Методы определения количества бактерий

Приготовление разведений

Приготовление десятикратных разведений исследуемого материала - одна из наиболее

частых процедур в технике санитарно-микробиологических исследований. Несмотря на

кажущуюся техническую простоту, она является одной из наиболее существенных источников

ошибок при определении количества микроорганизмов в объекте. Поэтому при приготовлении

разведении недопустимы малейшие отклонения от регламентированных процедур.

В стерильные пробирки с соблюдением правил асептики разливают стерильную воду или

специальный раствор для разведений по 9 см3

. Стерилизация заранее мерно расфасованной

жидкости для разведений не желательна, так как при автоклавировании ее объем может

измениться из-за испарения. Для приготовления 1-го разведения (1/10) 1 мл анализируемой пробы

стерильной пипеткой переносят в пробирку с 9 см3

жидкости для разведения. При этом пипетку

нельзя погружать в воду более чем на 3 мм, во избежание смывания микроорганизмов с ее

наружной поверхности. Новой стерильной пипеткой тщательно перемешивают содержимое

пробирки путем многократного заполнения и опорожнения пипетки, набирают 1 мл разведения

1/10 И переносят в следующую пробирку с 9 см3

жидкости для разведения, получая при этом

разведение 1/100. Повторяют эти операции до получения всего необходимого набора разведений.

Глубинный посев в плотные питательные среды

Метод используется для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в тех

случаях, когда их идентификация не требуется, либо когда селекция нужной физиологической

группы бактерий может быть осуществлена за счет температуры инкубации, состава питательной

среды или обработки исследуемого материала перед посевом.

Питательный агар расплавляют и охлаждают до 45±5°С. На столе раскладывают пустые

стерильные чашки Петри и делают на их крышках необходимые надписи. После перемешивания

образца в чашку с соблюдением правил асептики стерильной пипеткой, вносят 1 мл исходного

материала или заранее приготовленного разведения. Разведения выбирают с таким расчетом,

чтобы на чашке выросло от 30 до 300 колоний. При исследовании пищевых продуктов общее

количество колоний может колебаться в пределах 15-30. Из каждой пробы засевают как минимум

2 Разведения или, если разведения не производили, проводится посев на 2 чашки по 1 мл

исходного материала. В некоторых случаях, например, при исследовании пищевых продуктов,

каждое разведение засевают на 2 параллельные чашки. После внесения материала (разведения) в

чашку заливают 10-12 мл питательного агара, предварительно профламбировав горлышко сосуда.

Слой питательной среды должен быть толщиной 4-5 мм. Затем быстро перемешивают содержимое

чашки, передвигая ее круговыми движениями по поверхности стола. Следует избегать

образования пузырьков, смачивания стенок и крышки. Рекомендуется, чтобы время от внесения

материала до заливки питательной средой не превышало 15 минут.

После застывания питательной среды чашки переворачивают и стопками, не более чем по 3-