
- •Классификация продуктов биотехнологии.
- •Получение накопительной культуры.
- •Выделение чистой культуры.
- •Рассев шпателем (метод Коха):
- •Рассев петлей (метод истощающего штриха):
- •Определение чистоты выделенной культуры.
- •Основными объектами биотехнологии являются м/о т. К.:
- •Виды микроорганизмов используемые в биотехнологии.
- •Подходы к генетическому изменению объектов биотехнологии, in vivo.
- •Отбор случайных мутаций.
- •Отбор среди мутантов с определенным фенотипом.
- •Создание биологических штаммов in vitro.
- •1972 Г. – начаты исследования по ги в лаборатории Берга. Получена первая рекомбинантная днк, которая представляла собой фрагмент вируса sv 40, фрагмент e. Coli, фрагмент оперона.
- •Инструментами ги являются:
- •Методы выделения генов.
- •Выделение генов из природных (нативных) днк.
- •Синтез гена на м-рнк, как матрице (получение комплемента (к- днк).
- •Классификация векторных молекул для бактериальных клеток в зависимости от цели клонирования.
- •Клонирование в клетках Bacillus subtilis.
- •Искусственная бактериальная хромосома.
- •В молекуле на основе фаговых днк м. Б. Получены на основании 1-нитевых фагов. Это м 13, fd, f1 и др.
- •Векторы для клонирования в клетках животных.
- •Векторы для клонирования высших растений.
- •Способы введения рекомбинантных днк в клетку.
- •Культивирование биотехнологических объектов.
- •Преимущества непрерывного культивирования:
- •Твердофазная ферментация (тфф).
- •Получение белка одноклеточных организмов (боо).
- •Кормовые дрожжи.
- •В настоящее время пробиотики как биотехнологический продукт делятся на несколько типов:
- •Основы инженерной энзимологии.
- •Иммобилизированные ферменты:
- •Клеточная инженерия
- •Культуры каллусных клеток
- •Получение протопластов
- •Культивирование протопластов
- •Слияние протопластов
- •Гибридизация соматических клеток
- •Культивирование животных клеток
- •Культуральные системы животных клеток
- •50 Пересевов, которые затем трансформируются в постоянные (переви-
- •Первичные культуры
- •0,25 % Трипсин, 200−2000 ед./мл коллагеназа) дезагрегации. В случае
- •Постоянные культуры
- •1,5−3 Раза), по снижению зависимости от сыворотки и возможности под-
- •Типы культуральных систем
- •Монослойные культуры
- •Суспензионные культуры
- •0,01 % Эдта с последующим длительным периодом адаптации, сопро-57
- •Монослойное культивирование на микроносителях
- •Питательные среды
- •Клеточный цикл и цикл роста
- •24 Часа. При отсутствии каких-либо ограничений клетки равномерно
- •Синхронизация клеток
История биотехнологии.
Раньше вместо термина Биотехнология использовали термины прикладная промышленная микробиология, прикладная генетика и др.
В 1517 г. впервые появился термин Биотехнология. Он был предложен К. Эреки. В его понимании это было выращивание свиней в крупных масштабах на отходах переработки свеклы.
В 20-х гг. ХХ в. термин Биотехнология был узаконен и появился журнал «Биотехнология и биоинженерия».
По объему биотехнология суммирует знания многих дисциплин, но возникла на основе микробиологии бродильных производств. Это изменило многие технологические условия: появилась возможность биотрансформации веществ, развития технологий утилизации промышленных отходов, получения лекарственных средств.
В настоящее время биотехнология реализуется на различных уровнях организации биологических систем:
Надорганизменный (экология);
Исследования на клеточном уровне (микология, микробиология);
Исследования субклеточных структур (молекулярная биотехнология, исследования по генной инженерии);
Т. к. биотехнология технологическая наука, она использует машиностроение, электронику, автоматизацию.
На 3-й Европейской Ассоциации Биотехнологов в 1984 г. было предложено разделить историю развития биотехнологии на 5 периодов.
До Пастеровский – сер. XIX в. – получение ферментированных продуктов (спирт, уксус); использование молочнокислого брожения, в хлебопечении, пивоварении и др.
После Пастеровский – 40-е гг. ХХ в. – продолжилось получение органических кислот, глицерина, спиртов брожением. Получили развитие анаэробные способы очистки сточных вод. Рост дрожжей для корма скоту.
Т. о. был использован инженерный или конструкторский подход к изменению физиологии биологических объектов.
Дрожжи использовались как кормовая добавка. Род Sacharomices выращивали на растительных отходах и использовали как добавку в субпродукты. Так, ок. 60 % импорта продуктов заменили кормовыми дрожжами. Затем стали использовать дрожжи рода Candida.
Антибиотиковый – до 60-х гг. ХХ в. – разработаны технологии глубинного культивирования биологических объектов (в жидкой среде). Разработаны методы культивирования растительных клеток, вирусных вакцин, микробиологической трансформации в-в. ферменты многих м/о высокоспецифичные и они способны вводить различные заместители в химически сложные молекулы достаточно точно. Т. о. была разработана технология стероидного получения препаратов. До открытия возможности микробиологической трансформации такие гормоны как преднизолон и гидрокортизон получали химическим синтезом в 37 стадий. КПД составлял 0,02% от исходного сырья. При новой технологии стало 11 стадий, цена на препараты упала в 200 раз. Промышленное получение антибиотиков.
Управляемый биосинтез – стали получать аминокислоты посредством мутантных м/о. Широко используется иммобилизация (закрепление на носителях) клеток и ферментов для проведения различных реакций. В это время начаты исследования о возможности получения биогаза – смесь СО2 и СН4, получаемый при утилизации промышленных отходов. получают аминокислоты – глутамат Na (глутаминовая кислота) – 150 тыс. т. в год; лизин – 15 тыс. т. в год – пищевые добавки.
Новой или новейшей биотехнологии – с середины 70-х гг. – возможности получения моноклональных антител, трансплантация эмбрионов, трансгены.
Технологии могут быть:
Физико-механические – субстрат не меняет химический состав, а только агрегатное состояние.
Химические – изменяется химическое состояние исходного сырья (полимеры из газообразных процессов).
Биотехнологии.
Биотехнология в переводе с греческого: bios – жизнь;
logos – наука;
tehnos – мастерство. И представляет собой науку об использовании живых организмов и биологических процессов в производстве и охране окружающей среды.
Задачи: изучение, разработка, проектирование, создание, осуществление процессов в результате которых получаются продукты качественно превосходящие исходное сырье.
Требования к биотехнологии:
Наличие спроса на продукт;
Значительный экономический эффект от использования биотехнологических производств;
Биотехнологические производства должны быть основаны на знании физиологии и генетики биологического объекта в большей степени, чем на технологии работы с ними.
Классификация продуктов биотехнологии.
В зависимости от количества.
Продукты тонкого биологического синтеза – от 100 кг до 1000 т в год – вакцины, витамины, антибиотики для медицины. основная стоимость связана с очисткой и анализом.
Продукты маломасштабного биосинтеза – до 20 тыс. тонн в год – аминокислоты для пищевой промышленности, напитки, продукты получаемые ферментацией, антибиотики для с/х.
Крупномасштабный биологический синтез – сточные воды после биологической очистки, биополимеры для отдельных отраслей промышленности – полисахариды для извлечения остатков нефти, выщелачивания Ме из руд. Основное условие - дешевизна. Более 20 тыс. тонн в год.
По товарным формам.
Биопрепараты – основной компонент – жизнеспособные клетки м/о или др. организмы закваски, бактериальные удобрения.
Инактивированная биомасса м/о – белок одноклеточных организмов.
Биопрепараты на основе очищенных метаболитов – ферменты, витамины, гормоны, антибиотики.
Образование биотехнологических продуктов в зависимости от стадии роста биологических объектов.
Первичные метаболиты.
Вторичные метаболиты.
Биотехнология наиболее развита в Японии (аминокислоты), США (1-я крупная биотехнологическая компания). В XXI в. ок. 20% продуктов станут продукцией биотехнологии. В РБ биотехнология отнесена к новым высоким технологиям. Это связано с ограниченностью ресурсов, никой энерго- и материалоемкостью биотехнологических производств. Возможностью использования местного сырья, экологичность биотехнологических проектов на фоне радиационного и химического загрязнения.
Основные потребители биотехнологической продукции:
Сельское хозяйство (ветеринария);
Пищевая промышленность;
Химическая промышленность.
Для развития ветеринарии требуется ок. 500 препаратов, ок. 100 получат методами биотехнологии.
Схема биотехнологического производства
Исходное
сырье культивирование
конечный продукт
постеферментативная стадия
↑ (ферментация) (целевой) (конечному продукту придается товарный вид,
(предферментация)
↓
утилизируются
отходы производства)
(подогрев, размельчение аппаратура биологические объекты сырья и др.).
Характеристика биологических объектов биотехнологии
Клетки м/о – прокариоты и одноклеточные эукариоты (дрожжи, простейшие, водоросли);
Высшие растения;
Животные;
Вирусы;
Трансгены;
Многокомпонентные системы, представленные клетками или определенными компонентами клеток.
Источники получения биологических объектов:
Коллекции культур;
Образцы природного материала. В этом случае необходимо получить чистую культуру м/о.
Этапы очистки микроорганизмов
в естественных условиях обитания чистые культуры м/о встречаются довольно редко. Поэтому для работы необходимо искусственное выделение чистых культур. Для этого обычно требуется не более 2-3 суток. Но для некоторых м/о микобактерии туберкулеза) этот процесс может затянуться на 4-6 недель.
Чистые культуры м/о – популяция бактерий одного вида, представляющая потомство одной клетки.
Выделение чистой культуры делят на 3 этапа.