4, Помещают в термостат. Посевы инкубируют при заданной температуре в течение определенного

времени. Для дальнейшей работы выбирают чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний, а

при посеве нативного материала - от 0 до 300 колоний.

Количество колоний на поверхности и в глубине агара подсчитывают невооруженным

глазом или используя лупу с увеличением в 2-5 раз. Для этого чашку помещают вверх дном на

поверхность черного цвета или применяют специальный прибор для счета бактерий (например.

ПСБ).

Если даже на чашке с посевом максимального разведения выросло более 300 колоний, а

анализ, увеличив разведение, повторить нельзя, то допускается подсчет колоний с помощью

пластинки с лупой и сетки при сильном боковом освещении. Сетку изготавливают из

органического стекла, на котором прочерчивают линии таким образом, чтобы образовалась сетка

из квадратов со стороной 1 см. Подсчитывают количество колоний не менее чем в 20 квадратах,

затем рассчитывают среднее число колоний на 1 см2

и умножают на площадь питательной среды в

чашке. Результат выражают как количество бактерий в 1 см' (г) исходного материала, для чего

умножают количество выросших колоний на засеянный с учетом разведения объем пробы. За

окончательный результат принимают среднее арифметическое подсчета по 2 параллельным

чашкам или 2 соседним разведениям. Допускается учет по 1 чашке, если при посеве большего

разведения выросло менее 20 колоний или на второй чашке имеет место ползучий рост,

затрудняющий точное определение количества колоний. Рассчитанный результат может быть

округлен в соответствии с требованиями нормативных документов.

Метод широко используют при исследовании различных объектов окружающей среды и в

различных модификациях.

Поверхностный посев на плотные питательные среды

Посев шпателем

Метод используется для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в тех

случаях, когда после подсчета колоний может возникнуть необходимость в выделении чистой

культуры и ее идентификации. Он менее точен, по сравнению с методом посева в глубину плотной

среды, так как часть микроорганизмов может быть адсорбирована шпателем.

Питательную среду разливают в чашки Петри и. после застывания, подсушивают. Для этого

чашки переворачивают вверх дном, открывают и выдерживают в термостате 30 минут при 48-50

°С или в ламинарном боксе 1-2 часа. На подсушенную питательную среду наносят заданное

количество исследуемого материала или его разведения (как правило. 0,01-0.1 мл) и немедленно

равномерно распределяют по поверхности стеклянным шпателем. Перед помещением в термостат

чашки выдерживают на столе в горизонтальном положении 15 минут. После инкубации посевов

проводят подсчет колоний, при этом возможен учет колоний только с заданными культуральными

свойствами, а при использовании дифференциальных сред - с заданными биохимическими

характеристиками.

Разведения исследуемого материала следует выбирать таким образом, чтобы количество

колоний на чашке составляло 15-300, количество колоний специфических групп (например,

БГКП) -15-150; количество колоний плесеней - 5-50. Обработка результатов не имеет

принципиальных отличий от таковой при использовании метода глубинного посева в плотную

питательною среду. При необходимости подтверждения принадлежности микроорганизмов к

определенной группе отбирают не менее 5 колоний, которые откалывают (пересевают) на

питательные среды для выделения чистой культуры. Настоящий метод используется, например,

при исследовании некоторых видов пищевых продуктов.

Капельный метод

Метод используется для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в

полевых условиях, а также в научно-исследовательской работе. Так как исследуемый материал

или его разведения засевают на поверхность питательной среды в виде капель определенного

объема, а количество колоний, выросших из каждой капли, учитывается отдельно, удается более

экономно расходовать питательные среды и лабораторную посуду за счет посева на одну чашку

нескольких проб. В то же время, если хотя бы в одной капле будут присутствовать

микроорганизмы, способные к подвижному росту, учесть результат будет невозможно.

Чашки с питательным агаром тщательно подсушивают (см. посев шпателем). Одна чашка

может быть использована для посева до 8 разных проб или разведений. Место, куда будет

нанесена каждая из них. маркируют на обратной стороне донышка чашки.

На поверхность питательного агара с помощью микропипетки или пипеточного дозатора

наносят капли исследуемого материала либо его разведении объемом 0,01 или 0,02 мл. Капли не

должны сливаться между собой. Чашки выдерживают на столе до полного высыхания капель,

переворачивают и помещают в термостат. Подсчет колоний проводят в каждой капле отдельно.

При выборе разведении следует стремиться к тому, чтобы количество колоний в капле не

превышало 50. Проводят расчет количества микроорганизмов в единице объема (массы)

исследуемого материала с учетом разведения и объема засеянной капли (0,01 или 0,02 мл).

Метод используется, например, при исследовании питьевой воды в полевых условиях.

Метод мембранных фильтров

Метод предназначен для определения небольших количеств жизнеспособных

микроорганизмов в жидких средах. Широко применяется для определения индексов санитарно-

показательных микроорганизмов, а также при исследовании жидкостей, обладающих

антимикробным действием. Для определения количества бактерий используют фильтры с диаметром пор не более 0,3

мкм, например, мембранные фильтры №2, 3 или фильтрующие мембраны "Владипор" МФА-МА

№5, 6, 7, 8. Отобранные для работы фильтры визуально проверяют па отсутствие трещин,

изломов, деформаций, а затем подвергают специальной обработке и стерилизации.

Мембранные фильтры из нитроцеллюлозы по одному помещают на поверхность нагретой до