- •Классификация продуктов биотехнологии.
- •Получение накопительной культуры.
- •Выделение чистой культуры.
- •Рассев шпателем (метод Коха):
- •Рассев петлей (метод истощающего штриха):
- •Определение чистоты выделенной культуры.
- •Основными объектами биотехнологии являются м/о т. К.:
- •Виды микроорганизмов используемые в биотехнологии.
- •Подходы к генетическому изменению объектов биотехнологии, in vivo.
- •Отбор случайных мутаций.
- •Отбор среди мутантов с определенным фенотипом.
- •Создание биологических штаммов in vitro.
- •1972 Г. – начаты исследования по ги в лаборатории Берга. Получена первая рекомбинантная днк, которая представляла собой фрагмент вируса sv 40, фрагмент e. Coli, фрагмент оперона.
- •Инструментами ги являются:
- •Методы выделения генов.
- •Выделение генов из природных (нативных) днк.
- •Синтез гена на м-рнк, как матрице (получение комплемента (к- днк).
- •Классификация векторных молекул для бактериальных клеток в зависимости от цели клонирования.
- •Клонирование в клетках Bacillus subtilis.
- •Искусственная бактериальная хромосома.
- •В молекуле на основе фаговых днк м. Б. Получены на основании 1-нитевых фагов. Это м 13, fd, f1 и др.
- •Векторы для клонирования в клетках животных.
- •Векторы для клонирования высших растений.
- •Способы введения рекомбинантных днк в клетку.
- •Культивирование биотехнологических объектов.
- •Преимущества непрерывного культивирования:
- •Твердофазная ферментация (тфф).
- •Получение белка одноклеточных организмов (боо).
- •Кормовые дрожжи.
- •В настоящее время пробиотики как биотехнологический продукт делятся на несколько типов:
- •Основы инженерной энзимологии.
- •Иммобилизированные ферменты:
- •Клеточная инженерия
- •Культуры каллусных клеток
- •Получение протопластов
- •Культивирование протопластов
- •Слияние протопластов
- •Гибридизация соматических клеток
- •Культивирование животных клеток
- •Культуральные системы животных клеток
- •50 Пересевов, которые затем трансформируются в постоянные (переви-
- •Первичные культуры
- •0,25 % Трипсин, 200−2000 ед./мл коллагеназа) дезагрегации. В случае
- •Постоянные культуры
- •1,5−3 Раза), по снижению зависимости от сыворотки и возможности под-
- •Типы культуральных систем
- •Монослойные культуры
- •Суспензионные культуры
- •0,01 % Эдта с последующим длительным периодом адаптации, сопро-57
- •Монослойное культивирование на микроносителях
- •Питательные среды
- •Клеточный цикл и цикл роста
- •24 Часа. При отсутствии каких-либо ограничений клетки равномерно
- •Синхронизация клеток
Преимущества непрерывного культивирования:
Можно использовать ферментеры меньшего объема, они м. б. специализированы для осуществления некоторых стадий культивирования. Весь процесс культивирования происходит в 1 ферментере – монофазное. Процесс идет в 2 ферментерах: в 1-м наращивается культура, а во 2-м проводится выделение целевого продукта – 2-х фазное культивирование.
Меньшие размеры аппаратов, установок для выделения целевого продукта, т. к. процесс идет постоянно, небольшими порциями.
Меньшее время разгрузки и подготовки к следующим циклам работы.
И рост клеток, и образование целевого продукта является более стабильным и сбалансированным.
Для обоих типов рассчитывается экономический коэффициент у = прирост биомассы к количеству потраченного субстрата. Его рассчитывают по отношению к наиболее дорогому компоненту среды.
Физиологический коэффициент, который связан с количеством образуемого АТФ в расчете на потребляемый субстрат.
Твердофазная ферментация (тфф).
Это ферментация, которая осуществляется на поверхности в той или иной степени измельченного или увлажненного субстрата. Он явл. более естественным.
Использование ТФФ пришло из стран Юго-Восточной Азии, где такая технология используется для получения ферментативных продуктов (соевый соус, саке, соусы). Для их получения используются выращиваемые на различных продуктах (рис, соя) разные гр. м/о (бактерии, грибы). В физическом смысле это м. б. материал от древесинных опилок до крахмала и измельченного картофеля. Такой материал может иметь различную форму, размеры частиц, поверхность. Он может частично или полностью использоваться о в качестве пищевого субстрата.
Этот материал может набухать в воде, принимать гелеобразную форму или частично в ней растворяться. ,
В процессе ТФФ преобладает аэробная флора.
Ферментация в компостной куче – при начальном ферментативном процессе развитие получают аэробные формы м/о, по мере разложения и использования органических в-в они сменяются анаэробными и термофильными м/о. для удаления избытка тепла используется перемешивание. В результате снова преимущество в развитии получает аэробная флора. Такого типа ферментация имеет определенное практическое значение – кондиционирование кормов для с/х животных – силосование. Используются различные закваски, основная часть которых представлена молочнокислыми бактериями. За их счет можно повысить содержание белка, витаминов, сделать более доступными для животных растительные полимеры, за счет изменения рН ограничить или подавить развитие гнилостной микрофлоры.
ТФФ в тонком или поверхностном слое. В этом случае в качестве субстрата могут выступать кукурузные початки, картофельная мезга. Они помещаются на специальные поддоны слоем 3-5 см и вносится мицелий гриба. После его выращивания из субстрата можно выделять некоторые ферменты: амилаза, а биомассу использовать как корм.
ТФФ перемешивающийся слой – твердый субстрат с выращиваемой культурой помещают в ферментер, который снабжен внутри лопастями и постоянно вращается. Это способствует увеличению площади, создает дополнительные условия для аэрации.
ТФФ преимущества:
Некоторые микробиологические процессы могут протекать только в ТФФ (образование микотоксинов);
Часто ТФФ менее материально-, трудо- и энергозатратно, в сравнении с др.;
Из-за низкого содержания влаги более экономично используется пространство, незначительно загрязняется окружающая среда и сточные воды;
ТФФ недостатки:
Низкая скорость протекания процессов;
Сложность контроля за некоторыми параметрами: рН, концентрация метаболитов и др.;
Многие м/о не могут осуществлять процессы ТФФ.
Культивирование в анаэробных условиях.
Следует учитывать какие анаэробные процессы следует проводить с полным удалением воздушной смеси или те, начальные этапы которых могут проходить при доступе О2 (брожение не требует удаления О2).
В строго анаэробных процессах газовая смесь на средой заменяется инертными газами или смесью с СО2. аппарат метантенк используется для утилизации твердых и полутвердых отходов сельского хозяйства, для доочистки сточных вод. Используемый аппарат явл. одним из направлений развития экологической биотехнологии. Чаще его используют в странах Юго-Восточной Азии, Евросоюза, Скандинавии. К нач. 80-х гг. в Китае было ок. 7 млн. таких установок. Они могли обслуживать несколько соседних хозяйств. В настоящее время до 70 млн.. В Евросоюзе крупных ок. 600.
В метантенке идет разложение органического в-ва до СО2 и СН4. Эта смесь называется биогаз 20%/80% соответственно. Биогаз м. б. использован как метан природного происхождения. Растительные отходы после обработки метаном могут использоваться как удобрения в с/х, т. к. в них достаточно высокое количество биогенных элементов, достаточное для растительных форм. Также в процессе обработки биогаза возможно получение больших количеств витамина В12.
На 1-й стадии сбраживаемые отходы поступают в приемник, где производится их механическая очистка, затем отходы поступают в 1-й ферментер, где идет стадия - кислотогенная. Эта стадия идет с участием органотропных бактерий из 50 родов м/о – Pseudomonas, Bacillus, Clostridium, сарцины и др.). это факультативные анаэробы (гидролитические бактерии). Продуктами разложения явл. жирные кислоты, СО2, Н2. Эти в-ва явл. субстратами для развития др. бактерий – метаногенных бактерий. Эта метановая стадия. Процесс образования метана идет в др. ферментере. Образующийся биогаз поступает в газольдер, где хранится или используется. В настоящее время получение биогаза идет в мезофильных условиях (средние t), при перемешивании, но отсутствии О2. Получение биогаза экономическую проблему решает в незначительной степени, а экологическую – в значительной.
