Билет №5

1. Люминесцентный микроскоп, устройство, применение.

Люминесцентный метод микроскопии занимает важное место в исследовании микроорганизмов. Люминесценцией (или флюоресценцией) называют излучение клеткой света за счет поглощенной энергии. Только немногие бактерии (люминесцирующие) способны светиться собственным светом в результате интенсивных процессов окисления, протекающих у них со значительным выделением энергии.

Большинство микроорганизмов приобретает способность люминесцировать, или флюоресцировать, при освещении их ультрафиолетовыми лучами после предварительной окраски специальными красителями — флюорохромами. Поглощая короткие ультрафиолетовые волны, объект излучает более длинные волны видимой части спектра. Вследствие этого разрешающая способность микроскопа повышается. Это дает возможность исследовать более мелкие частицы. Чаще используют красители- флюорохромы: акридин оранжевый, аурамин, корифосфин, флюоресцеин в виде очень слабых водных растворов.

При окраске корифосфином коринебактерии дифтерии дают желто-зеленое свечение в ультрафиолетовом свете, микобактерии туберкулеза при окраске аурамин-родамином — золотисто-оранжевое. Для успешной микроскопии необходим яркий источник света, в качестве которого используют ртутно-кварцевую лампу высокого давления. Между источником света и зеркалом помещают сине-фиолетовый светофильтр, который пропускает только короткие и средние волны ультрафиолетового света. Попав на объектив, эти волны возбуждают в нем люминесценцию. Чтобы увидеть ее, на окуляр микроскопа надевают желтый фильтр, который пропускает длинноволновый свет флюоресценции, возникающий при прохождении лучей через объект. Короткие волны, не поглощенные исследуемым объектом, убираются, отсекаются этим фильтром.

Существуют специальные люминесцирующие микроскопы МЛ-1, МЛ-2, MЛ-3, а также простые устройства: комплект ОИ-17 (опакиллюминатор), ОИ-18 (осветительное устройство с ртутно-кварцевой лампой СВД-120А), дающие возможность применять для люминесцентной микроскопии обычный биологический микроскоп.

2. Систематика и номенклатура бактерий. Принципы классификации.

Систематизированы по сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. В основу классификации положены их морфологические, физиологические, биохимические, молекулярно-биологические свойства. По классификации Берджи, бактерии составляют царство прокариот и делятся на 4 отдела: грацикулоциты – с тонкой клеточной стенкой, Грам -; фирмикуты – с толстой клеточной стенкой, Грам +; тенерикуты – с без ригидной клеточной стенки, «мягкие», «нежные», включает микоплазмы; архебактерии – с дефектной кл.стенкой, особенностями строения рибосом, мемран и рибосомных РНК.

Таксономические категории: класс, отдел, порядок, семейство, род, вид (выдовое название состоит из двух слов, т.е. соответствует бинарной номеклатуре, первое слово в названии указывает на принадлежность к определённому роду (с прописной буквы), второе на вид).

3. Строение дермомицетов и заболевания, вызываемые ими.

Дерматомицеты — облигатно патогенные паразиты кожи человека, вызывающие дерматомикозы (эпидермомикозы): эпидермофитию, микроспорию, трихофитию.  Дерматомицеты являются основными возбудителями микозов кожи человека, паразитируют в роговом слое кожи и вызывают поражение  кератинсодержащих структур (волос и ногтей). Дерматомицеты вырабатывают энзимы — кератиназы, которые расщепляют кератин, что способствует инвазии дерматомицетов в поверхностные слои кожи, где в дальнейшем они и продолжают существовать. Клеточная стенка дерматомицетов содержит мананы — вещества, которые ингибируют местный клеточный иммунитет и приводят к замедлению слущивания роговых чешуек с поверхности кожи и развитию хронического течения инфекции. 

Задача.

Из отделяемого влагалища женщины был приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии мазков видны кокки, располагающиеся попарно, а также клетки имеющие грушевидную форму. Какие микроорганизмы обнаружены в исследуемом материале? Возбудителями каких инфекций они являются? Какие дополнительные методы исследования можно использовать для более точной дифференциации обнаруженных микробов?

Ответ:

Судя по описанию, у женщины выявлены гонококки и трихомонады. Т.е. у неё гонорея и трихомоноз.

Трихомонады можно выявить окрашиванием по Романовскому – Гимзе (ядро окрасится в красный цвет, цитоплазма в синий), наличие жгутиков у трихомонады можно выявить окрашиванием по Морозову.