- •Интерпретация результатов Основных лабораторных методов исследования в клинической практике
- •Предисловие
- •Исследование крови
- •Клинический анализ крови.
- •Исследование эритроцитарного ростка
- •Диагностика анемии и эритремии.
- •Исследование тромбоцитов
- •Исследование лейкоцитов
- •Лейкоцитозы и лейкопении.
- •Общее число лейкоцитов.
- •Процентное отношение отдельных лейкоцитов.
- •Наличие или отсутствие дегенеративных изменений лейкоцитов.
- •При патологических состояниях выделяют 5 типов гемограмм (по л.И.Мазуру):
- •Лейкемоидные реакции.
- •Исследование мочи
- •Общеклинический анализ мочи
- •Химический состав мочи
- •1 Протеинурия почечного происхождения:
- •1. Инсулярная (панкреатогенная) возникает при превышении гипергликемии почечного порога (8,8-9,9 ммоль/л) и наблюдается при:
- •2. Экстраинсулярная (внепанкреатическая):
- •Основные биохимические показатели крови и мочи, их изменения при различных заболеваниях
- •Современные технологии в клинико-лабораторной диагностике
- •Автоматизация в клинической химии
- •Уровни автоматизации
- •Классификация биохимических автоанализаторов
- •Анализаторы «жидкой химии»
- •Анализаторы «сухой химии»
- •Лазерная нефелометрия
- •Варианты турбидиметрического анализа
- •ФлюориметрИческий метод
- •Иммунохимические методы в клинической лабораторной практике
- •Иммуноферментный метод исследования
- •Радиоиммунологический анализ
- •Биохимические основы днк- и генно-инженерной технологии в медицине
- •Получение рекомбинантных днк.
- •Клонирование днк.
- •Полимеразная цепная реакция.
- •Единицы си в клинической лабораторной диагностике
- •Рекомендуемые правила применения Международной системы единиц в клинической лабораторной диагностике.
- •Список литературы
Лазерная нефелометрия
Нефелометрия – вид оптического анализа, который базируется на количественном измерении светового потока, рассеиваемого частицами дисперсной системы в направлении, обычно почти перпендикулярном направлению падающего луча света. Явление светорассеяния возникает в том случае, если размеры частиц, встречаемых на пути светового потока, превышают длину волны электромагнитного излучения. Измеряя интенсивность светорассеяния, определяют концентрацию, размеры и/или форму частиц веществ, находящихся в состоянии тонких взвесей, эмульсий или коллоидных растворов.
Другими словами, с помощью нефелометрического анализа измеряют степень мутности раствора (эмульсии, взвеси). Чем мутнее дисперсная система, тем больше она рассеивает света и тем меньше пропускает. В определенных условиях наблюдается пропорциональная зависимость между содержанием частиц во взвеси (капелек в эмульсии) и ее мутностью. Оптимальные условия измерения светорассеяния возникают при использовании растворов низкой концентрации.
В настоящее время в лабораторной практике не используются модели простых старых нефелометров, а применяются варианты лазерных нефелометров, позволяющих проводить максимально точные измерения.
Принцип работы лазерного нефелометра. Принцип работы прибора основан на измерении светорассеивания неокрашенных белковых растворов и других реагентов.
При измерении светорассеивания растворов на лазерном нефелометре источником излучения является гелий-неоновый лазер. Луч, идущий от гелий-неонового лазера, имеет фиксированную длину волны. Например, в однолучевом лазерном нефелометре фирмы «STET» (Германия) установлен лазер с длиной волны λ=632,8 нм. Измеряемая на приборе экстинкция – величина безразмерная и изменяется от 0 до бесконечности, но исследование производится только при одной определенной длине волны.
Такой монохроматический луч проходит через исследуемый раствор, находящийся в кювете, и рассеивается им. Регистрация производится с помощью фотоэлемента, встроенного в корпус прибора. Результатом работы фотоэлемента является изменение силы электрического тока, что и отображается на цифровом индикаторе дисплея. Перед фотоэлементом находится шторка, которая защищает его от попадания света. Она динамично связана с крышкой кюветного отделения: при открывании крышки шторка закрывается и наоборот.
Результат исследования выражается в единицах оптической плотности, которые пропорциональны концентрации светорассеивающего вещества при данной длине волны. Расчет концентрации светорассеивающих белковых растворов проводится графическим методом.
Особенности работы на лазерном нефелометре. Лазерный нефелометр «STET» работает в автоматическом или полуавтоматическом режиме. Если перед лазерным нефелометром установлен автоматический дозатор растворов, подающий кюветы в прибор, то работа осуществляется в автоматическом режиме. Если автоматический дозатор отсутствует, и реактивы дозируются ручным механическим дозатором, то лазерный нефелометр работает в полуавтоматическом режиме.
Прибор предназначен для исследования микрообъема образца, а именно 10 мкл сыворотки или плазмы крови с последующим получением предельно точного результата с минимальной ошибкой исследования, которой можно пренебречь на практике. (Такой подход к результатам исследования недопустим при работе с биохимическими автоанализаторами).
Порядок работы на однолучевом лазерном нефелометре «STET»:
Прибор включают в сеть за 15 минут до начала измерения. За это время гелий-неоновый лазер выходит на стационарный режим работы.
В начале работы используются кюветы с калибровочным материалом (стандартным, эталонным) известных концентраций. При этом микрообъем пластиковых одноразовых кювет заполняют исследуемым раствором, далее кюветы поочередно захватывает за верхние «ушки» кюветодержатель-транспортер и погружает их в камеру для измерения интенсивности светорассеивания, а после измерения результата вынимает и выбрасывает в урну для утилизации полистирена. Результат измерения загорается на экране дисплея и печатается на бумажной ленте.
Далее измеряют кюветы с исследуемыми образцами.
Расчет концентрации светорассеивающего раствора. Для этой цели используют графический метод, который заключается в построении калибровочного графика по экстинкциям известных концентраций. Например, для построения калибровочной кривой светорассеивания белковых растворов при определении иммунных комплексов сыворотки или плазмы крови применяют агрегированную при 63°С в течение 40 минут белковую γ-глобулиновую фракцию II КОНА. Результаты выражают в г/л эквивалентных концентраций агрегированного γ-глобулина.
Разновидностью нефелометрии является турбидиметрия.