4. Перечень испытательного оборудования

Все работы с культурами клеток проводились в стерильном ламинарном боксе, культивирование клеток – в СО₂-инкубаторе.

Перечень необходимого оборудования представлен в таблице 1

Таблица 1 – Испытательное оборудование, средства измерения

Наименование, тип

Центрифуга лабораторная ОПН-3,02

Микроскоп Axioskop40

Термостат ТС 80М-2 электрический суховоздушный

Сушильный шкаф СНОЛ-67/350

Микроскоп АУ-12

Весы электронные Adventurer OHAUS

Инкубатор СО2

3. Результаты исследований

1. Влияние наночастиц серебра на жизнеспособность клеток линий а549, shr и сублинии fl по результатам мтт-теста

Гибель клеток, индуцированную наночастицами, оценивали по изменению оптической плотности раствора по отношению к контролю. Результаты представлены на рисунках 4.

Рисунок 4 – Влияние НЧ серебра на клетки различных линий

Как показали результаты МТТ-теста, средняя ингибиторная концентрация (IC50) наночастиц серебра – концентрация, которая на 50 % подавляет способность клеток переводить соль тетразолина в формазан, определенная графическим способом, для клеток линии А549 и сублинии FL практически совпала и составила 1,3 и 1 мг/мл соответственно. В эксперименте на кардиомиоцитах крысы IC50 наночастиц серебра определена на уровне 8 мг/мл.

Таким образом, данные, полученные в эксперименте, свидетельствуют о более высокой чувствительности клеток линий А549 и FL к действию наночастиц по сравнению с кардиомиоцитах крысы. Вероятно, это связано с более высокой скоростью деления трансформированных клеток и клеток амниона, а также интенсивностью метаболизма.

2. Влияние наночастиц на жизнеспособность лимфоцитов человека по результатам мтт-теста

В эксперименте на лимфоцитах человека, которые культивировали в течение 48 ч, продемонстрирована с наночастицами серебра (IC50 = 100 мкг/мл). Средняя ингибиторная концентрация определялась графически. Результаты эксперимента представлены на рисунках 5.

Рисунок 5 – Влияние НЧ серебра на лимфоциты человека

Сопоставив результаты МТТ-теста на лимфоцитах человека и предыдущего эксперимента, можно сделать вывод о том, что НЧ серебра для лимфоцитов на порядок токсичнее, чем для любой использованной ранее культуры клеток.

3. Изучение цитотоксичности наноматериалов для клеток линии а549 с помощью окраски метиленовым синим

Клетки линии А549 высевали в 24-луночные планшеты, куда вносили НЧ серебра. Для оценки жизнеспособности клеток использовали 0,4 % раствор метиленового синего. Окрашивание проводили через 8 и 24 ч после внесения наночастиц. Подсчет числа клеток проводили в 5 произвольных полях зрения, рассчитывали среднее значение Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Таблица 2 – Влияние НЧ серебра в различных концентрациях на жизнеспособность клеток линии А549

Вариант опыта	Число клеток
	8 ч			24 ч.
	Общее число клеток	Число окрашенных клеток	% гибель	Общее число клеток	Число окрашенных клеток	% гибель
НЧ серебра, 100 мкг/мл	67,2	4,6	6,8	88,4	5,6	6,3
НЧ серебра, 300 мкг/мл	74	29	37,3	42,2	32,6	77,2

Показано, что при увеличении времени воздействия эффект наночастиц серебра на клетки возрастает.

Можно сделать вывод о применимости метода окраски клеток в культуре метиленовым синим для определения цитотоксического действия НЧ путем оценки целостности мембран клеток.