VI этап (через 36-48 час от начала исследования)

Учитывают результаты идентификации и выдают окончательный ответ о выделении культуры холерного вибриона соответствующей серогруппы и биовара.

Методы серологической диагностики холеры

Необходимо исследовать парные сыворотки с интервалом в 7-10 дней.

Первая проба должна быть взята на 2-3 день болезни, а вторая – через 5-7 дней для оперативной диагностики и через 7-10 дней и более – для ретроспективной. Кровь для СР берут из вены или пальца. В лаборатории сыворотку инактивируют при t 56⁰С 30 мин.

РА: исследуемую сыворотку разводят 1% пептонной водой в объеме 1 мл от 1:10 до 1:640. В качестве антигена используют 3-х часовую бульонную культуру выделенную в данном очаге, который вносят по 1 капле и ставят в термостат на 1 час, затем до утра – в холодильник, после чего учитывают результат. Реакция сопровождается КС и КА.

Результат считывается ориентировочно положительным при агглютинации в разведении 1:40 и выше.

Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное нарастание титра, антител.

РНГА: с диагностикумом эритроцитным холерным антигенным. По чувствительности она превосходит РА. Ориентировочно положительным считывается результат в разведении 1:40 и выше, диагностическим – 4-х кратное нарастание титра антител.

РНАг – реакция нейтрализации антигена; она служит для выявления антител в сыворотке крови с использованием диагностикума эритроцитарного холерного иммуноглобулинового.

Результат исследования сыворотки больного в РНАг в разведении 1:540 (1:80) и выше считается ориентировочно положительным.

Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное нарастание титров антител при исследовании парных сывороток в РНГА и РНАг.

ПЦР- полимеразная цепная реакция. Методом ПЦР проводят определение генов холерного токсина (ctx АВ) и токсикорегулируемых пилей (tср А) (т.е. выявление специфической ДНК).

Материалом могут быть: биологический материал, объекты окружающей среды, чистые культуры вибрионов, I и II пептонная вода.

Для постановки ПЦР используют ПЦР-тест-системы (согласно инструкции).

Для учета результатов ПЦР используют электрофорез в агарозном или полиакриламидном геле.

Лечение

Основано на восстановлении водно-солевого баланса организма больного. Патогенетическая терапия: введение в/в стандартных солевых растворов натрия и калия.Наиболее удачным считается «Трисоль» (или раствор Филлипса№1), (5:4:1), который содержит на 1 л бидистиллята 5 г хлорида натрия, 4 г бикарбоната натрия и 1 г хлорида калия. Этот раствор вводят только в/в или в/артериально, подогрев до 40, сначала 2-3 л струйно, затем капельно, всего 6-10 л, что равняется 5-10% массы тела. Затем переходят на оральную глюкозо-электролитную терапию. Состав раствора: хлорида натрия 3,5 г, бикарбоната натрия 2,5 г, хлорида калия 1,5 г, глюкозы 20 г, воды питьевой 1 л. Этот раствор применяется при любой диарее, в том числе и при кишечных токсикозах у детей.

Регидратация больных с легкими и среднетяжелыми формами холеры и других заболеваний, сопровождающихся диареей, проводится исключительно оральным введением глюкозо-электролитного раствора.

Этиотропная терапия: назначают сначала в/в, затем per os антибиотики группы тетрациклина по 300-500 мг в течение 3-5 суток.

Специфическая иммунопрофилактика:

1. Вакцина холерная корпускулярная инактивированная сухая – это взвесь равных количеств холерных вибрионов сероваров Огава и Инаба, классических или Эль-Тор биоваров. Инактивируется нагреванием или формалином.

Применяется по эпидпоказаниям для активной профилактики.

2. Вакцина холерная (холероген-анатоксин в сочетании с О-Аг) – из культуры холерного вибриона 569 В серовара Инаба, инактивированная формалином. Применяется для создания активного иммунитета против холеры с 7-летнего возраста по эпидпоказаниям.

3. Вакцина холерная бивалентная химическая таблетированная – из штаммов 569 В серовара Инаба и 41 серовара Огава, инактивированная формалином. Применяется однократно.

PS. Поствакцинальный иммунитет сохраняется 6 месяцев.

Организация и режим работы в лабораториях по диагностике холеры

1. Диагностические исследования на холеру материала допускаются при наличии разрешения санитарно-эпидемического управления МЗ Республики или в соответствии с решением противоэпидемического штаба.

2. Диагностические лаборатории должны располагаться в отдельных зданиях или в изолированном помещении учреждения.

3. Диагностическая лаборатория должна иметь 2 входа: один для сотрудников, другой – для приема материала на исследования.

4. В теплое время года окна и двери лаборатории должны быть закрыты густыми металлическими сетками.

5. В лаборатории должны быть помещения те же, что в обычной бактериологической лаборатории и дополнительные:

• для переодевания защитной одежды;

• для работы с заразным материалом, состоящие из:

- предзаразной для надевания защитного костюма,

- для раздевания и обеззараживания костюма,

- для приема и первичной обработки заразного материала,

- посевная;

• бактериологическая;

• термостатная;

• для записей;

• душевая;

• туалетная;

• изолятор.

6. Допуск сотрудников к работе с заразным материалом оформляется приказом руководителя 1 раз в 2 года.

7. В помещении, занимаемое лабораторией, допускаются только лица, работающие в ней.

8. Во время ремонтных работ в лаборатории прекращается на это время работа с заразным материалом.

9. Время непрерывной работы с заразным материалом в лабораториях ограничивается 3-4 часами после чего устанавливается часовой перерыв. Вызов из помещения сотрудников в часы работы с заразным материалом запрещается.

10. В период угрозы заноса холеры и во время вспышки холеры в диагностических лабораториях устанавливается круглосуточное дежурство.

11. Все сотрудники учреждения, которые соприкасаются с материалом, подозрительным на зараженность холерой, обязательно должны быть вакцинированы.

12. Во время вспышки холеры работников лаборатории обследуют на вибрионосительство 1 раз в 10 дней.

13. В случае появления у сотрудников лаборатории поноса и других симптомов, их отстраняют от работы и госпитализируют.

14. Нельзя ничего выносить из лаборатории без дезобработки и разрешения руководителя учреждения.

15. Переносить заразный материал из одного здания в другое нужно в специально приспособленной металлической посуде в сопровождении лица, допущенного к работе с культурами возбудителя (врач, лаборант).

16. Защитная одежда, белье перед стиркой должны быть обеззаражены (в 5% лизоле – 2 часа, кипячением в мыльно-щелочном растворе – 1 час с момента закипания, в автоклаве при 120⁰С – 20 мин).

17. Все сотрудники при входе в лабораторные комнаты должны надевать защитный костюм (пижаму, носки, тапочки, халат, шапочку).

18. Запрещается выходить в защитном костюме за пределы лаборатории.

19. Воспрещается вносить в лабораторию продукты питания.

20. Запрещается курение и питье воды в бактериологических комнатах.

21. Хранение культур возбудителя холеры, учет их, обмен осуществляется согласно специальной инструкции.

22. Все идентифицированные культуры холерного вибриона заносятся в журнал штаммов холерного вибриона с номером и сведениями, от кого, когда и кем был выделен штамм. Эти штаммы хранят до получения указания МЗ республики о передаче или уничтожении. На уничтожение культуры составляется акт.

23. Дежурный врач ведет точный учет движения рабочих культур за каждый день (посеяно, уничтожено и состоит) в специальном журнале культур, передавая его по дежурству.

24. Идентификацию и изучение выделенных культур следует проводить в отдельном боксе.

25. По окончании работы все термостаты, шкафы и холодильники с заразным материалом опечатываются врачами, в ведении которых они находятся. Перед уходом лабораторию тщательно запирают и опечатывают.

26. Запрещается пипетировать ртом.

27. Руки дезинфицируют 70⁰С спиртом, лизолом 3% и тщательно моют с мылом.

Посевы, посуду и прочее – автоклавируют при 120⁰С 1 час, промывают.