2. Факторы, Влияющие На Способность к Регенерации

Тип эксплантов важно для придаточных root и стрелять развития. Обычно черешок эксплантов исключены из стерильной саженцев более чувствительны, чем листовой пластинки или других частях всходов в производстве придаточных корней (выступивший на церемонии с речью и РЕН, 1995a; выступивший на церемонии с речью, 1997) и побегов (Tetu et al, 1987; Detrez et al., 1988, 1989; Ритчи et al., 1989; Toldi et al, 1996; скорбеть et al., 1997; Zhang et al., 2001b). Это может быть отнесена к природе богатых сосудистой ткани из черешка, поскольку, по крайней мере для прямых корень органогенеза в сахарной свеклы (выступивший на церемонии с речью и РЕН, 1995а), Приморье набором клеток, в основном, развиваются из клеток паренхимы в сосудистой камбия вдоль сосудистых Пучков в черешок. В отличие от черешка утюжок, показал, что прямые придаточных побеги возник из субэпидермально клеток паренхимы (Detrez et al., 1988), возможно это объясняет, почему тонкого слоя клеток, эксплантов были успешно использованы для прямого (Detrez et al., 1989) и косвенные (Toldi et al., 1996) стрелять регенерации.

Эксплантов положение также является значительным. Эксплантов с лезвием в черешок переходной зоны, также описано, как центральной жилки-черешок стыке региона, разделенных точкой вставки из самых низких первичном ключе (выступивший на церемонии с речью и РЕН, 1995а), были более продуктивными, чем любой листовой пластинки или черешок ткани для прямого adventitous стрелять (Detrez etal., 1988,1989; Миками etal., 1989b) или root органогенеза (выступивший на церемонии с речью и РЕН, 1995а). Этот эффект был более очевидной при центральной жилки-черешок стыке сегментов были вырезаны paradermally в верхней, средней и нижней части и культивируемых отдельно на корню индукции среднего. В середине регионе образуются корни в высших чисел, быстрее и на более длительные сроки, чем верхняя или нижняя регионов. В одном исследовании с использованием последовательной обработки листовых эксплантов культивируемых in vitro с ауксинов и цитокинина, Продолжительность времени, в течение которого паренхимой листьев клетки являются компетентными, чтобы возобновить меристемных деятельности, инициировать корень primordia и пройти корень морфологического развития наиболее важных. Утечки развитие должно быть возможно в случае, если в ранних стадиях тем развития, компетенции могут быть достигнуты без определения, что наблюдается и у других видов (Христианско - сын и Варник, 1985 г.; Чжан и Lemaux, 2004; Ebrahimie et al., 2007). В некоторых тканях, однако, компетенции и предотвращения загрязнения могут быть достигнуты в рамках одной культуры режима, что делает его трудно отличить между двумя государствами. Tran, чем Ван (1981) не обнаружила никаких доказательств трансформации корень primordia в побеги табака в тонкий слой клеток культур, где условия, способствующие развитию побеги появились подавлять развитие корневой системы, и наоборот.

Определить листовой материал с большим потенциалом для роста и органогенеза, диски с разных позиций на листовые пластинки культивировали на мозоль вызывающие среднего (выступивший на церемонии с речью, 1997). Veinal и interveinal диски из Центральной и маргинальные позиции появились похожие в своей способности к каллус производства, хотя диски от дистального конца, произведенных чуть меньше, чем у среднего и нижнего регионов. Это может объясняться тем, что в растущих листьев, деления клеток и клеточных прекратить расширение на первый лист чаевые, но продолжают в течение более длительного у основания; дистальных ткани, таким образом, физиологически старше, чем остальные пластинки. Различия в каллусных-частота индукции от эксплантов на разных должностях, также наблюдается. Zhang et al. (2004), разделить семядоли из молодых саженцев на две части, т.е., hypocotyledon и epicotyledon, и нашел мозоль-частота индукции от cotyledon региона, прилегающего к гипокотиле (hypocotyle - Дону) выше, чем от дистальной области. Nourouzi et al. (2005) обнаружили, что клетки вблизи главной жилки листьев были более компетентными для трансформации и последующей регенерации. Физиологический возраст донорских тканей, также весьма значительны; младший тканей были более восприимчивы, чем в старых (Bhat et al., 1985 г., Сондерс и голени, 1986; Миками et al., 1989; выступивший на церемонии с речью, 1991; Jacq et al., 1992 г.; Tenning et al., 1992 г.; выступивший на церемонии с речью и РЕН, 1995b; выступивший на церемонии с речью, 1997; Zhang et al., 2001b; Kuykendall et al., 2003).

Физические условия культурной среды также влияют на растительной ткани ответ. Наличие воды было показано, что значительная путем измерения гель матричной потенциал, измеряется относительная прибыль или потери воды при разных концентрациях желирующие агенты были сравнены (Owens и Возняк, 1991). Лист диска и расширения производства каллус, производный от эмбрионов и побеги были прямо пропорциональны гель матричной потенциал, который изменялся с гелевого типа и концентрации. Могаддам et al. (2000) к воздействию воды потенциала на соматические эмбриогенеза сахарной свеклы, демонстрируя содействие действие L-пролина в среднесрочной, и в концертных в планта TIBA предварительной обработки. Наличие витамина С может вызвать напряжение, таким образом снижая потенциал воды уровнях в среднесрочной и возрастающее накопление питательных веществ в клетки, повышая тем самым соматических эмбриогенеза.

После первого отчета о благотворном влиянии TIBA в культуре in vitro сахарной свеклы (Hooker и Nabors, 1977), другие также сообщил, стимулирующее воздействие TIBA на развитие костной мозоли, побеги и соматических эмбрионов (Tetu et al., 1987; Detrez et al., 1988, 1989; Abe et al., 1991; Jacq et al., 1992, 1993a; Roussy et al., 1996; Кулшрешта и Coutts, 1997). В некоторых случаях, регенерации было возможно только в случае, если донорские ткани с подготовленными TIBA. Тиба, как известно, препятствует Заполярного транспортного ауксинов в растения, что приводит к потере доминированию верхушки и продвижение подмышечных роста побегов (Liu et al., 1993). Однако, неизвестно, будут ли последствия TIBA обусловлено гормоном-как деятельность, которая вызывает деление клеток и/или дифференциации, или ее влияния на относительные концентрации эндогенных ауксина в ткани иссекают. С TIBA стимулирует чистая ауксина поглощение за счет ингибирования измеряем (Depta и Рубери, 1984), это вызывает сдвиги в ауксина уровнях. Другое исследование показало, что pretreating отдельностоящий листьев сахарной свеклы с TIBA тормозится развитие корня из черешка листа баз, а неоздобленому листа рубки, произведенные корни в отсутствие ауксина (Миедема et al., 1980). Это могло быть обусловлено ингибированием Заполярного транспортного эндогенных ауксина в лист пластинки ткани к черешку базу, где придаточных корней нормально развиваться.

Чтобы повысить эффективность регенерации из разных эксплантов, несколько иные значения параметров не были испытаны. К их числу относятся (i) культуры - ing саженцев на питательной среде, содержащей БАП (Jacq et al., 1993a; Zhang et al., 2001b; Выступивший на церемонии с речью et al., 2003a), ТДЗ (Zhang et al., 2001b; выступивший на церемонии с речью et al., 2003b) или TIBA в сочетании с БАП (Jacq et al., 1993a) или L-пролин (Могаддам et al., 2000) и (ii) предварительной парниковых выращенные растения сахарной свеклы с TIBA (Roussy et al., 1996). Обе процедуры улучшение стрелять регенерации из разных эксплантов исключены из предварительно обработанных рассады и растений. Zhang et al. (2001b) обусловлена тканей, в темноте, чтобы добиться эффективного соматических эмбрионов регенерации. Когда Jacq et al. (1993a) протестировали несколько прекондиционирования СМИ на органогенных каллусогенеза, предварительная обработка с бат или TIBA только недостаточными, но и высокую производительность при использовании в комбинации. Холодная предварительной обработки костной результате противоречивое влияние на последующее косвенные стрелять регенерации. Де Грееф и Якобса (1979) сообщили, что мозоль предварительной обработки при 4 C 3 до 9 недель оказывали никакого влияния на формирование побега из каллуса. Выступивший на церемонии с речью et al. (2001) показали более высокий стрелять регенерации из каллуса после того, как две недели preculture 4 АС Расхождение может быть потому, что мозоль находился под непрерывным светом в бывшем кабинете, в то время как в последних 16 ч/8 ч светло/темно-режим был использован. Ранее сообщалось, что несколько гормональных последовательности индуцированных развития соматических эмбрионов из каллуса (Tetu et al., 1987), но последующие исследования доказали обратное, с развитием один шаг протоколов (Фрейтаг et al., 1988; Doley и Сондерс, 1989; Kubalakova, 1990; Saunders и Цай, 1999; Цай и Сондерс, 1999a,b; Ивич и Smigocki, 2003).

Были сделаны попытки соотнести воздействие на корневую organogene - sis степени некроза почернение или культивируемых листовой пластинки эксплантов, в значительной степени вызванное полимеризации фенольных соединений, уровень полифенолов оксидазы в донорской листья. Не обнаружено корреляции, несмотря на установление отношений между укоренения емкость и степень почернения (выступивший на церемонии с речью, 1997). Недавно, снижая содержание сахарозы с 3% до 1% в культурной среде значительно снижается содержание фенольных листьев диски, снижение некроза при культуры и в результате более высоких темпов стрелять регенерации (Йылдыз et al., 2007).

Другие средние составы, кроме того, широко используемых MS (Мурасиге и Skoog, 1962), были использованы для регенерации, в том числе B5 (Gamborg et al., 1968), ГП (Negrutiu et al., 1975; часто цитируется как де Грееф и Jacobs, 1979) и MS-RV среднего (Фрейтаг et al., 1988). Последний, модифицированной среде MS дополнительные десяти витаминов и шесть аминокислот, было использовано несколько групп (Кэтлин, 1990; Кренц et al., 1990; Оуэнс и Возняк, 1991; Оуэнс и Eberts, 1992; Tenning et al., 1992 г.; Munthali et al., 1996 г.) и сообщило, что превосходит другие формулировки. Например, Catlin (1990), полученные в среднем 32% стрелять в производство от трех генотипов на MS-RV среднего по сравнению с 25% на среде MS.