Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
2modul_MIKRA.doc
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.07.2025
Размер:
132.61 Кб
Скачать

19. Методы культивирования анаэробов

Культивирование всех видов бактерий производят в анаэробных условиях. Анаэробные условия можно создать при культивировании в анаэростате (на дно устанавливается свеча или наливается щелочной раствор пирагола, поглощающий кислород) и биологическим методом по Фортнеру или Малкиной.

М-д по Фортнеру. Чашку Петри с толстым слоем питательного агара делят пополам, вырезанной полоской. На одну половину сеют культуру аэроба, на другую анаэроба. Чашку заливают парафином и помещают в термостат. Сначала растут аэробы. Когда они исчерпают весь кислород, начинается рост анаэробов.

При посеве по Малкиной используют 2 пробирки со скошенным МПА соединенных трубкой. В одну сеют культуру аэробов, в другую – анаэробов. Сначала растут аэробы. Когда они исчерпают весь кислород, начинается рост анаэробов.

Посевы анаэробов производят на среде Китта- Тароцци, которая состоит из МПБ. 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша. Перед посевом среду прогревают на водяной бане 10-15 минут. Для удаления воздуха остужают. После посева среду заливают слоем вазелинового масла или парафином, с целью изоляции от атмосферного воздуха

20. Биохимические свойства бактерий.

Они определяются способностью синтезировать разнообразные ферменты (сахаролитические и протеолитические), образовывать пигменты, токсины. Пигменты образуют на все бактерии. Ех: белый, золотистый, лимонно-жёлтый стафиллококки, желтый кремовый микобактерии туберкулеза. Пигменты защищают микробную клетку от ультрафиолетовой радиации.

У бактерий выделяют эндо и экзо ферменты. Эндо ферменты располагаются в цитоплазме и ЦПМ. Экзо ферменты выделяются в окружающую среду. У бактерий различают 3 основные группы ферментов:

1.конститутивные - постоянно синтезируются в микробных клетках

2.индуцибельные - синтез которых индуцируется определенным субстратом.

3. репрессибельные – синтез их подавляется в результате избыточного накопления продукта реакции катализируемой данным ферментом.

Ферментативность бактерий определяется сахаролитическими и протеолитическими свойствами.

Определение сахаролитических ферментов проводят на средах Гисса (состоит из 1% пептонной воды, 0.5 % определенного углевода.Индикатор Андрнде). В пробирку со средой опускают поплавок для улавливания газообразных продуктов. Свежеприготовленная среда имеет соломенно-желтый цвет. При разложении углеводов, приобретает красный цвет, в результате сдвига рН в кислую сторону.

Для определения протеолитических ферментов производят посев уколов исследуемой культуры в столбик МПЖ. Продолжительность культивирования 7-10 суток при комнатной t. При положительном результате наблюдается разжижение желатины.

О протеолитической активности бактерий чаще судят по способности расщеплять белок до продуктов распада (индол и сероводород). Для этого исследуемую культура засеивают на МПБ между горлышком пробирки и пробкой устанавливают индикаторные бумажки. На сероводород инд. Бумажка пропитана уксуснокислым свинцом. (при выделении сероводорода она чернеет). А на индол индикаторная бумажка пропитана раствором щавелевой кислоты (при его выделении - краснеет)

Так же для изучения биохимических свойств используется система индикаторная бумажная (СИБ) или мультимикротесты (ММТ).

СИБ- набор бумажных дисков, пропитанных различными субстратами и индикаторами. ММТ - такие пластиковые планшеты, в лунках которых находятся различные субстраты с индикаторами, на которые наносят взвесь изучаемой культуры.после суточного инкубирования в термостате судят по биохимических свойствах культуры.