0,00035 – Постоянная величина.
На нижнюю призму рефрактометра наносят каплю исследуемого жира. Осветителем направляют пучок света в осветительную призму. Через окуляр ведут наблюдение. Определяют деление шкалы, через которое проходит граница светотени. Это и будет коэффициент преломления исследуемого жира. Ниже представлены коэффициенты преломления животных жиров при температуре 20 °С:
Жир |
Показатель |
Жир |
Показатель |
Лошадиный |
1,4563-1,4590 |
Говяжий |
1,4470-1,4480 |
Бараний |
1,4468-1,4490 |
Свиной |
1,4500-1,4560 |
Собачий |
1,4512 |
Кошачий |
1,4563 |
Сурковый |
1,4670-1,4680 |
Барсучий |
1,4560-1,4660 |
Медвежий |
1,4541 |
|
|
4.Реакция преципитации
С помощью этой реакции удается распознать видовую принадлежность мяса даже в тех случаях, когда оно подвергалось посолу, замораживанию или тепловой обработке.
Сущность её состоит в том, что взаимодействии экстракта белка (антиген) с соответствующей преципитирующей сывороткой образуются осадок- преципитат.
Ход работы. Для постановки реакции необходимо иметь набор соответствующих сывороток, а также нормальную сыворотку крови животных различных видов.
Исследуемое мясо освобождают от жира и соединительной ткани, измельчают и заливают свежеприготовленным физиологическим раствором 1:10. Экстрагируют 2-3 часа сырое мясо, вареные и готовые продукты до 24 часов. Фильтруют через стерильный и бумажный фильтр или центрифугируют до полной прозрачности.
Для постановки реакции концентрация белка в экстракте должна быть 1:1000, определяют её следующим образом: капилляр пастеровской пипетки длиной около 10 см опускают в экстракт и заполняют ½ капилляра, затем этот же капилляр вносят наклонно в концентрированную азотную кислоту на часовом стекле. Азотная кислота входит в капилляр. На месте соприкосновения жидкостей в капилляре образуется осадок белка в виде белого кольца. Если осадок получается густой и массивный, то экстракт разводят физиологическим раствором, и пробу проверяют до тех пор, пока белое кольцо свернувшегося белка не будет едва заметным. Полное отсутствие осадка при постановке капиллярной пробы указывает, что концентрация белка в экстракте меньше 1:1000. С таким экстрактом реакцию можно также, потому что титр преципитирующих сывороток выше, чем 1:1000.
Для постановки реакции преципитации готовят 7 рядов уленгутовских пробирок, по 3 в каждом ряду. В первые пробирки каждого ряда наливают по 0,9 мл экстракта исследуемого мяса , во вторые – по 0,9 мл физиологического раствора и в третьи – по 0,1 мл сыворотки, преципитирующей белок крупного рогатого скота, в последующей ряды в таком же количестве сыворотки, преципитирующей белок свиньи , овец, собак, кошек, кроликов.
Реакцию читают на темном фоне. Положительной реакцией считают появление мутно- белого кольца на месте соприкосновения экстракта и преципитирующей сыворотки в течение нескольких минут. Образовавшиеся осадки спустя один час считаются неспецифическими.
Положительные реакции в первой и третьей пробирках одного ряда показывают, что исследуемое мясо соответствует специфической преципитирующей сыворотке. Во всех остальных рядах в первых пробирках реакция должна быть отрицательной, во вторых пробирках всех рядов ( контрольная проба) реакция должна быть отрицательной, в третьих пробирках всех рядов – положительной.
