцитов
- •Изменения размера
- •Изменение формы
- •Изменения окраски
- •Изменения морфологии лейкоцитов
- •Скорость оседания эритроцитов (соэ)
- •Ретикулоциты
- •Лабораторные показатели и индексы крови (референс-диапазоны)
- •Гематокрит – мужчины: 40-48%, женщины: 36-42%
- •У детей первого года жизни
- •У детей старше одного года
- •План (последовательность) клинической интерпретации результатов оак
- •Некоторые изменения лабораторных параметров крови и моче
- •Изменения периферической крови при воспалительных заболеваниях
- •Изменения периферической крови при анемиях
- •Картина крови при железодефицитной анемии:
- •Картина крови при гипо-и апластической анемии:
- •Острая постгеморрагическая анемия
- •Картина крови гемолитической анемии:
- •Картина крови при мегалобластных анемиях (в12 –фолиеводефицитной анемии):
- •Мегалобластные анемии
- •Гемобластозы
- •Острые лейкозы
- •Стадии острого лейкоза
- •Диагностика острых лейкозов
- •Острые нелимфобластные лейкозы
- •Классификация острых нелимфобластных лейкозов
- •Острые лимфобластные лейкозы
- •Хронический миелолейкоз
- •Картина крови при хроническом миелолейкозе (фаза акселерации):
- •Картина крови при хроническом лимфолейкозе:
- •Международная классификация хронического лимфолейкоза
- •Автоматический гематологический анализатор - Sysmex kx-21n Фирма"Medical Electronics"(Япония)
- •Анализатор соэ – Ves-Static (фирма «Hospitex Diagnostics», Швейцария-Италия)
- •Карта: считывающее устройство для микропроцессорной карты разработано в соответствии с международными правилами iso 7816.
- •Условия работы: температура – от 15º с до 40º с, питание – 12в постоянного тока, адаптор – 220в, 50 Гц.
- •Анализ клинической ситуации. Учебная задача 1.
- •Анализ клинической ситуации. Учебная задача 2.
- •Тромбоциты - 185 х109/л
- •Общий белок - 81 г/л
- •Глава 6. Лабораторная коагулогия
- •Характеристика тромбоцитов
- •Структура тромбоцитов
- •Основные функции тромбоцитов:
- •С хема 6.4. Основные механизмы фунционирования фибринолитической (плазминовой) системы
- •Исследования системы гемостаза Сосудистый компонент гемостаза.
- •Тромбоцитарный компонент гемостаза Показатели, характеризующие тромбоцитарный компонент гемостаза:
- •Длительность кровотечения (по Дюку)
- •Плазменный (коагуляционный) гемостаз Оценка первой фазы плазменного гемостаза – образование протромбиназы
- •Система гемостаза при заболеваниях
- •Геморрагические диатезы
- •Геморрагический васкулит Шенлейна-Геноха
- •Лабораторные исследования при геморрагическом васкулите Шенлейна-Геноха
- •Геморрагические диатезы, обусловленные недостаточностью тромбоцитарного звена
- •Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура
- •Лабораторные исследования при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре
- •Тромбоцитопатии
- •Лабораторные исследования при наследственной тромбоцитопатии (тромбастения Гланцманна)
- •Геморрагические диатезы, обусловленные дефицитом плазменных факторов свертывания
- •Гемофилия а
- •Гемофилия в
- •Гемофилия с
- •Болезнь Виллебранда
- •Гемолитическая болезнь новорожденных
- •Лабораторные исследования при гемолитической болезни новорожденных:
- •Диссеминированное внутрисосудистое свертывание
- •Классификация острой формы двс-синдрома
- •В динамике двс-синдрома
- •Лабораторные исследования при двс-синдроме
- •Показатели гемостаза
- •Экспресс-диагностика двс-синдрома
- •Клиническая интерпретация коагулограмм
- •Автоматический коагулометр Clot - 1 a Фирма "Hospitex Diagnostics" (Италия)
- •Анализ клинической ситуации. Учебная задача
- •Глава 7. Лабораторная биохимия
- •«Сухая» химия и экспресс-диагностика.
- •Клинико-диагностическое значение определения активности аминотрансфераз в сыворотке крови
- •Клинико-диагностическое значение определения активности фосфатаз
- •Клинико-диагностическое значение определения общей активности лдг и ее изоферментов
- •Клинико-диагностическое значение определения активности креатинфосфокиназы
- •Клинико-диагностическое значение определения активности панкреатической липазы
- •Исследование белкового обмена
- •Заболеваний внутренних органов
- •Особые (патологические) белки крови
- •Остаточный азот крови и его компоненты
- •Биохимические исследования крови (референтные уровни) Ферменты
- •Белковый обмен
- •Лабораторная биохимия углеводов и липидов
- •Регуляция содержания глюкозы в крови
- •Характеристика сахарного диабета будет описана в главе 10 «Гормональные исследования». Гликолизированный гемоглобин
- •Клинико-диагностическое значение определения содержания сиаловых кислот в сыворотке крови
- •Клинико-диагностическое значение исследования пировиноградной кислоты в крови
- •Клинико-диагностическое значение определения содержания молочной кислоты в крови
- •Исследование обмена липидов
- •Клинико- диагностическое значение определение уровня общих липидов в плазме (сыворотке) крови
- •Клинико-диагностическое значение исследования холестерола (хс) в сыворотке (плазме) крови
- •Клинико-диагностическое значение исследования концентрации общих фосфолипидов в сыворотки крови.
- •Состав и свойства липопротеинов плазмы крови
- •Система «перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита организма»
- •Антиоксидантные системы
- •Биохимические исследования (референтные величины) Углеводный обмен Глюкоза в цельной крови – 3,5-6,0 ммоль/л
- •Связанного («прямого») билирубина
- •Биохимический анализатор – «Cobas Integra 400 plus»
- •Экспресс - анализатор крови Рефлотрон Плюс ( Reflotron Plus ) Фирма"Roche" (Германия).
- •Анализ клинической ситуации. Учебная задача 1.
- •Анализ клинической ситуации. Учебная задача 2.
- •Глава 8. Молекулярно-генетические исследования
- •Протокол исследования
- •Взятие образцов
- •Выделение нуклеиновых кислот из биологического материала
- •Амплификация (умножение специфических фрагментов днк)
- •Детекция результатов реакции
- •Пцр с детекцией результатов в режиме реального времени
- •Приборы для количественного учета пцр в режиме реального времени
- •Методы молекулярной клинической диагностики при скрининге (массовых обследованиях)
- •Применение пцр диагностики в гематологии и онкологии
- •Гастроэнтерология и гепатология
- •Изучение наследственных болезней и предрасположенностей к различным заболеваниям
- •Перспективы развития молекулярно-генетических исследования
- •Этапы пцр-анализа
- •Д етекция продуктов амплификации
- •Глава 9. Лабораторная диагностика при неотложных состояниях
- •С хема 9.1. Метаболические нарушения при некоторых коматозных состояниях
- •Гематология
- •Биохимия
- •Т аблица 9.1. Шкала тяжести полиорганной недостаточности
- •Анализ клинической ситуации (учебная задача) №1
- •Анализ клинической ситуации (учебная задача) №2
- •Глава 10. Гормональные исследования
- •Исследования функции гипофиза
- •С хема 10.1. Гормоны гипоталамуса, гипофиза и эндокринных желез
- •Клеточные механизмы действия тиреоидных гормонов
- •1. Периферическое дейодирование т4
- •2. Действие на плазматическую мембрану
- •3. Действие на митохондрии
- •4. Ядро
- •Исследование функции надпочечников
- •Исследование функции мозгового вещества надпочечников
- •Исследование функции коры надпочечников
- •Исследование гормональной функции половых желез
- •Вторичные посредники
- •Клеточные механизмы действия адг
- •Система ренин-ангиотензин-альдостерон
- •Механизм действия альдостерона
- •Биологическое действие тиреоидных гормонов
- •Гормональные исследования в диагностике врожденных и наследственных заболеваний
- •Задания в тестовой форме:
- •9.Когда, наиболее вероятно начался первый этап внедрения Единой национальной системы здравоохранения (енсз) :
- •10.Что из перечисленного, наиболее вероятно, является определением медицинской деятельности:
- •Межотраслевой стандарт
- •42.Какой показатель красной крови определяет деление анемий на гипо, нормо- и гиперхромные:
- •43.В лабораторном отделении общеклиническое исследования крови проводилось на автоматическом анализаторе. Какие показатели, наиболее вероятно, характеризуют состояние клеток белой крови:
- •85. Что из перечисленного, наиболее вероятно отражает показатель rdw, регистрируемый гематологическими анализаторами:
- •86. Какое патологическое состяние, наиболее вероятно, сопровождается увеличением бластов при клеточном или гиперклеточном костном мозге:
- •89. Назовите наиболее информативный маркер синдрома холестаза
- •90. Назовите наиболее информативный маркер синдрома цитолиза
- •94. При классическом ра ревматоидный фактор определяется у:
- •97. Назовите тип протеинограммы, соответствующий циррозу печени:
- •98. Какими лабораторными методами, наиболее вероятно, в крови определяют онкомаркеры?
- •116.Что из перечисленного, наиболее вероятно, отмечается при остром лейкозе:
- •117.Какой метод лабораторных исследований, наиболее вероятно, позволяет дифференцировать острые лимфо- и нелимфобластные лейкозы:
- •301. Ранним неспецифическим признаком инфаркта миокарда является:
- •Список рекомендуемой литературы:
Протокол исследования
ПЦР в диагностической лаборатории является достаточно сложной, многоступенчатой методикой, требующей правильного выполнения всех процедур. Ниже изложены основные специфические требования к процессам взятия образцов, выделения наследственного материала, выполнения амплификации и регистрации результатов, т.е. преаналитической, аналитической и постаналитической стадии исследования.
Взятие образцов
Клиническим материалом для исследования методом ПЦР могут служить соскобы эпителиальных клеток, кровь, плазма, сыворотка, плевральная и спинномозговая жидкости, моча, мокрота, слизь и другие биологические выделения, биоптаты. Однако в большинстве анализов в качестве образца используют соскоб эпителиальных клеток и сыворотку крови пациента. К особенностям метода следует отнести то, что материал, необходимый для исследования, должен потенциально содержать искомую ДНК (например, в абсолютном большинстве случаев невозможно детектировать в крови микроорганизм Chlamydia trachomatis, так как это внутриклеточный паразит эпителиальных клеток урогенитального тракта).
Выделение нуклеиновых кислот из биологического материала
В зависимости от поставленных задач используют различные методики для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала. Суть методик заключается в экстракции из исследуемого образца нуклеиновых кислот и нейтрализации ингибиторов ПЦР.
В настоящее время существуют экспресс-методики выделения ДНК, позволяющие за сравнительно небольшое время обрабатывать много образцов с минимальными трудозатратами. Если перед лабораторией стоит задача получить более чистый препарат ДНК или детектировать низкокопийный образец, существуют методики, позволяющие провести очистку с высокой чистотой, но требующие больших трудозатрат.
Амплификация (умножение специфических фрагментов днк)
На данной стадии происходит накопление коротких специфических фрагментов ДНК в количестве, необходимом для их дальнейшей детекции.
Детекция результатов реакции
Регистрировать результат ПЦР можно либо по завершении реакции («по конечной точке»), либо на протяжении всей реакции (в реальном времени). Классическая ПЦР предполагает анализ результатов реакции по «конечной точке». Для этого используют методы электрофореза в геле, гибридизационно-ферментный анализ (ГИФА), флюоресцентную детекцию после ПЦР (FLASH) и др. Различные методы детекции результатов ПЦР имеют свои преимущества и недостатки, и, как правило, их выбирают в зависимости от задач, решаемых лабораторией. Для выявления количества ДНК в исходной пробе и наблюдения за кинетикой процесса в современных лабораториях используют метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени.
Пцр с детекцией результатов в режиме реального времени
Метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени предусматривает автоматическую регистрацию увеличения флюоресцентного сигнала, пропорционального количеству синтезированных в ходе реакции специфических фрагментов ДНК (микроорганизмов, человека, животных и т.д.).
Реакция выполняется и автоматически регистрируется специализированными приборами для осуществления ПЦР в режиме реального времени. Программное обеспечение оборудования может автоматически переводить полученные данные в удобный для чтения врача-лаборанта формат.
В зависимости от исходной концентрации специфических нуклеиновых кислот (микроорганизмов, человека и т.д.) в исследуемом образце переход из стадии инициации в экспоненциальную стадию происходит на разных циклах. Чем больше в образце искомой ДНК, тем на более раннем цикле прибор начнет регистрировать флюоресценцию; чем меньше искомой ДНК, тем на более позднем цикле начнется автоматическая регистрация флюоресценции.
Метод ПЦР с детекцией результатов в процессе амплификации предоставляет возможность количественно оценивать ДНК микроорганизмов в исходном материале, а также использовать мультиплексный анализ (анализ результатов по нескольким каналам детекции), что дает возможность выявлять большее количество микроорганизмов в каждой пробирке.
Преимущества методов молекулярной клинической диагностики
Основным преимуществом метода ПЦР при диагностике инфекционных агентов по сравнению с классическими микробиологическими методами (культивированием и идентификацией клинических изолятов) является быстрота исполнения (5-6 ч). В сравнении с иммунологическими определениями (например, иммуноферментными или иммунофлюоресцентными методами выявления антигенов).
ПЦР во многих случаях является более чувствительным и экономичным методом (по крайней мере, на отечественном рынке соответствующих реагентов). В частности, при диагностике вирусных инфекций, особенно гепатита С, вирусную РНК в плазме больных обнаруживают с первых дней заболевания, тогда как специфические антитела (основной объект иммунологического скрининга при гепатите С) - только спустя 2-7 нед после заражения. При диагностике папилломы молекулярно-биологические методы позволяют дифференцировать онкогенные и менее патогенные типы вируса, а также идентифицировать вирус, интегрированный в хромосомы человека, т.е. предраковые состояния.
При идентификации генетических заболеваний (инактивации белка из-за генной мутации) ДНК-диагностика стала более практичным методом выявления больных и членов семей - носителей мутантного гена по сравнению с биохимическими методами определения соответствующих метаболитов. Молекулярно-биологические методы особенно важны для диагностики наследственных заболеваний, для которых неизвестен четкий биохимический субстрат или соответствующая биохимическая диагностика весьма дорога. Прогресс генной диагностики связан с успешным завершением проекта «Геном человека», в результате которого стала известна нормальная последовательность нуклеотидов в 99,9% генов человека. При подозрении на наличие редких мутаций гена проводят амплификацию и последующее секвенирование выделенного сегмента. Медико-генетические исследования касаются в первую очередь наиболее распространенных генетических заболеваний - муковисцидоза, фенилкетонурии, миодистрофий.
При выявлении онкогенов, специфичных для различных злокачественных заболеваний, особенно лейкозов и лимфом, ПЦР-диагностика (при необходимости с последующим секвенированием продукта ПЦР) становится методом диагностики, превосходящим иммунохимические способы диагностики (иммуно-гистологические, проточно-флюориметрические) по чувствительности и часто по экономичности исследования.