Правила работы с реагентными тест-полосками

1.   Тщательно размещайте каловую эмульсию

2.   Стеклянной палочкой нанесите эмульсию на уголок реагентного поля. Нельзя замазывать каловой эмульсией всё реагентное сенсорное поле;

3.   Сразу включите секундомер;

4.   Наблюдайте изменение или появление окраски реагентного сенсорного поля около каловой эмульсии;

5.   По истечении времени, указанного в инструкции к данному тесту, сравните окраску реагентной сенсорной зоны со значением на этикетке упаковки.

 

рН

Клинические аспекты

В норме у практически здоровых людей, находящихся на смешанной пище, реакция кала нейтральная или слабощелочная (рН 6,8-7,6) и обусловлена жизнедеятельностью нормальной бактериальной флоры толстой кишки.

Кислая реакция (рН 5,5-6,7) отмечается при нарушении всасывания в тонкой кишке жирных кислот.

Резко-кислая (рН менее 5,5) имеет место при бродильной диспепсии, при которой в результате активации бродильной флоры (нормальной и патологической) образуются углекислый газ и органические кислоты.

Щелочная реакция (рН 8,0-8,5) наблюдается при гниении белков пищи (не переваренных в желудке и тонкой кишке) и воспалительного экссудата в результате активации гнилостной флоры и образования аммиака и других щелочных компонентов в толстой кишке.

Резкощелочная (рН более 8,5) - при гнилостной диспепсии (колите).

Принцип метода

Реагентная сенсорная зона, пропитанная индикатором бромтимоловым синим, меняет окраску в зависимости от концентрации водородных ионов в фекалиях в диапазоне рН от 5 до 9.

Чувствительность

При сравнении с цветом индикаторной шкалы на контейнере значение рН пробы можно определить с точностью до 0,5 единиц рН.

Оценка теста

Цвет реактивной зоны полоски меняется в зависимости от рН исследуемой каловой эмульсии. Цвет реактивной зоны сопоставляется с цветной шкалой сразу же после нанесения пробы на полоску. Цвет отдельных квадратов шкалы соответствует значениям рН 5-6-7-8-9. Если цвет реактивной зоны оказывается между двумя цветными квадратами, то результаты могут быть приведены к целым значениям или к промежуточным значениям с диапазоном 0,5 единиц.

 

                              

  5,0 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 9,0 единиц рН

 

БЕЛОК

Клинические аспекты

В каловых массах здорового человека белка нет. Положительная реакция на белок свидетельствует о наличии воспалительного экссудата, слизи, непереваренного пищевого белка, кровотечения.

Белок в каловых массах обнаруживается при:

-   поражении желудка (гастрит, язва, рак);

-   поражении двенадцатиперстной кишки (дуоденит, рак фатерова соска, язва);

-   поражении тонкой кишки (энтерит, целиакия);

-   поражении толстой кишки (колит бродильный, гнилостный, язвенный, полипоз, рак, дисбактериоз, повышенная секреторная функция толстой кишки);

-   поражении прямой кишки (геморрой, трещина, рак, проктит).

Принцип теста

Тест основан на принципе "белковой ошибки индикатора". Реактивная сенсорная зона содержит кислотный буфер и специальный индикатор (бромфеноловый синий), который в присутствии белков меняет цвет с желтого через зеленый до синего.

Чувствительность и специфичность

Тест высокочувствителен на белок и реагирует на его присутствие в кале при такой низкой концентрации, как 0.10-0,15 мг/мл каловой эмульсии.

Если реакция каловых масс щелочная или резко щелочная (рН 8,0-10,0), во избежании ложно-положительной реакции необходимо подкислить эмульсию кала несколькими каплями 30 % СН_зСООН до рН 7,0-7,5.

Оценка теста

Изменение окраски реагентного сенсорного поля наступает сразу после нанесения исследуемого материала и сравнивается с цветом окрашенных зон на контейнере через 60 секунд.

Окраска реагентного поля:

светло – зеленая – реакция на белок слабоположительная;

зеленая – положительная;

темно – зеленая или зелено-синяя – резкоположительная.

                                    

   0,0 0,1 0,3 1,0 3,0 ≥ 10,0 г/л

   0,0         10           30          100        300    ≥ 1000       мг/дл   

 

КРОВЬ

Клинические аспекты

Положительная реакция на кровь (гемоглобин) указывает на кровотечение из любого отдела пищеварительного тракта (десен, варикозных вен пищевода и прямой кишки, пораженных воспалительным процессом или злокачественным новообразованием слизистой желудка и кишечника). Кровь в кале появляется при геморрагическом диатезе, язве, полипозе, геморрое. С помощью диагностических полосок выявляется так называемая "скрытая кровь", которая не определяется при макроскопическом исследовании.

Принцип теста

Реагентная зона пропитана кумилгидропероксидом, лимоннокислым буфером и реактивами, усиливающими цветную реакцию. Кумилгидропероксид обеспечивает положительную реакцию с гемоглобином и миоглобином. Тест основан на псевдопероксидазном эффекте гемоглобина, который катализирует окисление хромогена стабилизированной органической гидроперекисью.

Чувствительность и специфичность

Тест специфичен, дает положительный результат в присутствии гемоглобина и миоглобина, обладает очень высокой чувствительностью к гемоглобину. Реакция выпадает положительно при наличии 4000-5000 эритроцитов в 1 мл каловой эмульсии. Реакция может быть положительной в присутствии пероксидаз бактерий, грибов.

Оценка теста

Необходимо обращать особое внимание на скорость появления окраски. Положительная быстрая, возникающая в первые секунды зеленая или темно-зеленая окраска свидетельствует о присутствии эритроцитов или гемоглобина. Появление положительной окраски через 30 секунд и более наблюдается при наличии большого количества мышечных волокон (непереваренная белковая пища), что обычно подтверждается при микроскопическом исследовании кала. Сочетание положительной реакции на белок с быстрой положительной реакцией на кровь (гемоглобин) подтверждает наличие поражения слизистой желудочно-кишечной системы.

 

 

УРОБИЛИНОГЕН (СТЕРКОБИЛИНОГЕН)

Клинические аспекты

Стеркобилиноген и уробилиноген являются конечными продуктами катаболизма гемоглобина в кишечнике. Аналитически различить уробилиноген и стеркобилиноген весьма трудно, поэтому термин "уробилиноген" объединяет оба эти вещества. Уробилиноген в значительном количестве всасывается в тонкой кишке. Стеркобилиноген образуется из билирубина в толстой кишке в результате жизнедеятельности нормальной бактериальной флоры (рисунок № 5). В каловых массах здорового человека содержится стеркобилиноген и стеркобилин, в сутки с калом их выделяется 40 - 280 мг Стеркобилиноген бесцветен. Стеркобилин окрашивает фекалии в коричневый цвет.

Отсутствуют стеркобилин и стеркобилиноген в кале при обтурации желчевыводящих путей. Кал становится бесцветным.

Уменьшается содержание стеркобилина в кале при паренхиматозных гепатитах, холангитах; в период внутрипеченочного застоя кал также бесцветен. При остром панкреатите с калом выделяется стеркобилиноген (кал светло-серого цвета).

Содержание стеркобилиногена снижено и определяется билирубин при скрытом дисбактериозе, так как патологическая бактериальная флора толстой кишки не способна восстановить весь билирубин до стеркобилиногена.

Повышается содержание стеркобилина в кале при гемолитических анемиях.

Принцип теста

Определение уровня стеркобилиногена основано на принципе реакции Эрлиха азосочетания стабилизированной диазониевой соли с стеркобилиногеном в кислой среде. Бесцветная реакционная зона в присутствии стеркобилиногена становится розовой или красной.

Чувствительность и специфичность

Тест специфичен для уробилиногена и стеркобилиногена. Положительная реакция отмечается при концентрации стеркобилиногена 3-4 мкг/мл каловой эмульсии.

Реагентная сенсорная зона в присутствии большого количества билирубина становится желтой не ранее чем через 60 секунд, а затем зеленеет. Это практически не влияет на определение содержания стеркобилиногена, так как розовое окрашивание при наличии стеркобилиногена появляется в первые 60 секунд.

Оценка теста

В присутствии стеркобилиногена положительная розовая или малиновая окраска появляется сразу или в течение первых 60 секунд. Отсутствие окраски указывает на обтурацию желчевыделительной системы, розовая или бледно-розовая окраска - на неполную обтурацию, ярко-розовая, малиновая окраска - на норму.

отрицательный       положительный

                                 

3,5 17,5 35,0 70,0 140,0 ≥ 210,0       мкмоль/л

 

БИЛИРУБИН

Клинические аспекты

В норме билирубин содержится в меконии и фекалиях ребенка, находящегося на грудном вскармливании, примерно до 3-х месячного возраста. К этому времени в желудочно-кишечном тракте появляется нормальная бактериальная флора, которая частично восстанавливает билирубин до стеркобилиногена. К 7-8 месяцу жизни билирубин полностью окисляется  кишечной флорой до стеркобилиногена-стеркобилина. У здорового ребенка в 9 месяцев и старше в кале присутствует только стеркобилиноген-стеркобилин.

Обнаружение в кале билирубина указывает на патологию: быстрая эвакуация пищи по кишечнику, тяжелый дисбактериоз (отсутствие нормальной бактериальной флоры в толстой кишке, подавление микрофлоры кишечника при длительном приеме антибиотиков и сульфаниламидных препаратов).

Сочетание стеркобилина с билирубином указывает на появление в толстой кишке патологической флоры и вытеснение ею нормальной (скрытый, вялотекущий дисбактериоз) или быструю эвакуацию химуса по кишечнику.

Принцип теста

Метод основан на реакции азосочетания в кислой среде. Реактивная зона содержит р-нитрофенилдиазониевый-р-толуолсульфонат, натриевый бикарбонат и сульфосалициловую кислоту. При контакте с билирубином через 30 секунд появляется пурпурно-красная окраска, интенсивность которой зависит от количества определяемого билирубина.

Специфичность и чувствительность

Тест является специфичным для конъюгированного билирубина. Окраска реактивной сенсорной зоны появляется уже при концентрации билирубина 2,5 – 3,0 мкг/мл каловой эмульсии.

Аскорбиновая кислота в очень высоких концентрациях (примерно 500 мг/л) вызывает слабое розовое окрашивание, которое можно принять за положительный тест. В присутствии стеркобилиногена в очень высокой концентрации (свыше 60 мкг/мл) цвет реагирующей на билирубин реактивной зоны принимает бледно-оранжевый оттенок. В этом случае рекомендуется считывать тест через 90-120 секунд после смачивания реактивной  зоны,  когда  появляется  пурпурно-красная окраска, характерная для билирубина.

Оценка теста

В присутствии билирубина реагентная сенсорная зона или в течение 30-60 секунд окрашивается в сиреневатый, сиреневато-розовый или пурпурно-красный цвета в зависимости от количества конъюгированного билирубина. Результат оценивается соответственно как слабоположительный, положительный или резкоположительный.

отрицательный      положительный

                                           

  0,0 9,0      17,0    ≥ 50,0 мкмоль/л

  neg                             +             ++          +++