
- •Глава 1. Обзор литературы……………………………………………………………………………………………………………...4
- •Глава 2. Материалы и методы исследования………………………………………………………………………………………..28
- •Глава 3. Результаты……………………………………………………………………………………………………………………….39
- •Глава 4. Обсуждение результатов………………………………………………………………………………………………………..46
- •Глава 1. Обзор литературы
- •1.1.1. Регуляция экспрессии генов
- •1.1.1.1. Экспрессия генов и её особенности
- •1.1.1.2. Регуляция экспрессии генов на уровне транскрипции
- •1.1.1.3. Посттранскрипционная регуляция экспрессии генов
- •1.1.2. Проблемы изучения транскриптома
- •1.2. Церебральная ишемия
- •1.2.1. Реакция тканей на снижение уровня кровотока
- •1.2.2. Клеточные реакции при ишемии головного мозга
- •1.2.3. Глутамат-кальциевый каскад
- •1.2.4. Реакция генома на ишемию
- •1.2.5. Комплексины и их возможное участие в глутаматной эксайтотоксичности
- •1. 3. Нейропротекция при ишемии
- •1.3.1 Семакс и pgp
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2. 1. Объект исследования
- •Дистальная окклюзия средней мозговой артерии у крыс
- •2.2. Методы исследования
- •2.2.1. Электрофоретическое разделение рнк
- •2.2.2. Синтез одноцепочечной кДнк
- •2.2.3. Подбор праймеров
- •2.2.4. Полимеразная цепная реакция в реальном времени (Real-time pcr)
- •2.2.5. Анализ уровня экспрессии генов методом от-пцр
- •Глава 3. Результаты
- •3.1. Влияние ишемии на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
- •3.2. Влияние семакса на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
- •3.3. Влияние pgp на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
- •Глава 4. Обсуждение результатов
- •53. Клигуненко е.Н., Дзяк л.А., Площенко ю.А., Емельянова е.А., Зозуля о.А. Нейропротекция в анестезиологии и интенсивной терапии // Международный неврологический журнал, 2008, 2 (18).
Глава 3. Результаты
3.1. Влияние ишемии на экспрессию гена Cplx2 в коре и подкорковых структурах головного мозга крыс
Сначала исследовалось влияние фокальной ишемии на экспрессию транскриптов гена Cplx2 в лобной коре (повреждённый ишемией участок) и подкорке (часть мозга, которая находится под повреждённым участком коры) животных. Результаты анализа представлены в таблицах 2 и 3. Контрольными в данном случае считались данные ложнооперированных животных. В качестве препарата обе группы получали физраствор.
Анализ полученных данных показал следующее: через 3 часа количество обоих транскриптов как в коре, так и в подкорке, по сравнению с контрольной группой было незначительно сниженным. Через 24 часа фиксировалось довольно значительное снижение содержания обоих транскриптов (более чем в 2 раза) по сравнению с контрольной группой в коре головного мозга ишемизированных животных, что является статистически значимым результатом. В подкорке же снижение оставалось незначительным (в 0,7 раз) по сравнению с контрольной группой. Через 72 часа после окклюзии количество транскриптов Cplx2 в коре было выше в 2,3 – 2,6 раз по сравнению с контрольной группой. Однако значительное варьирование результатов в группе ложнооперированных крыс через 72 часа не позволяет считать различие между этими группами статистически достоверными. При этом серьёзных изменений экспрессии транскриптов Cplx2 в подкорке не было обнаружено (0,9 от уровня у ложнооперированных животных). Иначе говоря, исследование показало, что колебания уровня экспрессии гена Cplx2 (в двух вариантах транскриптов) при ишемии выражены в лобной коре головного мозга крыс и слабо выражены в подкорковых структурах. Что, по-видимому, отражает степень повреждения этих областей. Кроме того, важно отметить: исследуемый в данном случае фактор (ишемия) одинаково влияет на характер изменений экспрессии обоих транскриптов: уровень экспрессии снижался и повышался почти в одинаковое количество раз по сравнению с контрольными особями, хотя абсолютное количество двух разных транскриптов в зонах головного мозга различалось.
Таблица 2. Динамика изменений относительного содержания транскриптов гена Cplx2 (2 варианта транскриптов данного гена) в лобных долях головного мозга крыс, подвергнутых фокальной ишемии, получавших физраствор.
Числовое значение показывает, во сколько раз отличается уровень транскриптов гена у ишемизированных животных, получавших физраствор, от уровня мРНК этого гена у ложнооперированных животных. Жирным шрифтом выделены статистически значимые результаты. Данные представлены в виде R + SE, * – p < 0.05.
Кора |
3ч |
24ч |
72ч |
Ишемия |
|||
Cplx2_v1 |
0.8 ± 0.10 |
0.5 ± 0.12* |
2.3 ± 1.36 |
Cplx2_v2 |
0.9 ± 0.14 |
0.5 ± 0.11* |
2.6 ± 1.56 |
Таблица 3. Динамика изменений относительного содержания транскриптов гена Cplx2 в подкорковых областях головного мозга крыс, подвергнутых фокальной ишемии, получавших физраствор. Числовое значение показывает, во сколько раз отличается уровень транскриптов гена у ишемизированных животных, получавших физраствор, от уровня мРНК этого гена у ложнооперированных животных. Данные представлены в виде R + SE.
Подкорка |
3ч |
24ч |
72ч |
Ишемия |
|||
Cplx2_v1 |
0.7 ± 0.28 |
0.7 ± 0.15 |
0.9 ± 0.19 |
Cplx2_v2 |
0.7 ± 0.27 |
0.7 ± 0.13 |
0.9 ± 0.23 |