- •Міністерство освіти і науки україни
- •Конспект лекцій
- •Застосування в фармації біотехнологічних методів
- •Етапи розвитку методу культури клітин, тканин і органів рослин
- •Основні терміни і поняття дисципліни
- •Загальна характеристика калусних клітин
- •Використання методу культури ізольованих клітин і тканин в синтезі біологічно активних речовин культура клітин як продуцент вторинних сполук
- •Типи культур клітин і тканин калусогенезу
- •Ізольовані протопласти, їх отримання і культивування
- •Умови культивування ізольованих тканин і клітин рослин та їх вплив на синтез бар
- •Стерилізація початкового рослинного матеріалу
- •Методи підвищення продуктивності культур тканин продуцентів бар
- •Культивування продуктивних клітинних штамів
- •Промислове культивування біологічно активних речовин основні процеси культивування клітин як біопродуцентів
- •Синтез вторинних метаболітов
- •Біореактори
- •Твердофазний спосіб культивування
- •Глибинне суспензійне культивування
- •Іммобілізовані системи клітин
- •Біосинтез бар
- •Попередня обробка біомаси
- •Виділення та очищення бар
- •Способи очищення біологічно активних речовин (бар) рослинного, тваринного походження, отриманих на основі біосинтезу.
- •Методи осадження бар із розчинів.
- •Розділення бар за допомогою мембран.
- •Діаліз і електродіаліз.
- •Ультрафільтрація.
- •Зворотній осмос.
- •Сорбція.
- •Сорбціонні процеси.
- •Адсорбційно-хроматографічні методи.
- •Іонообмінна хроматографія.
- •Іонообмінні матеріали.
- •Основні величини, що характеризують іонообмінний процес. Обмін органічних речовин.
- •Гель-фільтрація.
- •Гідрофобна хроматографія.
- •Сорбенти для гідрофобної хроматографії.
- •Деякі типи кремнеземних сорбентів для офх біологічно активних речовин
- •Афінна хроматографія.
- •Сорбенти для афінної хроматографії.
- •Електрофорез.
- •Кристалізація.
- •Екстракція в системах рідина-рідина.
- •Одноступінчата екстракція.
- •1, 2, 3, 4, 5, 6 – Відцентровані екстрактори
- •Одержання готової продукції (п'ята стадія)
- •Виробництво рекомбінантних фармацевтичних білків трансгенними рослинами -«молекулярне фермерство»
Виділення та очищення бар
У процесі утворення БАР у біомасі (твердофазний спосіб культивування) і в культуральній рідині (глибинний спосіб культивування) разом із різними невикористаними компонентами середовища виділяються і різноманітні продукти обміну, продукти автолізу клітин. Видалення домішок - перша і дуже важлива стадія хімічного очищення БАР.
Стадія виділення і хімічного очищення включає низку процесів: від обробки нативного розчину до висушування готового очищеного препарату. На цій стадії, залежно від властивостей БАР, їх хімічної будови і місця основного накопичення застосовують різні методи виділення та очищення. Як основні методи застосовують екстракцію в системах рідина-рідина, екстракцію осадження, сорбцію на різних сорбційних матеріалах, мембранні методи очищення, кристалізацію, упарювання, висушування.
Однією з особливостей стадії виділення і очищення є те, що під час виділення БАР доводиться працювати з дуже невисокими концентраціями речовин, що виділяються, (не перевищують 2 %).
Наприкінці стадії очищення вже мають справу з більш високими концентраціями БАР, які досягають 20-30 %.
Мета очищення - витягування БАР із нативної рідини або з клітин продуцента, їх концентрування і звільнення (власне очищення) від супутніх домішок і нарешті одержання добре очищеного препарату, придатного для відповідного застосування.
БАР рослинного походження у деяких випадках під дією жорстких зовнішніх чинників (підвищеної температури, високої кислотності або лужності і т. ін.) втрачають свої властивості; інактивуються. Тому їх виділення та очищення необхідно проводити дуже обережно.
Способи очищення біологічно активних речовин (бар) рослинного, тваринного походження, отриманих на основі біосинтезу.
На стадії очищення видалення культуральні рідини піддають послідовній обробці, метою якої є виділення комплексу діючих речовин в нативному стані або індивідуальних БАР, вільних від супутніх речовин. Прийоми і способи очищення БАР дуже різноманітні і індивідуальні. Необхідність застосування конкретного методу залежить від початкових властивостей видалення або культуральної рідини (в'язкості, концентрації продукту, наявності домішок і небажаних нерозчинних речовин), а також від необхідного ступеня чистоти і кінцевої форми продукту (кристалічна речовина, його концентрований розчин, висушений порошок і т. д.). Неочищений продукт можна виділити, наприклад, шляхом упарювання видалення або культуральної рідини після екстрагування.
Послідовність стадій очищення при отриманні високо-очищенних БАР виглядає таким чином:
Відділення нерозчинних речовин. Для цієї мети звичайно використовують фільтрування, центрифугування, відстоювання, седиментацію і декантацію.
Очищення БАР. На стадії очищення БАР звичайно відбувається відділення домішок, а також подальша концентрація продукту. У такому випадку найчастіше використовують фракційне осадження, екстракцію в системах рідина-рідина, розділення за допомогою мембран, різні сорбційно-хроматографічні методи.
Остаточне очищення БАР. В рамках такої технології звичайно застосовують центрифугування, кристалізацію, сушку розпиленням, ліофілізацією (вимерзанням) або відгонку органічного розчинника.