
- •Глава 1. Обзор литературы……………………………………………………………………………………………………………...4
- •Глава 2. Материалы и методы исследования………………………………………………………………………………………..28
- •Глава 3. Результаты……………………………………………………………………………………………………………………….39
- •Глава 4. Обсуждение результатов………………………………………………………………………………………………………..46
- •Глава 1. Обзор литературы
- •1.1.1. Регуляция экспрессии генов
- •1.1.1.1. Экспрессия генов и её особенности
- •1.1.1.2. Регуляция экспрессии генов на уровне транскрипции
- •1.1.1.3. Посттранскрипционная регуляция экспрессии генов
- •1.1.2. Проблемы изучения транскриптома
- •1.2. Церебральная ишемия
- •1.2.1. Реакция тканей на снижение уровня кровотока
- •1.2.2. Клеточные реакции при ишемии головного мозга
- •1.2.3. Глутамат-кальциевый каскад
- •1.2.4. Реакция генома на ишемию
- •1.2.5. Комплексины и их возможное участие в глутаматной эксайтотоксичности
- •1. 3. Нейропротекция при ишемии
- •1.3.1 Семакс и pgp
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2. 1. Объект исследования
- •Дистальная окклюзия средней мозговой артерии у крыс
- •2.2. Методы исследования
- •2.2.1. Электрофоретическое разделение рнк
- •2.2.2. Синтез одноцепочечной кДнк
- •2.2.3. Подбор праймеров
- •2.2.4. Полимеразная цепная реакция в реальном времени (Real-time pcr)
- •2.2.5. Анализ уровня экспрессии генов методом от-пцр
- •Глава 3. Результаты
- •3.1. Влияние ишемии на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
- •3.2. Влияние семакса на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
- •3.3. Влияние pgp на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
- •Глава 4. Обсуждение результатов
- •53. Клигуненко е.Н., Дзяк л.А., Площенко ю.А., Емельянова е.А., Зозуля о.А. Нейропротекция в анестезиологии и интенсивной терапии // Международный неврологический журнал, 2008, 2 (18).
3.2. Влияние семакса на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
Исследование влияния семакса проводились в структурах лобных долей (левая сторона) и в подкорке отдельно для каждого из двух транскриптов гена Cplx2. В таблицах 4 и 5 представлены результаты анализа экспрессии двух типов мРНК гена Cplx2 в мозге ишемизированных крыс, получавших семакс, в разное время после окклюзии сонных артерий: через 3 часа, через 24 часа и через 72 часа. В качестве контроля использовались данные, полученные от ишемизированных животных, которым вводился физраствор.
При этом статистически значимые результаты в лобной коре не были получены. Можно отметить лишь незначительное снижение экспрессии по сравнению с контрольным вариантом. В наибольшей степени по сравнению с остальными группами снижение уровня экспрессии отмечается через 72 часа после окклюзии сонных артерий (отношение уровня экспрессии гена у исследуемой группы к таковому у контрольной группы – 0,6). В подкорке значимого влияния семакса на экспрессию транскриптов Cplx2 не обнаружено. Наблюдается небольшое повышение количества транскриптов гена (в 1,3 раз) у 24-часовой группы, далее уровень экспрессии вновь снижается, почти сравниваясь с таковым у контрольной группы. При этом снова обнаруживается одинаковое влияние фактора (в данном случае семакса) на содержание обоих транскриптов гена Cplx2.
Таблица 4. Динамика изменений относительного содержания транскриптов гена Cplx2 в лобных долях коры головного мозга крыс, подвергнутых фокальной ишемии, получавших семакс и PGP. Числовое значение показывает, во сколько раз отличается уровень транскриптов гена у животных, получавших семакс или PGP, от уровня мРНК этого гена у ишемизированных животных, получавших физраствор. Данные представлены в виде R + SE, * – p < 0.05. Статистически значимые результаты дополнительно выделены жирным шрифтом.
Кора |
3ч |
24ч |
72ч |
Семакс |
|||
Cplx2_v1 |
0.9 ± 0.20 |
0.8 ± 0.36 |
0.6 ± 0.37 |
Cplx2_v2 |
0.9 ± 0.21 |
0.8 ± 0.28 |
0.6 ± 0.38 |
PGP |
|||
Cplx2_v1 |
1.0 ± 0.15 |
0.7 ± 0.25 |
0.2 ± 0.12* |
Cplx2_v2 |
1.1 ± 0.16 |
0.6 ± 0.20 |
0.2 ± 0.12* |
Таблица 5. Динамика изменений относительного содержания транскриптов гена Cplx2 в подкорке крыс, подвергнутых фокальной ишемии, получавших семакс и PGP. Числовое значение показывает, во сколько раз отличается уровень транскриптов гена у животных, получавших семакс или PGP, от уровня мРНК этого гена у ишемизированных животных, получавших физраствор. Данные представлены в виде R + SE.
Подкорка |
3 ч |
24 ч |
72 ч |
Семакс |
|||
Сplx2_v1 |
1.0 ± 0.47 |
1.3 ± 0.3 |
1.1 ± 0.18 |
Cplx2_v2 |
1.0 ± 0.43 |
1.3 ± 0.29 |
0.9 ± 0.24 |
PGP |
|||
Cplx2_v1 |
1.7 ± 0.62 |
1.4 ± 0.38 |
1.1 ± 0.25 |
Cplx2_v2 |
1.7 ± 0.58 |
1.3 ± 0.38 |
1.3 ± 0.34 |