3 Вопрос по боре практике бактериальные вирусы (фаги)

/

Вирусы бактерий (фаги), или бактериофаги, широко распространены в окружающей среде — водоемах, почве. Фаги кишечных бактерий — кишечной палочки, шигелл, сальмонелл — могут быть выделены из сточных вод и испражнений. Стафилофаги обнаруживаются в слизи из носоглотки, на коже и в раневом отделяемом, фаги клостридий анаэробной раневой инфекции —в раневом отделяемом, почве. Наличие фага в среде указывает на присутствие чувствительных к нему бактерий.

Существуют вирулентные и умеренные фаги. Вирулентные фаги вызывают инфекцию, заканчивающуюся лизисом бактериальных клеток и синтезом новых фаговых частиц. Умеренные фаги не лизируют зараженные ими клетки.

Рис. 36. Поражение на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона, зараженного вирусом оспы.

ДНК этих фагов включается в хромосому бактерий и передастся при их делении неограниченному числу потомков. Такой тип взаимодействия фага с клеткой называется лизогенией, а бактерии, несущие в 'своей хромосоме фаговую ДНК (профаг), являются лизогенными. Они широко распространены в природе.

Репродукция вирулентного фага в клетках бульонной бактериальной куль­туры сопровождается их лизисом и просветлением среды. На газоне чувстви­тельных бактерий, выращенных на агаровой среде в чашке Петри, фаги обра­зуют зоны очагового или сплошного лизиса, что зависит от их концентрации. Зоны очагового лизиса получили название негативных колоний фага, или стерильных пятен — бляшек (рис. 37, а, б). Они имеют морфологию, харак­терную для определенных фагов, и образуются из одной фаговой частицы при внедрении ее и последующей репродукции в бактериальных клетках.

Для получения «чистой линии» фага (свободной от при­меси других фагов) проводят последовательные пассажи морфологически однотипных негативных колоний на газоне одного и того же бактериального штамма.

Большинство фагов характеризуется видоспецифичностыо в отношении бактерий. Однако существуют фаги, которые могут поражать только отдельные варианты одного и того же вида бактерий. Их используют для определения фаготи- пов (фаговаров) внутри данного вида. Вместе с тем имеются фаги, лизирующие несколько родственных видов бактерий.

В практической работе фаги применяют для: 1) фаготипи- рования бактерий, т. е. определения фаготипа по лизису штаммов бактерий одного и того же вида типоспецифи­ческими фагами, что важно для маркировки исследуемых культур при эпидемиологическом анализе заболеваний; 2) фа- год ифференцировки бактериальных культур с целью установ­ления их видовой принадлежности; 3) фагодиагностики, заключающейся в выделении фага из организма больного (например, из испражнений), что косвенно свидетельствует о наличии в материале соответствующих микробов^ 4) фаго­профилактики — предупреждения некоторых заболеваний (например, дизентерии) среди лиц, находящихся в эпидеми­ческом очаге; 5) фаготерапии — лечения некоторых инфекци­онных заболеваний, вызванных, например, шигеллами, про­теем, стафилококком, палочкой синезеленого гноя.

Методические указания

Выделение фага из объектов окружающей среды. Для

получения вирулентного фага готовят фильтрат исходного материала (вода, суспензия фекалий и др.), пропуская его через бактериальные фильтры. Фильтрат вместе с соответст­вующей бактериальной культурой засевают в бульон и инку­бируют при 37°С в течение 18—24 ч. После лизиса культуры оставшиеся бактериальные клетки удаляют центрифугирова­нием или фильтрацией через бактериальный фильтр. Наличие фага в фильтрате определяют качественными и количествен­ными методами.

Качественный метод определения фагов Е. coli. Чашку Петри с питательным агаром засевают суточной бульонной культурой кишечной палочки газоном и подсушивают при 37°С в течение 10—15 мин. Затем на поверхность газона наносят каплю фага и наклоняют так, чтобы капля стекла к противо­положному краю. После суточной инкубации в термостате просматривают чашку, отмечая наличие зоны лизиса на месте стскания капли фага.