2.2. Определение кальция в сыворотке крови

Кальций, поступающий в организм, в основном концентрируется в костной ткани в виде двойных углекислых, фосфорнокислых и фтористых солей. Он постоянно присутствует в плазме и сыворотке крови ( среднее содержание в сыворотке крови 9-11 мг%). В крови преобладающая часть кальция (около 60%) находится в ионном состоянии, а около 40% связано с альбуминами в виде комплексных соединений. Содержание ионов кальция в крови регулируется гормонами паращитовидных желез и териокальцитонином.

Кальций участвует в процессе свертывания крови; является активатором и ингибитором ряда ферментов( активирует лецитиназу, аденозиттрифосфатазу, ингибирует действие енолазы, дипептидазы и других ферментов).

Содержание кальция в сыворотке крови определяют с помощью простого и быстрого метода де-Ваарда.

Принцип метода. Кальций осаждают в виде щавелевокислой соли. Осадок растворяют в серной кислоте, при этом освобождается эквивалентное количество щавелевой кислоты, которое оттитровывают марганцовокислым калием. Реакции, протекающие по следующей схеме:

Количество марганцовокислого калия, израсходованного на титрование, эквивалентно содержанию кальция во взятом для исследования объеме сыворотки. 1 мл 0,01 н раствора KMnO₄ соответствует 0,2 мг кальция.

Реактивы и материалы: сыворотка крови; щавелевокислый аммоний,4%-ный раствор;аммиак,2%-ный раствор; серная кислота, 1н раствор; марганцовокислый калий,0,01 н раствор.

В одну пробирку пипеткой вносят 1 мл сыворотки крови, в другую-1мл дистиллированной воды(контроль). В обе пробирки добавляют по 1 мл 4%-ного раствора щавелевокислого аммония, перемешивают и оставляют на 30 мину, после чего центрифугируют 10-15 минут. Прозрачную жидкость над осадком осторожно отсасывают с помощью стеклянного капилляра, стараясь не взмутить осадка. В обе пробирки приливают по 4 мл 2%-ного раствора аммиака для отмывки от избытка щавелевокислого аммония и снова центрифугируют в течение 8-10 минут. Осадок щавелевокислого кальция не растворим в щелочной среде, но хорошо растворим в растворах минеральных кислот.

Промывку осадка производят два раза. Надосадочную жидкость тщательно отсасывают, в обе пробирки прибавляют по 1 мл 1 н раствора серной кислоты и размешивают стеклянными палочками, не вынимая их из пробирок, до полного растворения осадка. Затем пробирки (вместе с палочками) ставят на горячую водяную баню на 3-4 минуты. Горячие растворы титруют из микробюретки 0,01 н раствором марганцовокислого калия, все время помешивая палочками, до появления слаборозового окрашивания устойчивого в течении 1 минуты.

Содержание кальция в сыворотке крови (мг%) х вычисляют по формуле

Х=|0,2(О-К)|100,

где О- количество 0,01 н раствора марганцовокислого калия, израсходованное на титрование опытной пробы, мл.

К- тоже титрование контрольной пробы.

0,2 количество кальция, соответствующее 1 мл 0,01 н раствора марганцовокислого калия, мг.

Осуществив этот анализ, я получила, что содержание кальция в предоставленном мне образце сыворотки крови равно 5мг%.

О-0,05мл

К-0,3 мл

Х=|0,2(0,05-0,3)|100=5

Среднее содержание кальция в сыворотке крови 9-11мг%.

Вывод: В нашем анализе получилось 5мг%, это свидетельствует о том, что сыворотка крови была не свежая и количество кальция в ней уменьшилось.

До начала эксперимента

Контрольная проба Опытный образец

Полученные результаты(слабо-розовое окрашивание, устойчивое в течение 1 минуты)

Контрольная проба Опытный образец