3. Каллус типов и кондиционирования

Культивированный сахарной свеклы эксплантов, как правило, выделяют два типа мозоль; белые рыхлые каллус с сот большого размера и компактной зеленой каллус с малых ячеек (Saunders и мазня, 1984; Nakashima etal., 1988; Ритчи etal., 1989; Konwar и Coutts, 1990; Симамото et al, 1993; Чжун et al, 1993b; выступивший на церемонии с речью et al, 2001). Несколько исследований показали, что органогенного потенциал, связанных с каллус типа. Белый рыхлый каллус производит " корни и побеги " (Saunders и мазня, 1984; Konwar и Coutts, 1990; выступивший на церемонии с речью et al., 2001 года; Симамото et al., 1993), в то время как зеленый, компактный каллус имеет мощности органогенного образования (Ritchie et al., 1989; Tetu et al., 1987). Гистологические исследования показали, что органогенного образования костной мозоли имеет регионов клеток меристемы вблизи поверхности (Abe et al., 1991); побеги из этих регионов, как считается, органогенные (Ю., 1989). Последние электронной микроскопии, посмотрел на цитологии эмбриогенного и nonembryogenic каллус показали, что клетки из двух каллус типы были отмечены различия в структуру клеток и органелл содержание (Могаддам и Таха, 2005). Клетки от nonembryogenic каллус, скорее всего, будет полиплоидных, имеют шероховатую эндоплазматический ретикулум, polysomes, поли-ядрышек и неполной стенки клеток, ведущие к ненормальным секционирования. Клетки от эмбриогенного каллуса было vacuolated цитоплазме, нормальных клеточных стенок и разделение структуры и высокое соотношение ядерных к цитоплазматической области.

Несколько групп, полученные привыкли (гормона-автономной) каллус, не требует каких-либо экзогенных регуляторов роста растений либо распространение или стрелять регенерации (De Greef и Jacobs, 1979; Saunders и мазня, 1984; Ван Geyt и Jacobs, 1985; Saunders и голени, 1986; Масуда et al., 1988). Ван Geyt и Якобса (1985) сообщили, что цитокинин привыкание происходит спонтанно, но ауксина привыкание происходит только после последовательного снижения внешних концентрации гормонов. Оба типа привыкания, являются обратимыми и независимые ячейки типа эксплантов источника; привыкшей природу, как теряется следующей регенерации и должен быть вновь индуцированного. Сондерс (1998) выпустила два клона сахарной свеклы (REL-1 и REL-2) с высокой ca-мощность для съемки регенерации из каллуса и низкой частоты стеклования. Суспензии клеток от REL-1 была относительно низкой гормонов автономного потенциала для соматического эмбриогенеза (Tsai и Сондерс, 1995 г.); тем не менее, потенциал для соматических embryogen - esis резко возросла, когда в клетках, полученных экзогенные гормоны, указывая на недостаточную эндогенных гормонов, чтобы вызвать определенные типы развития в условиях in vitro.

Детальные исследования проводились также по сравнению органогенного образования и курение органогенного привыкли ячеек в зависимости от нескольких параметров, например, уровень активности пероксидазы и ингибиторы, ауксина содержание и протекторы (Kevers et al., 1981a,b), кальций-контролируемых секрецию пероксидазы на суспензию клеток (Гаспар et al., 1983; Kevers etal., 1982,1983) andpolyamine этилена и метаболизм (бис - бис et al., 2000). Органогенного образования костной мозоли содержат более высокие уровни активности пероксидазы и ауксина-протекторы, предположительно, ведущих к ауксин-бензиламинопурина отношение совместимый с shoot индукции. Основываясь на понятии обратной зависимости между уровнями ТВ - оксидазы деятельности и роста клеток, Joersbo et al. (1989) изучали воздействие повышенной пероксидазы уровней (более 200 раз), на экономический рост сахарной свеклы клеток в суспензии но не отмечалось снижение. Roussy et al. (1996 г.), который сообщил, выше стрелять регенерации из каллуса от парниковых выращенные растения, обработанные TIBA, обнаружил, что ТДЗ обработанные растения обладали более высокой пероксидазной активности. Они предложили, чтобы экзогенных TIBA изменяет количество растительного пероксидазы, и, возможно, ауксина/цитокинин отношение пользу повторной генерации побегов, поскольку основные пероксидазы деградировать и контрольные уровни эндогенных индол-уксусная кислота (IAA) (Kevers et al., 1981b).

C. Гаплоидных Растений Производства

Способность генерировать гаплоидных растений позволяет в течение короткого периода времени производство серии гомозиготных линий разведения от данного генотипа. Она также позволяет индукции и обнаружения рецессивных мутаций. Поскольку классические работы Guh и Махешвари (1964) в Datura inoxia, производство гаплоидных растений успешно применяется на многих видов растений, в основном для разведения. В сахарной свеклы несколько классических методов, например, природные polyembryony, пыльца облучения и кресты между диплоидных и тетраплоидных линий или диких видов, привели к очень низкой доходности (Yuce, 1973; де Йонг и De Bock, 1978; Педерсен и Keimer, 1996). Два in vitro подходы были использованы, чтобы вызвать гаплоидных растений, андрогенным и gynogenesis. В андро - генетических пути оказалась неудачной, производить только мозоль от микроспории (Ван Geyt et al., 1985; Speckman et al., 1986), каллус корней и пыльники (Banba и Танабе, 1972; Welander, 1974; Rogozinska и Goska, 1976) и диплоидных растений из пыльника-производные каллюс (Rogozinska et al., 1977; Rogozinska и Goska, 1982). Наиболее подходящий этапе microspore каллусных клеток для распространения поздно мейоз-начале uninucleate (Ван Geyt etal., 1985).

В отличие от этого, гиногенетического путь успешно эксплуатировались в сахарной свеклы. Hosemans andBossoutrot (1983) firstre - х гаплоидных растений, производства, культивирования неоплодотворенных яйцеклеток из мужчин-стерильных растений. Вскоре после того, индукция гаплоидов из яйцеклетки, у мужчин-плодородные генотипов была продемонстрирована (Bossoutrot и Hosemans, 1985; Ван Geyt et al., 1987). С того времени, получение гаплоидов из неоплодотворенных яйцеклеток была достигнута (D'Halluin и Keimer, 1986; Доктринальные et al., 1989; Galatow - itsch и Smith, 1990; Lux et al., 1990; Ragot и Стин, 1992; Svirshchevskaya et al, 1993; Hansen et al, 1994, 1995, 1998, 2000; выступивший на церемонии с речью, 2000). Весь женский орган (яичников) был также использован для гаплоидных растений, производство, если мозоль от диплоидных клетках тканей яичника была удалена и яйцеклеток переданы ауксина-бесплатно среде с 0,5% угля (Ван Geyt et al., 1987).

Производство полностью гомозиготных, вдвое гаплоидов (ди - гаплоидов) было достигнуто за счет удвоения хромосом рассматривая гаплоидов с Анти-митотического агентов, в первую очередь колхицина в том числе в культурной среде, либо при умножении (Bossoutrot и Hosemans, 1985; Ragot и Стин, 1992; выступивший на церемонии с речью et al., 2000,2003c) или непосредственно в яйцеклетку культуры этапе (Hansen et al., 1994). Несколько других агентов, в том числе и amipro-phosmethyl (APM), pronamide, трифлуралина и оризалин, были также проверены (Hansen et al., 1998, 2000); APM была наиболее эффективной. В сравнительном исследовании, трифлуралина было так же эффективно, как колхицина, хотя и в значительно меньших концентрациях (выступивший на церемонии с речью et al., 2000) и, таким образом, было настоятельно рекомендуется, потому что это намного дешевле, и по сообщениям, менее токсичен (Zhao et al., 1996).

Наиболее гаплоидных растений из неоплодотворенных яйцеклеток были от прямого эмбриогенеза. Как показано на изучении гистологии развивающихся эмбрионов, Ferrant и Bouharmont (1994) сообщили, что жизнеспособные гиногенетического эмбрионов произошли только от яйцеклетки. В других видах, кроме яйцеклетки, synergids и antipodals также способны проходят эмбриогенеза или каллусообразования (Mukhambetzhanov, 1997).

Генотипической изменчивости является серьезной проблемой для общего успеха гаплоидных растений продукции из неоплодотворенных яйцеклеток сахарной свеклы (Доктринальных et al., 1989; Lux et al., 1990; Hansen et al., 1995; выступивший на церемонии с речью et al., 2000). Физические и химические свойства культурной среды также являются важными. Помимо угля увеличилась частота формирования эмбриона (D'Halluin и Keimer, 1986; Выступивший на церемонии с речью et al., 2000), но включение AgNO3 уменьшился или полностью подавлял их формирования (выступивший на церемонии с речью et al., 2000). Холодная подготовка бутоны индуцирует гаплоидных эмбрионов (выступивший на церемонии с речью et al., 2000), хотя предыдущие исследования, о которых сообщается не влияет (D'Halluin и Keimer, 1986). Физические свойства культурной среды, используемые для борьбы с митотического лечения были также важно при удвоении хромосом. Более высокие цены (на 29,1%) были замечены, когда гаплоидные побеги были погружены в жидкой среде и культивирования на агарозе - или агар-твердеющих среднего, на 20,7% и 15,4%соответственно (выступивший на церемонии с речью et al., 2000).

Цветок органов сахарной свеклы, были также использовать в качестве альтернативного источника для регенерации растений от пыльники (Banba и Tanebe, 1972; Rogozinska et al., 1977; Rogozinska и Goska, 1982) и яичников (Galatowitsch и Smith, 1990; Wang et al. 1991; выступивший на церемонии с речью и выступивший на церемонии с речью, 1998; Mezei et al, 2002); другие, однако, отметил, что развитие полиплоидных растений произошло на высоких частотах (Bossoutrot и Hosemans, 1985; Ван Geyt et al., 1987). Культивирование яичников в темноте за две недели до перехода в светлых/темных условиях привело к значительно более диплоидных побеги из яичника-производные каллус, чем те, которые постоянно в темноте (выступивший на церемонии с речью и выступивший на церемонии с речью, 1998). Galatowitsch и Смит (1990 г.) сообщила, что придаточные стрелять регенерации возникла в основном из диплоидных клеток яичника ткани, если они не были спонтанно вдвое гаплоидов, а также о которых сообщали другие (D'Halluin и Keimer, 1986; Wang et al. 1991).

D. Protoplast Культуры

Протопласты, растительные клетки, лишенные клеточной стенки, могут делиться и образовывать колонии, которые затем превращаются в растения in vitro. Следующие elec - troporation или химических обработок (напр., полиэтиленгликоль), они предохранитель и принимать непосредственно до плазмиды или голые фрагментов ДНК. Эти свойства делают протопластов важно, не только в качестве альтернативы для регенерации растений, но и гибридизация соматических клеток отдаленно родственные растения, так и для непосредственного переноса генов. При обнаружении клеточной стенки и средним ламели-ферментов (т.е., целлюлазы и пектиназы), протопластов были легко изолированы от клеточных суспензий или черешок листа и тканей широкого спектра видов, в том числе и сахарной свеклы. С первым докладом protoplast изоляции из сахарной свеклы (Li et al., 1976), были предприняты попытки добиться регенерации растений из протопластов изолированы от клеточных суспензий, мезофилла листьев или на черешки клеток. Однако большинство усилий с protoplast-производные каллус приняты либо каллусообразования только (Bhat et al., 1985, 1986; Szabados и Gaggero, 1985; Ford-Lloyd и Bhat, 1986; мА - jewska et al., 1990, 1994; Pedersen et al., 1993; Schlangstedt et al., 1994; Ma et al., 1995; выступивший на церемонии с речью et al., 2002b) или корнеобразование (Schlangstedt et al., 1992).

Первой успешной регенерации растений сахарной свеклы mes - ophyll протопластов пришел от усилий, направленных на передачу цитоплазматической мужской стерильности асимметричной слияние клеток (Кренц et al., 1990). Использование липоксигеназы ингибитор, n-propylgallate (гяп), оказалось необходимым, как nPG существенно сокращено производство этилена на протопластов (Кренц et al., 1990, 1994). Lenzner et al. (1995) построил завод системы регенерации мезофильных-производные протопластов, однако, только рыхлый, не компактный, каллус дали побеги (Кренц et al., 1990; Lenzner et al., 1995). Низкое покрытие эффективности является проблематичным (холл и Кренц, 1988), несмотря на-искушает, чтобы его улучшить, например, иммобилизации клеток в альгинат кальция (Hall et al., 1993a, 1994; Lenzner et al., 1995 г.), внедрение клеток в агарозном (Lindsey и Jones, 1989), и включение анти-окислительные агентов (Кренц et al., 1990,1994) или полиамины в культурной среде (Majewska-Sawka et al., 1997 г.; Jazdzewska et al., 2000). Сильный генотипической изменчивости и сомаклональная вариации были очевидны (Кренц et al., 1990; Lenzner et al., 1995; Jazdzewska et al., 2000).

Хотя ограниченный прогресс произошел, сахарной свеклы-прежнему рассматривается в качестве упорствующие в protoplast регенерации. Недавно, однако, с помощью компьютерной микроскопии, чтобы следовать подразделений гетерогенной популяции клеток с непокорной разнообразие, Hall et al. (1995 г., 1996b) показали, что клетки, продуцирующие рыхлые, regenerable мозоли были на замыкающие-клеточного происхождения, с указанием totipotency узкоспециального замыкающих клеток. Метод обогащения protoplast препаратов из замыкающие клетки был разработан путем смешивания де-ребристого листа материала и очищения посредством градиентного центрифугирования; это привело к делению клетки частотах до 50% по сравнению с 0,01-0,5% для нефракционированного листьев протопластов. Протокол сообщалось, что высокая воспроизводимость и Генотип-независимых и с тех пор она эксплуатировалась в течение сахарной свеклы преобразование (раздел III.C). В настоящее время это единственный практический подход к использованию протопластов из сахарной свеклы (Hall et al., 1996, 1997; Hall, 1998; Кренц et al, 1998; Вишневска et al, 2002). Высокоэффективные регенерации растений, сообщили из протопластов, которые были изолированы от рыхлых мозоль от этиолированных гипокотиле эксплантов (Довженко и Koop, 2003). Метод показался проще, быстрее и эффективнее, чем Hall et al. (1996, 1997); однако, каллус подход, основанный на не сообщали, чтобы быть эффективным для трансформации.

Недавно, Вишневска и Majewska-Sawka (2007) сообщил благотворное влияние арабиногалактана белка (AGP)-насыщенный ароматами, изолированные от культуры среднего эмбриогенного и nonem - bryogenic суспензии клеток, на развитие и дифференциация сахарной свеклы гвардии ячейки протопластов и стрелять на способность к регенерации костной мозоли от замыкающих клеток протопластов. AGPs, класс протеогликанов причастны развития и дифференцировки клеток и тканей как в планта и in vitro, были эффективны для in vitro развития многих видов изолированным от органогенного образования или эмбриогенного культур. AGPs должны привести к внутри - и межклеточной сигнализации (Вишневска и Majewska - Sawka, 2007).

Для повышения эффективности асимметричной слияния клеток, методы были разработаны для производства cytoplasts от суспензионной культуры - производные протопластов (Van Ark et al., 1992). В 2007 году, с использованием con - Фокусное лазерной сканирующей микроскопии и проточной цитометрии, Famelaer et al. (2007) исследовали синхронизации и микро-нуклеации в сахарной свеклы, соотнеся с содержанием ДНК Размер микро - ядра и микро-протопластов; однако, он был нелинейным, пострадавших от степени ДНК конденсации, общего количества ДНК и наличием в цитоплазме.

E. Сомаклональная вариации и клеточной селекции In Vitro

Сомаклональная вариации, вариабельность следующих растений в культуре in vitro, был использован в селекционных программах, чтобы идентифицировать желательные характеристики в течение нескольких видов, которые не являются легкодоступными в пределах, совместимых зародышевой плазмы. Это было более успешным культур с ограниченной генетических основ, как и многие декоративные виды, где спонтанных или индуцированных сомаклональная изменчивость служит источником новых вариаций для улучшения растений (Davey et al., 2007). В сахарной свеклы, сомаклональная вариантов было часто встречается в растениях, в результате косвенных регенерации из каллуса получено из сеянца тканей, напр., листовой пластинки, черешка или гипокотиле эксплантов (Saunders и Doley, 1986; Brears et al., 1989; Yu, 1989; Jacq et al., 1992 г.; Чжун et al. 1993b) или из протопластов (Steen et al., 1986; Кренц et al., 1990; Lenzner et al., 1995; Jazdzewska et al., 2000). Напомним также, в регенерантов непосредственно от эксплантов тканей (Хармс et al., 1983; Dikalova et al., 1993; Чжун et al. 1993b). Вариации могут быть визуально наблюдаются фенотип (т.е., изменения в морфологии, особенно в лист) (Saunders, 1982; Saunders и Махони, 1982; Фрейтаг et al., 1988; Detrez et al., 1989), или молекулярных изменений, как в изоферментного анализа, RFLP и RAPD (т.е., структурные изменения в области ядерного и митохондриального геномов) (Brears et al., 1989; Сабир et al., 1992 г.; Levall et al., 1994; Munthali et al., 1996; Dikalova et al., 1993; Jazdzewska et al., 2000; Sadoch et al., 2000). Полиморфизм частот определяется Rapd (Munthali et al., 1996 г.) были похожи на тех, что видел в изоферментного и RFLP анализа (Сабир et al., 1992 г.; Levall et al., 1994).

Сомаклональная изменения могут произойти с помощью генетических (наследственных) (Jacq et al., 1992 г.) или эпигенетические (nonheritable) означает, как это наблюдается, когда растения-регенеранты мониторинг морфологически, так и в цито - логически после трех циклов черешка культуры (Detrez et al., 1989). Сомаклональная вариации чаще при длительном культуры; 96% регенерированного ростки были true-type диплоидов после короткого каллус этапа против 83% после длительного этапа (Jacq et al., 1992), хотя фазы длина не указана. Степень изменчивости также, по-видимому, зависят от эксплантов источника, который использовался для повторной генерации; различие, основанное на число хромосом, был самым высоким в регенерантов из протопластов, а наименьший-в тех из каллуса (Steen et al., 1986). Таким образом, ряд факторов, напр., экс - Тип растений, культуры, условий и продолжительности воздействия частоты, масштабов и природы (наследственные или nonheritable) спонтанно возникающие сомаклональная вариации (Sanders et al., 1990).

Искусственные индукции сомаклональная изменчивость может также появиться после некоторых in vitro выбора ячейки, в том числе те, которые сосредоточены на УФ-толерантность (Levall и Bornman, 1993; Levall etal., 1994), соль-толерантность (Pua и Торп, 1986; Фрейтаг et al., 1990 г., Yang et al., 2004 г.), устойчивость к гербицидам (Sanders et al., 1992 г.; Hart et al, 1993; Райт и Пеннер, 1998a,b; Wright et al, 1998) и снижение азотистых примесей (Saunders etal., 1997). Лев - и все Bornman (1993), подвергающихся каллус к УФ-излучению, возрождены побеги из сохранившихся Калли и проверку на допуск к УФ-излучению. Невыбранные растений, имели значительно больший ущерб следующие УФ-излучения по сравнению с подобранными растениями. Далее-ственно, растений-регенерантов от УФ-лечили мозоли были изучены RFLP анализа с целью определения степени сомаклональная изменения на уровне ДНК. Цитологические исследования somaclones, выявили значительные плоидности вариации, в то время как метилирование ДНК различия статистически не значимы (Levall et al., 1994).

Выберите для сомаклональная несколько вариантов с солью допуски, Фрейтаг et al. (1990) растений-регенерантов от черешка экс - культивируемых растений на среднем с пяти различных солей. Уцелевшие ростки подвергались воздействию соли в трех последующих проблем, во время которого количество черешках развивающихся толерантного побеги неуклонно увеличивается от 5 до 80%. Выбранный регенерантов вырос в почве, содержащая 0,1% (w/w) соли, не обнаруживаемых морфологических различий по сравнению с контролем, что растения, выращенные в Солт-свободной земле. Несколько солевыносливых растений могли бы прийти от одного мутантных клеток, как это ранее предлагалось (Detrez et al., 1988). Yang et al. (2004), полученные солевыносливых растений из нескольких бутон комки следующие культуре незрелых соцветие советы воздействию Y-излучения, а затем выбрали с NaCl.

Многочисленные попытки использовать сомаклональная вариации были сделаны для получения устойчивых к гербицидам клонов (Sanders et al., 1992 г.; Райт и Пеннер, 1998a,b; Wright et al, 1998). Идентификация моногенных доминирующей, сульфонилмочевины, толерантного линии (REL - 1) было достигнуто при unmutagenized суспензии клеток кластеров подвергались 2.8 нм концентрации chlorsulfuron, туз - tolactate синтаза (ALS)-подавляя гербицида (Sanders et al., 1992). Побеги из толерантного колонии сохранились 2.8 нм хлор - sulfuron, концентрации, что убил побеги из nontolerant колоний той же линии. REL-1 был также использован для разработки линий терпимы к другой группе ALS-подавляя гербицидов, imida - zolinones (Райт и Пеннер, 1998a). В imidazolinone - и сульфонилмочевины, толерантного линиями, полученными после выбора ячейки, были изучены на наследство и перекрестной толерантности характеристики (Wright et al., 1998; Райт и Пеннер, 1998b). Наличие одной копии Гена ALS в диплоидных регенерантов считалось, что ограничивает возможности стека признаков толерантности в то же растения с помощью традиционной селекции.

Ф. Зародышевой Плазмы Хранения Багажа

Учитывая негативные последствия генетического разнообразия, сохранение генетических ресурсов растений, а соматических тканей была широко использована. Для кратко - и среднесрочного хранения багажа, культивирования растительных тканях проводили in vitro при низких температурах или для длительного хранения замораживания в жидком азоте. Сохраняя clonally распространяются ростки на 12°C, Хасси и Hepher (1978) снизилась субкультивирования частот до 18-недельными интервалами. In vitro регенерированного побеги были сохранены при низкой интенсивности света на один год при 2 ч или 5 градусов C (Миедема, 1982a).

Хотя низких температурах полезны для сохранения размножения материалов (напр., CMS линий, инбредных O-Тип линии, тетраплоидных опылителей) лет, обслуживание растительных материалов-это кропотливая и трудоемкая, а также несет риск потери ценных материалов из-за загрязнения или человеческой ошибки (Ван - denbussche et al., 2000). Чтобы минимизировать потери, криоконсервация был разработан для сахарной свеклы с использованием либо стрелять-советы (Braun, 1988; Vandenbussche и де Профт, 1996, 1998; Vandenbuss - че et al., 1999, 2000) или root-советы от трансгенных волосатый культур корень (Benson и Хэмилл, 1991).

В общем, криоконсервация стрелять-советы приводит к длительному хранению, максимальная стабильность фенотипические и генотипические характеристики хранящихся зародышевой плазмы, и минимальное дисковое пространство и требования к техническому обслуживанию (Ding et al., 2008). Braun (1988) впервые показал применимость замораживания стрелять-совет каллуса не дифференцированных клеток отделен от clonally распространяются побеги цветочные почки. Медленное замораживание, участвующих preculturing изолированные стрелять-советы на агаризованной среде с TIBA и 5% диметилсульфоксида (ДМСО), криопротектора, передав в жидкой среде с двумя криопротекторов (сорбит и ДМСО), и замерзает при -40 C до хранение в жидкий азот. Частота 58,4% отрастания произошло, когда замороженные каллуса не дифференцированных клеток были талых на 39°с.

Усовершенствованные протоколы были разработаны, которые используют инкапсуляция-обезвоживание организма, в сочетании с (Vandenbuss - че et al., 2000) или без (Vandenbussche и де Профт, 1996, 1998 г.) до стеклования. Наилучшие результаты были получены при инкапсуляции-обезвоживание, следующие три шага preculture и обезвоживания (Vandenbussche и де Профт, 1996). Выживаемость увеличилась до 45% до 90% при стрелять-советы были исключены из холодной приспособиться in vitro побеги (Vandenbussche и де Профт, 1998), в котором отображается для повышения толерантности к обезвоживанию и замерзания вызывая физиологические изменения. Растений от холода-приспособиться стрелять-советы имеют более сахарозы, D-глюкозы и D-фруктозы и жирных кислот (Vandenbussche et al., 1999 г.); обесцвечивание мембранных липидов, также увеличилось. Оптимизированный инкапсуляция-обезвоживание метод был, однако, длительный и трудоемкий, т.е., один день в предварительной обработки, три-день preculture и семь-час обезвоживания. Эти недостатки были в значительной степени преодолены с помощью комбинации стеклования и криоконсервации сохранить стрелять-советы (Vandenbussche et al., 2000), включение выживаемости до 100% и быстрее отрастания. Сочетание стеклования и криоконсервации стрелять советы из области растениями был использован для удаления патогенных микроорганизмов, особенно вирусы (Ding et al., 2008).

Методы Криоконсервации для root-советы от мохнатого корень трансгенных культур, сахарной свеклы, были использованы для изучения воздействия культуры возраста, pregrowth, криозащиты, скорости замораживания и пост - стоп условиях культуры (Benson и Хэмилл, 1991). Хотя ca. 80% корневой совет каллуса не дифференцированных клеток были жизнеспособными (после замораживания), основанный на флюоресцентной диацетата окрашивание, менее 20% из корней заново. Темпы роста производства вторичных метаболитов и T-структуры ДНК, однако, остались неизменными после криоконсервации.

G. Варианту С Генотипической: Серьезные Проблемы

Генотипической изменчивости препятствует регенерации (выступивший на церемонии с речью и Казань, 1998) и преобразования (выступивший на церемонии с речью и Казань, 1999). Определенные генотипы сахарной свеклы более сговорчивым, чем другие прямые и косвенные органогенеза (Saunders и мазня, 1984; Detrez et al., 1988; Nakashima et al., 1988; Миками et al., 1989a,b, Сабир и Ford-Lloyd, 1991; Jacq et al., 1992 г.; Чжун et al., 1993b; выступивший на церемонии с речью, 1997; выступивший на церемонии с речью etal, 2001 г., 2003a; Ивич-Haymes и Smigocki, 2005a; Mishutkina и Гапоненко, 2006), соматического эмбриогенеза (Steen et al., 1986; Doley и Сондерс, 1989; Сондерс и Цай, 1999), гаплоидных растений продукции из неоплодотворенных яйцеклеток (Доктринальных etal., 1989 г.; люкс etal., 1990; Hansen et al. 1995; выступивший на церемонии с речью et al., 2000), protoplast изоляции, культуры и регенерации (Кренц et al., 1990; Lenzner et al., 1995; выступивший на церемонии с речью et al., 2002b; Jazdzewska et al., 2000), и клонального размножения из существующих каллуса не дифференцированных клеток (Миедема, 1982a; Mezei et al., 1990; " Сабир " и " Форд-Lloyd, 1991; Хаякава etal, 1994).

Большие Интер-сортовые различия наблюдались среди десяти различных коммерческих сортов когда изменчивость каллус развития и корень органогенеза было исследовано на разных уровнях, т.е., разнообразие, растений и органов/лист (выступивший на церемонии с речью, 1997). Значительные межзаводской (производственных) и внутризаводского (inter-лист) изменчивость произошло в разнообразные даже на подобные физиологические возрастов, но эксплантов из разных должностях в лист пластинки вели себя аналогичным образом. Сильный внутризаводского вариации в callusing и съемки в пределах сорта (Генотип населения) также наблюдалось (Steen et al., 1986 г.; Doley и Сондерс, 1989; Ивич-Haymes и Smigocki, 2005a). С сахарной свеклы высоко гетерозиготных, понятно, что значительные межзаводской имеются вариации, даже фенотипически похожими людьми. Таким образом, генотипические различия, сохраняющиеся в пределах различных скорее всего, ответственность за межзаводской изменчивости, на долю которых приходится растения сорта, Primo, которые относятся хорошего-плохого или non-рутер in vitro (выступивший на церемонии с речью, 1997). Внутризаводского изменчивости трудно объяснить. Выше корреляция ожидается в эксплантов поведение из разных листьев одного и того же растения, но не наблюдается.

Значит, существуют, чтобы справиться с изменчивостью в сахарной свеклы. Одним из них является использование большого числа эксплантов реплицирует из множества отдельных предприятий в пределах одной строки/населения (Doley и Сондерс, 1989; Ивич-Haymes и Smigocki, 2005a). Но трудоемкий - Несс культура тканей растений, в сочетании с необходимостью стандартизации продукции родительских растений, нередко ограничивает целесообразность такого подхода. Материал также может быть отсортированы до культуры уничтожить тех, с низким органогенного образования или эмбриогенного потенциал. Чтобы облегчить этот подход, были сделаны попытки соотнести почернение листовой пластинки дисков по культуре средних и невозможностью производства корни с уровнями естественных фенолов. Последний был измерен с помощью полифенол оксидазы (PPO) деятельность с весьма чувствительной, мелких, воспроизводимым способом (выступивший на церемонии с речью и РЕН, 1995b). Хотя двойную разницу в уровнях ферментативной активности наблюдалось, никакой связи не было видно между PPO деятельности и укоренения мощности, либо между PPO деятельности и степень почернения; слабая отрицательная связь наблюдается между степень почернения и укоренения потенциала (выступивший на церемонии с речью, 1997). Другие факторы, например, природа и концентрация фенольных субстратов, а не активность фермента, может быть более важным, определяющим способность к регенерации.