1. Получение накопительной культуры.

Накопительная стадия дает возможность накопить требуемый м/о в достаточном количестве. Это достигается за счет создания благоприятных условий для его роста и выживания в сравнении с др. членами популяции.

• Физические методы. Это регуляция роста t, тепловой и ультразвуковой обработкой, УФ облучением и др. Можно использовать физиологические особенности данного организма, подвижность, размеры, что позволяет отделить его от др. членов популяции.

• Получение накопительной культуры бактерий, обладающих скользящим типом движения. Пробы предварительно разведенного исследуемого биологического материала засевают петлей в конденсационную воду скошенной агаризованной питательной среды в пробирках. Посевы инкубируют при оптимальной t. Клетки, характеризующиеся скользящим типом движения, поднимаются по поверхности среды и разрастаются далеко за зону населения посевного материала.

• Использование освещения для получения культур цианобактерий. Такие виды выделяются и в пресной воде, и в морских осадках. Условия инкубации: t 25⁰С, освещение 500-3000 лк. Ч/з 4-7 дней наблюдается увеличение мутности культуры, имеющей часто розовую, коричневую, желтую окраску.

• Инкубация при низкой температуре для получения культур психрофильных бактерий. Инкубация при t 0-5⁰С в течение 14-24 дней. Многие бактерии в таких условиях не растут или погибают.

• Химические методы. Используются токсические в-ва, которые убивают или подавляют рост оставшейся части популяции, не влияя на выделяемый организм.

• Условия инкубирования в кислой среде для выделенных культур лактобацилл. Для выделения бактерий из сыров высев производится на среду, которая за счет ацетатной буферной системы имеет рН 5,3. В этом случае Lactobacillus casei, L. Plantarum способны образовывать колонии, а др. молочнокислые бактерии – нет.

• Ингибирование роста пенициллином для получения культур микоплазм. Т. к. микоплазмы не имеют клеточной стенки, они устойчивы к высоким концентрациям пенициллина, который подавляет рост бактерий с клеточной стенкой.

• Разбавленная среда для получения культур Sphaerothilus. Бактерии данного рода, образующие чехлы, встречаются в загрязненных сточных водах, открытых водоемах, где образуют слизистые «пряди», прикрепленные к погруженным в воду предметам. Получение накопительных структур основано на их способности к росту при низком содержании питательных в-в. питательную среду разбавляют водой. В течение 2-5 дней инкубирования проводят микроскопический контроль образования нитей. Для получения чистой культуры проводят рассев пленки на твердую среду.

• Целлюлоза как субстрат для цитофаг. Цитофаги разлагают целлюлозу, поэтому на поверхность основного минерального агара помещают кусочки фильтровальной бумаги. На бумагу кладут частицы почвы или растительного материала и инкубируют чашки при комнатной температуре. Следят за образованием вокруг частиц желтой, оранжевой или розовой окраски, а также процессом лизиса бумаги.

• Бактериальные клетки как субстрат для миксобактерий. Некоторые виды миксобактерий способны с помощью литических бактерий лизировать клетки др. бактерий и использовать продукты лизиса для своих целей. Бактериальные клетки (субстрат) используют в виде густой суспензии ,которую наносят мазком на поверхность водно-агаровой среды. На один конец мазка помещают 2-3 частицы почвы или кусочки растительного материала. Ч/з 2-5 дней исследуют чашки для анализа растворения бактериального мазка вокруг добавленных частиц. При обнаружении по его краям желтых, оранжевых или розовых плодовых тел их переносят на питательную среду.

• Биологические методы. Использование для выделения м/о организм хозяин.

• Получение накопительной культуры патогенных для животных организмов. Животное-хозяин инфицируют смешанной культурой с патогенным м/о, а затем выделяют его из крови и тканей. При этом в результате действия иммунной системы животного сопутствующие непатогенные организмы ингибируются и гибнут. Чистую культуру пневмококков получают введением внутрибрюшинно мыши 1 мл эмульгированной мокроты с S. Pneumoniae и др. м/о, ч/з 4-6 часов. Пробы перитонеальной жидкости берут из брюшной полости животного стерильной капиллярной пипеткой.

• Бактериальный паразитизм бделловибрионов. Способность бделловибиронов прикрепляться к Г – бактериям, проникать ч/з их клеточную стенку и размножаться в периплазматическом пространстве с последующим лизисом бактерий используется таким образом. Надосадочную жидкость, полученную в результате центрифугирования растворенной в воде почвы, пропускают ч/з мембранные фильтры с D до 0,45 мкм. Полученный фильтрат смешивают с суспензией клеток-хозяев. В составе полужидкой питательной среды смесь наслаивают на поверхность агаризованной среды в чашках Петри. После инкубации (18-24 часа) проверяют появление зон лизиса. Области лизиса вырезают из агара и наслаивают на газон чувствительной культуры.

• Симбиоз растений с Rhizobium. Клубеньки бобовых – это природная накопительная культура симбиотических азотфиксирующих бактерий. Корни с клубеньками промывают, поверхностно стерилизуют (используя сулему, этанол), помещают в воду, раздавливают пинцетом в одной чашке Петри. 1-2 петли такой суспензии переносят в следующую чашку и т. д. К каждому разведению добавляют расплавленный и остуженный агар с маннитом. После застывания агара чашки инкубируют при оптимальной температуре.