17. Опишите порядок определения группы крови и резус-фактора.

Для определения группы крови пользуются тремя сыворотками: О, А, В. На тарелке или пластине пишут фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови и обозначения стандартных сывороток: слева О (І), в середине А (ІІ), справа В (ІІІ). Под обозначенными сыворотками капают по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп. При этом используют сыворотки двух различных серий каждой группы, так что всего получается 6 капель, которые образуют 2 ряда по три капли. Сыворотку из флаконов берут пипеткой, которую сразу же после того, как из нее была выпущена сыворотка, опускают в тот же флакон. 6 маленьких капель крови (0,01 мл) реципиента последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на тарелку, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Последовательно, отдельными стеклянными палочками перемешивают кровь с сыворотками до тех пор, пока смеси не окрасятся в равномерно красный цвет. После перемешивания тарелку покачивают и оставляют на 1-2 мин в покое и снова периодически покачивают в течение 5 мин. Агглютинация обычно начинается в течение первых 10-30 сек. По мере наступления агглютинации (но не ранее 3 мин) к каплям, где она произошла, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и продолжать наблюдение при покачивании до истечения 5 мин. При положительной реакции в капле появляются мелкие красные комочки, а при отрицательной капля остается красного цвета.

Определение резус-фактора экспресс методом. На белой пластине со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуют. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка антирезус», на правом – «контрольная сыворотка». Соответственно надписям слева помещают 1-2 капля реактива антирезус, справа – контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с сывороткой сухой стеклянной палочкой. Пластину слегка покачивают. Через 3-4 мин для снятия возможной специфической агглютинации к каждой капле добавляют 5-6 капель изотонического раствора хлорида натрия. Затем пластинку снова покачивают в течение 5 мин.

Определение группы крови с применением цоликлонов

Лриготовить: ампулы с цоликлонами анти-А и анти-В, 2 ампулы с растворителем, исследуемую кровь, стеклян­ные палочки, пипетки, чаши, часы.

• Обработать спиртом ампулы с цоликлонами и ампулы с растворителем.

Вскрыть ампулы с цоликлонами анти-А и анти-В и 2 ампулы растворителя.

Перенести растворитель отдельными пипетками в ампулы с цоликлонами.

Встряхнуть несколько раз и закрыть ампулы (полученные реагенты можно хранить до 3-х месяцев).

Нанести одну большую каплю цоликлона анти-А и анти-В на чашку.

Нанести по одной маленькой капле крови рядом с каплей цоликлона (в 10 раз меньше).

Смешать кровь с раствором цоликлона отдельными стеклянными палочками

Наблюдать в течение 2,5 минут и оценить реакцию

Определение резус-фактора по стандартной сыворотке-антирезус

Приготовить: пипетки, пробирки, физиологический раствор.

Внести пипеткой 2 капли сыворотки в конусную пробирку.

Добавить пипеткой 1 каплю крови.

Встряхнуть пробирку.

Добавить в пробирку 2 капли физиологического ра­створа.

Встряхнуть пробирку или вращать между ладонями в течение 5 минут.

Посмотреть на стенки пробирки и оценить результат. Если есть реакция, то у пациента резус-положительный фактор.

Определение группы крови по системе АВ0 (стандартная методика).

1. Исследование проводится при помощи двух серий стандартных гемагглютинирующих сывороток (I сыворотка – этикетка бесцветная, II – синяя, III – красная, IV – ярко-желтая) на подписанной (фамилия больного) фарфоровой пластинке или тарелке.

2. Соотношение объема исследованной крови и сыворотки должно быть 1:10.

3. Исследование можно производить при температуре воздуха от 15 до 25 0С.

4. Пластинку осторожно покачивают. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. Результат читают через 5 мин:

1) I группа крови - агглютинации нет ни в одной капле;

2) II группа - стандартные сыворотки I и III групп агглютинируют эритроциты, а с сывороткой II группы агглютинация не наступает;

3) III группа - стандартные сыворотки I и II групп дают положительную реакцию, а сыворотка III группы - отрицательную;

4) IV группа - стандартные сыворотки всех трех групп вызывают агглютинацию. Однако для окончательного заключения необходимо провести контрольное исследование на специфичность реакции со стандартной гемагглютинирующей сывороткой IV группы.

Определение группы крови по системе АВО (экспресс-методика).

1. Исследование проводят двумя моноклональными сыворотками: анти-А (розового цвета) и анти-В (бирюзового цвета).

2. Реакция проводится на фарфоровой пластинке при обычном температурном режиме.

3. Наблюдают при покачивании в течение 3 мин.

Результат читается следующим образом:

1) с сывороткой анти-А агглютинации нет, а с анти-В есть - исследуемая кровь В (III);

2) в капле с сывороткой анти-А наступила агглютинация, с анти-В нет - исследуемая кровь А (II);

3) агглютинация наступила с обеими сыворотками - исследуемая кровь АВ (IV);

4) агглютинация не наступила в обеих каплях - кровь 0 (I);

Определение Rh-фактора крови - в настоящее время проводится с использованием универсального реагента антирезус.

1. На дно пробирки помещают 1 каплю исследуемой крови и 1 каплю стандартного реагента и встряхивают.

2. Кладут пробирку на горизонтальную поверхность и «катают» ладонью не менее 3 мин, чтобы содержимое растекалось по стенкам

3. Добавляют 2-3 мл физраствора, закрывают пробирку пробкой и 2-3 раза спокойно переворачивают.

Оценка результата: на фоне света, если видны крупные хлопья – произошла агглютинация (резус-положительная кровь), если в пробирке равномерная розовая жидкость без хлопьев – агглютинации нет (резус-отрицательная кровь)

Проба на индивидуальную групповую совместимость (по системе АВО)

На чистую сухую поверхность планшета или пластинки при комнатной температуре наносят и смешивают в соотношении 10:1 сыворотку реципиента и кровь донора. Периодически покачивая планшет, наблюдают за ходом реакции. При отсутствии агглютинации в течение 5 мин кровь совместима. Наличие агглютинации указывает на несовместимость крови реципиента и донора (рис. 115). Такую кровь переливать нельзя.

В сомнительных случаях результат пробы контролируют под микроскопом: при наличии монетных столбиков, исчезающих после добавления теплого (+37°С) 0,9% раствора натрия хлорида, кровь совместима; если в капле смеси видны агглютинаты, не расходящиеся при добавлении теплого 0,9% раствора натрия хлорида, кровь не совместима.

Проба на совместимость по резус-фактору (с 33% раствором полиглюкина в пробирке без подогрева)

Для постановки пробы необходимо иметь 33% раствор полиглюкина, 0,9% раствор натрия хлорида, пробирки лабораторные, штатив, сыворотку реципиента, кровь донора.

Техника проведения исследования. Пробирки маркируют с указанием фамилии и инициалов больного, его группы крови и номера контейнера (бутылки) с донорской кровью. На дно пробирки пипеткой наносят две капли сыворотки крови больного, одну каплю донорской крови и одну каплю 33% раствора полиглюкина. Содержимое пробирки перемешивают путем однократного встряхивания. Затем пробирку в течение 5 мин вращают вокруг продольной оси таким образом, чтобы содержимое ее растекалось (размазывалось) по стенкам пробирки. После этого в пробирку добавляют 2—3 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем дву-, трехкратного перевертывания пробирки (взбалтывать запрещается!), просматривают ее в проходящем свете и выносят заключение. Наличие агглютинации в пробирке указывает, что кровь до-нора несовместима с кровью больного и не должна быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным и не наблюдается признаков агглютинации эритроцитов, кровь донора совместима с кровью больного.