Определение титра комплемента микрометодом

/ Н. С. Мотавкина, Б. М. Ковалев, А. С. Шаронов, 1989/

Приготовить равные объемы гемолитической системы 2% и 2% расплавленной и остуженной до +45С° агарозы. Смесь залить в камеру, приготовлен­ную из двух фотопластин и прокладки между ними. После застывания геля и осторожного удаления верхней пластины сделать в нем с помощью гель-пробойника луноч­ки. В них внести испытуемые и контрольные сыворотки, содержащие комплемент крови, инкубировать во влажной камере 2 часа при 37º С. Активность комплемента определяют по формуле:

, где

Со – активность элемента в опытной сыворотке,

До - диаметр зоны лизиса вокруг опытной сыворотки,

Дк – диаметр зоны лизиса вокруг контрольной сыворотки,

Ск - активность комплемента в контрольной сыворотке

Приложение 4

а) ОПРЕДЕЛЕНИЕ β - ЛИЗИНОВ МИКРОМЕТОДОМ

/по Н.С. Мотавкиной, Б.М. Ковалеву, А.С. Шаронову,1989

Камера заполняется по вышеприведенному описанию смесью расплавленного и остуженного до +45С° 2% раствора агарозы и тест - культуры Bac. subtilis (сенная палочка) в концентрации 10 тыс. м.т./мл. После застывания в геле делают микролунки, куда вносят исследуемый субстрат и соответствующие контроли. Пластины инкубируют при +37 С° 18-24 часа. Расчет активности бета-лизинов проводят по формуле, описанной для комплемента.

б) ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕТА-ЛИЗИНОВ КЛАССИЧЕСКИМ МЕТОДОМ СЕРИЙНЫХ

Р АЗВЕДЕНИЙ

Ингредиенты	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	К.к.	К.с.
МПБ	1,8	1	1	1	1	1	-	-
Сыворотка крови больного	0,2	1	1	1	1	1	1	1
Тест-микроб Bac. subtilis 600 млн. мт/ в каплях	2к	2к	2к	2к	2к	2к	2к	-
Инкубировать при +37 С° 18 часов
Учет результатов по лизису тест - культуры	ПОЛНЫЙ ЛИЗИС					Нет лизиса	Рост тест-культуры	Нет роста

Титр бета-лизинов - 1:160 (максимальное разведение или минимальное количество, дающее лизис) тест – культуры Bac. subtilis (сенная палочка).

Приложение 5

Определение общей бактерицидной активности сыворотки крови

Определенный объем сыворотки крови смешивают с тест – культурой S.flexneri и E. coli (опыт). В контрольную пробу в таком же объеме вместо сыворотки крови вносят стерильный 0,85 % раствор поваренной соли и одну из тест – культур.

Посев инкубируют в термостате при +37С º. Последующая оценка бактерицидной активности может быть определена одним из следующих способов:

а) Путем высева из опытных и контрольной проб на чашки с МПА и инкубирования последней при +37С° 18-24 час., подсчетом колоний на опытных и контрольных чашках с их сопоставлением.

б) Методом фотонефелометрической оценки бактерицидной активности сыворотки крови (Смирнова, Кузьмина, 1966), при котором сопоставляются показатели оптической плотности опытных и контрольных проб и определяется бактерицидная активность в % по формуле:

в) Путём учёта просветления в опытных пробах в результате проявления бактерицидности.

Приложение 6