- •Міністерство освіти і науки україни
- •Конспект лекцій
- •Застосування в фармації біотехнологічних методів
- •Етапи розвитку методу культури клітин, тканин і органів рослин
- •Основні терміни і поняття дисципліни
- •Загальна характеристика калусних клітин
- •Використання методу культури ізольованих клітин і тканин в синтезі біологічно активних речовин культура клітин як продуцент вторинних сполук
- •Типи культур клітин і тканин калусогенезу
- •Ізольовані протопласти, їх отримання і культивування
- •Умови культивування ізольованих тканин і клітин рослин та їх вплив на синтез бар
- •Стерилізація початкового рослинного матеріалу
- •Методи підвищення продуктивності культур тканин продуцентів бар
- •Культивування продуктивних клітинних штамів
- •Промислове культивування біологічно активних речовин основні процеси культивування клітин як біопродуцентів
- •Синтез вторинних метаболітов
- •Біореактори
- •Твердофазний спосіб культивування
- •Глибинне суспензійне культивування
- •Іммобілізовані системи клітин
- •Біосинтез бар
- •Попередня обробка біомаси
- •Виділення та очищення бар
- •Способи очищення біологічно активних речовин (бар) рослинного, тваринного походження, отриманих на основі біосинтезу.
- •Методи осадження бар із розчинів.
- •Розділення бар за допомогою мембран.
- •Діаліз і електродіаліз.
- •Ультрафільтрація.
- •Зворотній осмос.
- •Сорбція.
- •Сорбціонні процеси.
- •Адсорбційно-хроматографічні методи.
- •Іонообмінна хроматографія.
- •Іонообмінні матеріали.
- •Основні величини, що характеризують іонообмінний процес. Обмін органічних речовин.
- •Гель-фільтрація.
- •Гідрофобна хроматографія.
- •Сорбенти для гідрофобної хроматографії.
- •Деякі типи кремнеземних сорбентів для офх біологічно активних речовин
- •Афінна хроматографія.
- •Сорбенти для афінної хроматографії.
- •Електрофорез.
- •Кристалізація.
- •Екстракція в системах рідина-рідина.
- •Одноступінчата екстракція.
- •1, 2, 3, 4, 5, 6 – Відцентровані екстрактори
- •Одержання готової продукції (п'ята стадія)
- •Виробництво рекомбінантних фармацевтичних білків трансгенними рослинами -«молекулярне фермерство»
Основні терміни і поняття дисципліни
2,4-Д - 2,4-дихлорфеноксиоцтова кислота
6-БАП - 6-бензиламінопурин
In vitro - вирощування живого матеріалу «в склі» (пробірці, колбі, біореакторі), на штучних поживних середовищах в асептичних умовах.
In vivo – вирощування живого матеріалу в природних умовах.
Адвентивні бруньки – бруньки, які утворюються не в пазусі листка, а в інших місцях тіла рослини. Можуть виникати з довільної групи живих клітин, які набувають здатності ділитися.
Андрогенез - отримання гаплоїдних рослин на штучному живильному середовищі із ізольованих пиляків і пилку.
Апекс - верхівкова частина стебла або кореня.
Апікальне домінування - явище пригнічення росту бічних бруньок пагона у присутності термінальної бруньки.
Ауксини - фітогормони (ІОК, НОК, 2,4-Д), які активізують ріст стебел і коріння, стимулюють утворення коріння у проростків.
Біотехнологія – напрямок сучасної науки і техніки, основним завданням якого є використання живих організмів і біологічних процесів у виробництві. Термін “біотехнологія” походить від грецьких слів “bios” – життя, “techne” – майструвати, “logos” – вчення. Отже, це науковий напрямок, який поєднує можливості біології і техніки, коли біологія стає основою численних технологій.
Біотехнологія рослин – це сукупність технічних прийомів для модифікації, покращення, створення та розмноження рослинних організмів, одержання з них корисних речовин.
Вектор – молекула ДНК, що має здатність до автономної реплікації в клітині-хазяїні, в яку можна ввести додатковий фрагмент чужорідної ДНК і надалі забезпечити його реплікацію (як вектор можна використовувати плазміду).
Гаплоїд - ядро, клітини, організм, що характеризується набором хромосом, що представляє половину повного набору, характерного виду
Генетична трансформація – перенесення чужорідних генів та інших носіїв спадковості у клітини рослин, тварин і мікроорганізмів, отримання трансгенних організмів з новими або покращеними властивостями і ознаками.
Дедиференціація– перехід спеціалізованих клітин до проліферації і неорганізованого каллусному зростання (втрата клітинами спеціалізації).
Гібереліни - фітогормони (ГК та ін.), які активізують ріст стебел, викликають проростання насіння.
ГК - гіберелінова кислота
Дедиференціація — перехід спеціалізованих, клітин, що неділяться до проліферації.
Диплоїд - ядро, клітини, організм, що характеризується подвійним набором гомологічних хромосом, представленим числом, характерним для цього виду (символ 2n).
Диференціація — комплекс процесів, що приводять до відмінностей між дочірніми клітинами , а також між материнськими і дочірніми клітинами.
Диференціювання - стан спеціалізації клітин, що відрізняє їх від інших.
Домінант - ген, що проявляється як ознака за умови, коли гомологічні набори мають різні гени.
Експлант - фрагмент тканини або органу, що інкубується самостійно або використовується для отримання первинного калусу.
Електропорація – метод перенесення генів у ізольовані протопласти за допомогою електричного розряду, який викликає утворення пор в клітинній мембрані.
Ембріоідогенез - процес утворення зародкоподібних структур (ембріоїдів) нестатевим шляхом в культурі тканин і клітин in vitro.
Епігенетичні варіації - фенотипічне вираження диференциальної активності генів. Від мутацій і сомаклональных варіацій відрізняються тим, що не зберігаються в циклі клітина-рослина-клітина.
Еуплоїд - ядро, клітини, організм з числом хромосом, кратним Х.
Злиття ізольованих протопластів - формування однієї клітини з двох і більше шляхом об'єднанням їх поверхневих мембран.
Інокулюм - частина клітинної суспензії, що використовується для пересадки на свіже середовище.
ІОК - в-індолілоцтова кислота
Ізольований протопласт – це рослинна клітина, позбавлена клітинної стінки ферментативним або механічним способом.
Калус - група дедиференційованих клітин, що виникли in vivo або in vitro шляхом неорганізованої проліферації.
Каріотип - набір хромосом, характерних для цього виду.
Клітинна селекція in vitro - метод виділення клітин мутантів і сома-клональных варіацій за допомогою селективних умов.
Клон – сукупність генетично однорідних клітин (особин), що виникли в результаті ділення однієї клітини.
Клональне мікророзмноження або мікроклональне розмноження - одержання in vitro нестатевим шляхом рослин, генетично ідентичних початковим.
Кріобіологія (від грецького kryos – холод, мороз, лід) – розділ біології, який вивчає дію на живі системи низьких та наднизьких температур (від 00С до абсолютного нуля).
Культивування ізольованих протопластів - вирощування клітин, позбавлених клітинних стінок, в рідкому або на агаризованому середовищі, що містить як додатковий компонент осмотично активну речовину (стабілізатор) в оптимальній для даного виду концентрації. При регенерації стінок в ізольованих протопластів культура перетворюється на культуру клітин.
Культура "звиклих" тканин - вирощування тканин, що виникли шляхом редиференціації або мутації клітин нормальних калусных тканин, здатних рости на поживних середовищах без гормонів.
Культура експлантів - інкубація в стерильних умовах на поживних середовищах, які викликають, або не викликають проліферацію сегментів, ізольованих із різних органів рослин.
Культура зиготичних зародків in vitro - асептичне вирощування на штучному поживному середовищі незрілих або зрілих ізольованих зародків.
Культура ізольованих протопластів - вирощування клітин, позбавлених стінок, в рідкому або на агаризованому середовищі, що містить як додатковий компонент осмотично активну речовину (стабілізатор) в оптимальній для цього виду концентрації. При регенерації стінок ізольовані протопласти перетворюються на культуру клітин.
Культура калусів in vitro - вирощування в тривалій пересадковій культурі калусів, що виникли шляхом дедиференціації і проліферації клітин, тканин, органів рослин.
Культура калусних тканин - вирощування в тривалій пересадочній культурі тканин, що виникли шляхом проліферації клітин ізольованих сегментів різних органів або цілих органів (пиляки, сім'ябруньки і т. д.) рослин.
Культура клітин (суспензійна культура) - вирощування окремих клітин або невеликих груп у завислому стані в рідкому середовищі при використанні апаратури, яка забезпечує аерацію і перемішування.
Культура коріння in vitro - асептичне вирощування на штучному живильному середовищі в пересадковому режимі ізольованого коріння.
Культура меристем in vitro - асептичне вирощування на штучному поживному середовищі ізольованого апексу або пазушної бруньки пагона конуса наростання.
Культура окремих клітин - вирощування одиночних клітин при низькій щільності висіву: 1) на дуже багатих поживних середовищах, 2) за допомогою культури «няньки» або 3) живлячого шару.
Культура органів in vitro - асептичне вирощування на штучному поживному середовищі в пересадковому режимі ізольованого коріння, стеблових апексів, незрілих частин
Культура пухлинних тканин - вирощування в тривалій культурі сегментів, ізольованих із рослинних пухлин різного походження і звільнених від патогенів, які індукували розвиток пухлини.
Лінія - культура, що виникла із штаму шляхом селекції або клонування і має маркерні ознаки.
Меристема - твірна тканина з дрібними клітинами, що активно діляться.
Меристемоїди – це морфогенетично компетентні клітини, які відповідають на індуктори диференціації і склад середовищ формуванням пагонів, коренів, зародка.
Мікроклональне розмноження - це безстатеве вегетативне розмноження в культурі in vitro, при якому отримують рослини генетично ідентичні вихідній батьківській формі, що сприяє збереженню генетично однорідного посадкового матеріалу.
Мітохондріон – сукупність генетичного матеріалу мітохондрій клітини.
Моноплоїд - ядро, клітина, організм, що характеризуються основним числом хромосом в поліплоїдній серії (символ Х).
Морфогенез in vitro - процес формоутворення, росту і розвитку клітин (цитогенез), тканин (гістогенез) і органів (органогенез) в культурі клітин і тканин in vitro.
Мутація - зміни в генетичному матеріалі клітин шляхом перебудови ДНК ядер і органел, змін в структурі хромосом або рівні плодоїдності організму.
НОК - б-нафтилоцтова кислота
Омніпотентність ядер - збереження ядрами соматичних клітин рослин усіх потенцій ядра зиготи, тобто збереження усієї генетичної інформації.
Органогенез – процес виникнення в калусній тканині зародків органів (коренів і пагонів).
Парасексуальна гібридизація – див. соматична гібридизація.
Парасексуальний гібрид – див. соматичний гібрид.
Плазміда – невелика кільцева молекула ДНК, здатна до стабільного, не зв’язаного з хромосомами існування і автономної реплікації (біосинтез дочірніх ДНК). Плазміди можуть вбудовуватися у хромосоми. Плазміди локалізовані в цитоплазмі бактеріальних клітин і клітинах деяких дріжджів.
Плазмон – сукупність генетичного матеріалу клітини; включає, зокрема, гени пластид (пластом) і мітохондрій (мітохондріон), тобто всі гени, які знаходяться поза ядром.
Пластом – сукупність генетичного матеріалу пластид клітини.
Поліплоїд - ядро, клітини, організм, що характеризуються помноженим основним числом хромосом (символ 3Х, 4Х і так далі).
Популяція клітин - сукупність культивованих клітин .
Проліферація - новоутворення клітин і тканин шляхом розмноження вже існуючих.
Протокорми – особливі ембріональні структури у орхідей, які здатні до вегетативного розмноження.
Псевдодиплоїд - ядро, клітини, організм, що характеризуються диплоїдним числом хромосом, відрізняються від зигот цього виду по каріотипу.
Регенерант – рослина, яка виникла в результаті морфогенезу в культурі ізольованих тканин, клітин рослин.
Регенерація - відновлення цілісного організму з клітини, тканини, органа.
Редиференціація - перехід спеціалізованих клітин із одного стану диференціації в інший із попереднім поділом або безпосередньо.
Редиференціація - перехід спеціалізованих клітин з одного стану диференціювання в інший з попередніми поділами або безпосередньо.
Рекомбінантна ДНК – ДНК, яка утворюється коли ділянки ДНК одного чи різних організмів об’єднуються за допомогою ферментів.
Рекомбінантний ген – ген, який складається із компонентів різних генів.
Рекомбінація – зміна положення генів у хромосомах.
Рецесив - ген або генетично обумовлена ознака, що проявляється в диплоїдній клітині або організмі за умови, коли обидва набори хромосом несуть ці гени.
Ризогенез - процес заставляння, зростання і розвитку коріння.
Рослина-регенерант – див. регенерант.
Ростовий цикл - ріст популяції клітин в циклі періодичного вирощування, що характеризується сигмоїдальною (S-подібною) кривою. Фази ростового циклу: латентна (лаг-фаза), експоненціальна (балка-фаза, фаза логарифмичного росту), уповільнення росту, стаціонарна, деградації.
Сомаклональні варіації і варіанти – фенотиповий прояв непостійності геномів ядра та органел рослинних клітин. Від справжніх мутацій відрізняються більшою частотою виникнення та комплексністю змін (зміни в структурі генів, хромосом, геномів).
Соматична (парасексуальна) гібридизація - гібридизація рослин в обхід статевого схрещування, що залучає до генетичної рекомбінації хромосоми і гени ядра і органел поза сексуальним циклом, наприклад, шляхом злиття ізольованих протопластів. Призводить до появи соматичних гібридів-рослин і гібридних клітинних ліній.
Соматичний гібрид – гібридна рослина, отримана шляхом гібридизації соматичних клітин.
Соматичний ембріогенез – це формування зародкоподібних структур (ембріоїдів) із соматичних клітин в умовах in vitro, які при перенесенні на відповідне живильне середовище здатні розвиватися у цілу рослину.
Субкультивування - процес перенесення транспланту або інокулюма в ішу культуральну посудину на свіже поживне середовище.
Субпротопласт - ізольований протопласт, що втратив частину цитоплаз-мы, що зберіг ядро.
Суспензійна культура – див. культура клітинних суспензій.
Тотипотентність — властивість соматичних клітин рослин повністю реалізувати свій потенціал розвитку за певних умов вирощування, тобто реалізувати омніпотентність ядра з утворенням цілого організму.
Трансгенні організми – мікроорганізми. Тварини або рослини з новими ознаками, що кодуються чужорідними генами, які введені у ці організми за допомогою техніки генної або клітинної інженерії.
Трансплантат – частина калюсної або суспензійної культури, яку використовують для перенесення на свіже живильне середовище.
Трансформація – передавання нової генетичної інформації клітині-реципієнту від клітини-донора за допомогою ДНК.
Фітогормони - (гормони рослин) - біологічно активні сполуки, що утворюються в рослинах в малих кількостях, які викликають специфічний ростовий або формоутворюючий ефект.
Хондріон – див. мітохондріон.
Цибрид - рослина, отримана при злитті ізольованого протопласта з цитопластом, протопластом з інактивованим ядром або з энуклеирован-ным протопластом.
Цикл вирощування - період від поміщення інокулюма або калусного трансплантата в свіже середовище до наступного субкультивування.
Цитокініни - фітогормони (кінетин, 6-БАП), які активізують розвиток меристем, стимулюють утворення бруньок.
Цитоплазматичний гібрид – гібрид, який успадкував ядро (ядерні гени) одного з батьків поряд з цитоплазматичними генами обох батьків, або альтернативного батька.
Цитоплазмон – див. плазмон.
Цитопласт - обмежена мембраною ділянка цитоплазми, що виникла при фрагментації ізольованого протопласта.
Час генерації клітини — інтервал часу між двома послідовними клітинними поділами.
Час подвоєння популяції — інтервал часу, за який число клітин в популяціях збільшується вдвічі.
Штам — культура, що виникла після першого субкультивування і складається з багатьох клітинних ліній, що виникли з клітин, присутніх в первинній культурі.
