2 Оздоровление посадочного материала.

Оздоровление посадочного материала начинается с момента

стерилизации экспланта в асептических условиях бокса, с обработки

ткани антибиотиками. Однако таким образом удается освободиться

главным образом от бактерий, грибных инфекций, нематод. Вирусы,

вироиды, микоплазмы остаются в тканях инфицированных растений.

Именно из-за вирусных болезней погибает от 10 до 50% урожая

сельскохозяйственных культур, размножающихся вегетативно.

Некоторые бобовые растения (соя) могут передавать вирусы даже при

семенном размножении.

В 1949 г. было выяснено, что клетки меристематических тканей

растений обычно не содержат вирусов. В 1952 г. Дж. Морель и Г.

Мартин предложили, используя культивирование меристем, получать

здоровые, избавленные от вирусной инфекции растения. Они об-

наружили, что при выращивании верхушки побега, состоящей из

конуса нарастания и 2— листовых зачатков, на ней образуются

сферические образования —протокормы. Протокормы можно делить,

и каждую часть культивировать до образования корней и листовых

примордиев, получая в большом количестве генетически однородные

безвирусные растения. В настоящий момент культивирование

меристем побега —наиболее эффективный способ оздоровления

растительного материала от вирусов, вироидов и микоплазм. Однако

при этом способе требуется соблюдать определенные правила. Как

уже говорилось, чем меньше размер меристематического экспланта,

тем труднее вызвать в нем морфогенез. Чем больше размер экспланта,

тем легче идет морфогенез, в результате которого получается целое

растение, но тем больше вероятность присутствия вирусов в

экспланте. У многих видов и сортов-растений зона, свободная от

286

вирусных частиц, различна. Так, при клонировании апикальной

меристемы картофеля размером 0,2 мм (конус нарастания с одним

листовым зачатком) 70% полученных растений были свободны от Y-

вируса картофеля, но только 10% —от Х-вируса. В некоторых

случаях не удается найти оптимальное соотношение между размером

меристематического экспланта и морфогенезом в нем, и при этом

избавиться от вирусной инфекции. Приходится дополнять метод

культуры меристем термо- или(и) химиотерапией. Так,

предварительная термотерапия исходных растений позволяет

получать свободные от вирусов растения-регенеранты из

меристемных эксплантов размером от 0,3 мм до 0,8 мм. Вместе с тем

этот прием может вызвать отставание растений в росте, деформацию

органов, увеличение латентных (скрытых) инфекций.

Хорошие результаты дает совместное применение метода куль-

туры тканей и химиотерапии. При внесении в питательную среду

препарата «Вирозол» (1-рибофуранозил-1,2,4-триазолкарбоксамид)

количество безвирусных растений увеличивается до 80—00 %.

В настоящее время для диагностики вирусных растений ис-

пользуют иммуноферментную технику, моноклональные антитела,

метод молекулярной гибридизации меченых фрагментов РНК- и

ДНК-вироидов и вирусов с вирусами тестируемого объекта. Эти

методы очень чувствительны, но трудоемки и дорогостоящи.

После оздоровления с помощью вышеперечисленных технологий

нормальные растения-регенеранты размножают обычными методами

клонального микроразмножения. Для некоторых растений, например

цитрусовых, получить морфогенез из меристем малого размера не

удается, поэтому требуется разработка оригинальных методов.

Лимоны и апельсины оздоровляют и размножают, используя

прививки меристем размером 0,14—0,18 мм на пробирочные подвои,

полученные из семян. Достоинство такого подхода состоит и в том,

что развивающиеся из меристем побеги не имеют ювенильных

признаков, при этом цветение и плодоношение ускоряются.