Министерство образования республики беларусь

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

Кафедра клеточной биологии и биоинженерии растений

Дневное отделение

Митус

Алина Александровна

Отчет по преддипломной практике

Научный руководитель:

к.б.н., доцент

Дитченко Т.И.

Руководитель практики

д.б.н. Демидчик В.В.

Минск, 2014

Содержание

Список сокращений и обозначений

Тема, время и место прохождения, цель и задачи практики

Глава 1. Материалы и методы

1.1. Характеристика объекта исследования

1.2. Питательные среды и физические условия культивирования

1.3. Иммобилизация клеток суспензионной культуры в Са-альгинатном геле 1.4. Определения активности фенилаланинаммиак-лиазы 1.5. Количественное определение содержания фенольных соединений 1.6. Статистическая обработка данных

Глава 2. Результаты и их обсуждение

Заключение

Список литературы

Список сокращений и обозначений

2,4-Д – 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота;

БАВ – биологически активные вещества;

ИУК – β-индолилуксусная кислота;

Среда МС – питательная среда по прописи Мурасиге и Скуга;

ФАЛ – фенилаланинаммиак-лиаза;

ФС – фенольные соединения;

I – индекс роста;

V – удельная скорость роста;

T – время удвоения биомассы.

Тема практики: Влияние типа питательной среды на активность L-фенилаланинаммиак-лиазы и содержание фенольных соединений в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры эхинацеи пурпурной

Время прохождения практики: 10.03.2014-12.04.2014

Место прохождения практики: кафедра клеточной биологии и биоинженерии растений.

Цель практики: изучение влияния типа питательной среды на активность ФАЛ и содержание фенольных соединений в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры Echinacea purpurea в течение ростового цикла

Задачи практики:

1. Провести определение активности ФАЛ в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры Echinacea purpurea, инкубируемых на стандартной питательной среде МС.

2. Провести определение активности ФАЛ в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры Echinacea purpurea, инкубируемых на модифицированной (продукционной) питательной среде МС.

3. Оценить влияние типа питательной среды на активность ФАЛ в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры Echinacea purpurea на разных стадиях ростового цикла.

4. Изучить влияние типа питательной среды на содержание фенольных соединений в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры Echinacea purpurea в течение ростового цикла

Введение

Суспензионные культуры имеют целый ряд преимуществ по сравнению с каллусными тканями, выращиваемыми поверхностным способом на агаризованной питательной среде:

• более широкие возможности для изучения влияния экзогенных факторов на метаболизм и рост клеточных популяций, поскольку клетки в одинаковой степени становятся доступными для внешнего воздействия;

• надежное длительное поддержание линии вследствие простоты процессов субкультивирования;

• удобство для проведения биохимических и молекулярно-биологический исследований изучение индукции ферментов и связи их с событиями клеточного цикла, изучение экспрессии и репрессии определенных генов, изолирование и характеристика мутантов, биотрансформация чужеродных веществ), а также быстрой регенерации растений;

• возможность неограниченного набора биомассы для получения БАВ (Бутенко и др., 1987).

Именно суспензионные культуры используются в качестве источников биологически активных веществ (БАВ) в промышленных масштабах. Тем не менее, ряд факторов (слабая механическая устойчивость, зачастую низкий выход целевого продукта, способность к агрегации, генетическая нестабильность и т.д.) затрудняют крупномасштабное использование растительных клеток в биотехнологических производствах. С помощью методов иммобилизации могут быть решены многие из указанных проблем. В связи с этим изучение влияния условий культивирования на метаболизм клеток суспензионных культур, а также иммобилизованных растительных клеток представляется важной задачей.

Целью настоящей работы явилось изучение влияния типа питательной среды и содержание фенольных соединений на активность ФАЛ в свободных и иммобилизованных клетках суспензионной культуры Echinacea purpurea в течение ростового цикла.