Билет №2
Спорообразование у бактерий. Стадии, функциональное значение.
Споры— особая форма покоящихся клеток со сведённой к нулю метаболической активностью. Они резистентны к нагреванию, радиации, высыханию и воздействию химических веществ. Благодаря этим свойствам, споры могут длительно сохраняться и обеспечивать сохранение вида в неблагоприятных условиях.
Подготовительная стадия споруляции сопровождается прекращением деления и увеличением количества липидных включений.
Рис. 4-14. Расположение спор у бактерий.
Стадия предспоры споруляции обычно начинается бурно. В клетке появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменёнными плотностью и тинкториальными свойствами. Подобное образование обозначают терминами «предспора», или «примордиальная спора».
Третья стадия споруляции включает появление оболочки (обычно в течение 10 мин после образования предспоры) и ещё большее увеличение коэффициента светопреломления.
Стадия созревания споры сопровождается её уплотнением и снижением метаболической активности клетки.
Споры могут располагаться центрально, субтерминально или терминально (рис. 4-14). У видов Bacillus диаметр споры не превышает ширины клетки, тогда как у многих видов Clostridium — значительно превышает. В ряде случаев клетка приобретает весьма характерный вид, нередко являющийся диагностическим признаком.
Окраска по Цилю-Нильсену и ее этапы.
1. на фиксированный мазок наносят карболовый фуксин через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров 3-5 мин.
2. снимают бумагу, промывают мазок водой
3. На мазок наносят 5% серную кислоту на 1-2 мин.
4. Промывают водой
5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего 3-5 мин.
Промывают водой, высушивают
Вирусы, вироиды, прионы, особенности структуры, отличительные свойства. Вызываемые заболевания.
Вирусы – мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только один тип нуклеиновый кислоты (ДНК или РНК). Вироиды – небольшие молекулы кольцевой, суперспирализированной РНК, не содержащие белка, вызывающие заболевания растений. Прионы – белковые инфекционные частицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10-20 * 100-200 нм. Вызывают у человека и животных энцефалопатии в условиях медленной вирусной инфекции (куру, болезнь Крейтцфельдта-Якоба)
Задача.
При микроскопии мазков из зев, больного с тяжелой некротической ангиной, обнаружены палочки, располагающиеся под углом друг к другу, с утолщениями на концах. Какие это могут быть микроорганизмы? Какие дополнительные методы окраски нужно провести для уточнения морфологии данных бактерий?
Ответ: Это могут быть Corynebacterium diphtheriae, возбудитель дифтерии.
Необходима окраска по Нейссеру, позволяющая выявить зёрна волютина, характерные для данной бактерии.
Билет №3
Фазово-контрастный микроскоп. Устройство, применение.
Метод фазово-контрастной микроскопии основан на том, что живые клетки и микроорганизмы, слабо поглощающие свет, тем не менее способны изменять фазу проходящих через них лучей (фазовые объекты). В разных участках клеток, отличающихся показателем преломления и толщиной, изменение фаз будет неодинаковым. Эти разности фаз, возникающие при прохождении видимого света через живые объекты, можно сделать видимыми с помощью фазово-контрастной микроскопии.
Фазово-контрастная микроскопия осуществляется с помощью обычного светового микроскопа и специального приспособления, куда входят фазово-контрастный конденсор с кольцевыми диафрагмами и фазовая пластинка, имеющая форму кольца. Для первоначальной наводки используют вспомогательный микроскоп, с помощью которого добиваются того, чтобы через кольцевую диафрагму конденсора в объектив проникало лишь кольцо света.
Луч света, пройдя через прозрачный объект, расщепляется на два луча: прямой и дифрагированный (преломленный). Прямой луч, проникнув через частицу, фокусируется на кольце фазовой пластинки, а дифрагированный луч как бы огибает частицу, не проходя через нее. Поэтому оптические пути их различны и между ними создается разность фаз. Она сильно увеличивается с помощью фазовой пластинки и благодаря этому контрастность изображения повышается, что позволяет наблюдать не только фазовые объекты целиком, но и детали строения, например, живых клеток и микроорганизмов.