
- •Методические рекомендации для студентов
- •1. Тема занятия. Основные этапы развития учения о защитных силах организма, его иммунитете, вклад отечественных ученых. Учение об иммунитете и неспецифическая защита организма от инфекций.
- •3. Цели занятия.
- •3.2.Конкретные цели и задачи.
- •4. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
- •4.1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.
- •4.2. Задания для срс во вне учебное время
- •4.3. Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию (тесты). Тестовый контроль исходного уровня:
- •5. Этапы проведения практического занятия.
- •6. Ориентировочная основа действия (оод) для проведения практического занятия (выполнение лабораторной работы и т.Д.).
- •7. Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.
- •9.Учебно-материальное обеспечение:
- •9.2. Программное обеспечение и Интернет-ресурсы базы данных, информационно-справочные и поисковые системы:
- •Опыт фагоцитоза
- •Определение опсонофагоцитарного показателя по методу и таблице Шриттер — Мурсаловой
- •Б) Оценка завершенности фагоцитоза ускоренным методом Мотавкиной н.С., Ховриной м.П. (1962).
- •А) определение титра лизоцима классическим методом
- •Б) определение титра лизоцима микрометодом по н.С. Мотавкиной, б.М. Ковалеву, а.С. Шаронову (1979)
- •Определение титра комплемента по 100% гемолизу гемосистемы
- •Определение титра комплемента микрометодом
- •Определение общей бактерицидной активности сыворотки крови
- •Пути активации комплемента
Определение опсонофагоцитарного показателя по методу и таблице Шриттер — Мурсаловой
Количество микробов, фагоцитированных одним фагоцитом (ФИ) |
Оценка фагоцитоза по выраженности
|
Количество нейтрофилов с таким фагоцитозом
|
ОФИ
|
0 1-20 21-40 41 и более |
0 + /1/ ++ /2/ +++ /3/ |
0 10 10 5 |
0 10 20 15 |
ИТОГО: 25 45 |
ОФИ, равный 10-24, характеризует слабоположительную реакцию, 25-49 — ясно выраженную, 50-75 резко положительную.
Кроме того, в отношении ОФИ по отношению к возбудителям некоторых инфекций (например, к бруцеллам) есть специальная оценочная шкала.
а) Оценка завершённости фагоцитарной реакции по индексу завершённости.
Кровяно — микробную взвесь инкубируют при +37Сº 2 часа. После этого из неё готовят мазок, высушивают и отдельно не фиксируют, окрашивают сначала раствором прочного зелёного 20 минут и докрашивают 0,1 % водным раствором азура П.
При этом жизнеспособные клетки окрашиваются в сине-сиреневый цвет.
Определяют ИЗФ – индекс завершённости фагоцитоза рассчитывается по формуле:
ИЗФ = Е 30 мин , где
Е 2 часа
Е 30 мин. – общее количество микробных клеток в 100 фагоцитах через 30 минут;
Е 2 часа – общее количество микробных клеток в 100 фагоцитах через 2 часа, то есть после окончания фагоцитоза.
Завершённым должен быть фагоцитоз с не менее 2/3 фагоцитов (~60 % и >).
Б) Оценка завершенности фагоцитоза ускоренным методом Мотавкиной н.С., Ховриной м.П. (1962).
Она осуществляется сразу после окончания опыта путем обработки микробо-кровяной (лейкоцитарной) взвеси раствором флюорохрома - акридина оранжевого 1:1000. Мёртвые особи под люминисцентным микроскопом оранжево-жёлтые, живые – зелёные. Расчёт завершённости делают по проценту фагоцитов с поглощёнными микроробами.
Приложение 2
А) определение титра лизоцима классическим методом
По лизису индикаторной культуры чувствительного микрококка M. lysodeikticus
Ингредиенты |
Разведения сыворотки, слюны |
|||||||
|
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
К. к. |
Физиологический 0,85% раствор поваренной соли |
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
Субстрат (сыворотка) испытуемый
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1 до 1 % р-р
|
Тест-культура микрококка (1 млрд мт в 1 мл) в каплях |
2 к.
|
2 к.
|
2 к.
|
2 к.
|
2 к.
|
2 к.
|
2 к.
|
2 к. |
Инкубировать 3 часа при +37С° |
||||||||
Учет результатов |
Лизис тест-культуры |
Отсутствие лизиса |
Титр лизоцима в исследуемом субстрате равен 1:40 (максимальное разведение, или минимальное количество, давшее лизис культуры и просветление).