3. Медицинская и ветеринарная диагностика вирусных заболеваний.

Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используются различные методы.

Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия - сами вирионы, и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ротавирусную).

Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию. Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.

Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью:

• определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиуридоном), 

• особенностей ее строения (электронная микроскопия), 

• размером вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм), 

• наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром), 

• гемагглютининов (реакция гемагглютинации), 

• типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия). 

Результаты оцениваются по заражению культуры ткани пробой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последующим учетом результатов заражения методом цветной пробе фильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусонейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологическую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивается так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, результатам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутствию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживаемости чувствительных животных.

Вирусологическое исследование - это "золотой стандарт" вирусологии и должно проводится в специализированной вирусологической лаборатории. В настоящее время оно используется практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.

Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и иммуноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакциях иммунитета:

• радиоизотопный иммунный анализ (РИА), 

• иммуноферментный анализ (ИФА),

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ),

• реакция связывания комплемента (РСК),

• реакция пассивной гемагглютинации (РПГА),

• реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и другие.

При использовании методов серодиагностики обязательным является исследование парных сывороток. При этом четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперенесенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса Ig М, свидетельствующее об острой инфекции.

Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций молекулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимеразной цепной реакции - ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие вирусы, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые или не обнаруживаемые другими методами.

Диагностика играет одну из решающих ролей в системе мероприятий по борьбе с болезнями животных вирусной этиологии. Быстрый и правильно поставленный диагноз обеспечивает успех в ликвидации вспышки болезни, так как позволяет четко выяснить эпизоотическую ситуацию и своевременно принять целенаправленные меры по оздоровлению поголовья животных с наименьшими потерями.  Для постановки диагноза требуется сбор, изучение, анализ и сопоставление целого комплекса различных данных. Поэтому диагноз — результат кропотливой и вдумчивой работы. На первом этапе диагностики используют данные, которые можно быстро собрать непосредственно в хозяйстве. К таковым относятся:

• эпизоотологические данные, включающие свои сведения об охвате болезнью данного поголовья животных, скорости и территориальном распространении болезни, видах заболевших животных, динамике выявления больных и т,д. ;

• клинические признаки болезни. Они включают определение (по сравнению с нормой) температуы тела, частоты и формы дыхания, частоты пульса, нарушение аппетита, поведение, состояния кожных покровов и слизистых оболочек, функционирования органов пищеварения, выделения т.д. ;

• патологоанатомические изменения, которые обычно устанавливают при вскрытии павших животных. Различают макроскопические изменения (по сравнению с нормой) формы, размера, цвета, консистенции, появление узелков, кровоизлияний, везикул и другие образования, не встречающиеся в норме, а также микроскопические изменения в клетках и тканях, обнаруживаемые гистологическими методами.

Чаще всего на основании этих данных можно поставить предварительный диагноз, так как многие вирусные болезни имеют сходные эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения ( например, парагрипп — 3, вирусная диарея, инфекционный ринотрахеит, распираторно - синцитиальная и аденовирусная инфекция крупного рогатого скота или болезни Ньюкалса и грипп птиц и др.). Кроме того, часто болезнь может быть вызвана не одним, а двумя и более этиологическими агентами ( например, вирусом и бактериями или двумя и более вирусами). Даже такое заболевание как ящур крупного рогатого скота, можно довольно уверенно диагностировать по эпизоотологическим, клиническим и патологоанатомическим данным, однако требуются лабораторные иследования типа и варианта возбудителя.  Несмотря на ориентировочный характер предварительного диагноза, он играет весьма важную роль, так как он ориентирует ветеринарных специалистов на проведение соответствующих мероприятий. Окончательный диагноз на вирусную болезнь в большинстве случаев может быть поставлен только с учетом результатов лабораторных исследований. В лабораторной диагностике вирусных болезней точность дианоза прежде всего зависит от правильности взятия материала (пробы) от больных и павших животных, его транспортировки, качества приготовления и техники исследования вирусного материала.