45) Подсчет количества эритроцитов.
Ход работы: В пробирку с помощью автоматической пипетки набираем 4 мл 3% NaCI и 20 мкл крови. После перемешивания для подсчета количества эритроцитов заполняем камеру Горяева с притертым предварительно покровным стеклом. Разведение крови для подсчета эритроцитов можно осуществлять в меланжере для этого до метки 0,5 набираем кровь. Разводим 3% раствором NaCl до метки 101 (разведение в 200 раз). Смеситель интенсивно встряхиваем 5 минут, после чего первые 2 капли раствора выпускаем на ватный шарик и заполняем камеру Горяева.
Под малым увеличением микроскопа подсчитываем количество эритроцитов в 5 больших квадратах, разделенных на 16 ма-
леньких, по диагонали сетки Горяева. Расчет содержания эритроцитов производим по формуле:
X – содержание эритроцитов в 1 л крови,
А – сумма эритроцитов в 5 квадратах,
200 – разведение крови в меланжере,
(4000 и 80) – параметры камеры Горяева.
Определение содержания гемоглобина по методу Сали.
Наиболее простым и достаточно точным являетсяколориметрический метод определения гемоглобина (Нb) с по-мощью гемометра Сали. Этот прибор состоят из штатива, в котором имеются 3 вертикальных цилиндрических прореза. В
боковых прорезах находятся 2 запаянные с обоих концов
стеклянные трубочки, в которых содержится стандартный раствор (1 % раствор солянокислого гематина).
Ход определения. В градуированную пробирку гемометра наливают 0,1 N раствор HCl до нижней круговой метки 0,2 мл и вставляют ее в гемометр Сали. Капилляром Сали вносят в эту пробирку 0,02 мл крови, причем кровь выдувают осторожно, чтобы не допустить образования пузырей. Не вынимая капилляр из пробирки, его прополаскивают 2-3 раза надосадочным прозрачным раствором 0,1 N HCl, потом извлекают из жидкости, прикасаясь его
кончиком к стенкам пробирки, выдувают остатки жидкости и достают капилляр из пробирки. Кровь тщательно перемешивают
с кислотой и оставляют на 5 минут. За это время эритроциты гемолизируются и гемоглобин превращается в хлорид гематина бурого цвета. По истечении указанного времени к испытуемой жидкости по каплям добавляют дистиллированную воду. Содержимое пробирки размешивают тонкой стеклянной палочкой. Разведение продолжают до полного совпадения цвета
жидкости в градуированной пробирке с цветом стандартов. На шкале пробирки находят деление, соответствующее уровню жидкости по нижнему мениску. Цифра деления шкалы обозначает количество гемоглобина в г/дл.
Подсчет количества лейкоцитов.
Приготовление разведения крови в 20 раз 3% раствором уксусной кислоты можно осуществлять в пробирке с помощью автоматических пипеток. Для этого в пробирку последовательно вносим 0,4 мл (400 μl) 3% раствора уксусной кислоты и 20 μl крови. Содержимое пробирки вносим в камеру Горяева и осуществляем подсчет лейкоцитов в 100 незаштрихованных больших квадратах сетки камеры Горяева.
Подсчет лейкоцитов может быть также осуществлен с помощью меланжера. Из вены уха кролика набираем в меланжер
для лейкоцитов кровь до метки 0,5 и доводим 3% раствором уксусной кислоты до метки 11 (разведение в 20 раз), тщательно встряхиваем в течение 5 минут. Выпускаем 1-2 капли из меланжера на ватный шарик и затем заполняем камеру Горяева.
Расчет количества лейкоцитов производим по формуле:
Х – количество лейкоцитов в 1 л крови,
А – сумма лейкоцитов в 100 больших квадратах камеры,
20 – степень разведения крови в меланжере,
(4000 и 1600) – параметры камеры Горяева.
После сокращения величин подсчет количества лейкоцитов можно осуществлять по формуле:
X= A х 50/μl = A х 50 х 106 /л
Определение количества тромбоцитов – в норме (150 – 450) Х 10 9/л.
Тромбоциты встречаются в мазке крови либо в одиночку, либо чаще разбросаны кучками между эритроцитами. По величине тромбоциты равны приблизительно 1/3—1/4 эритроцита. Ядра в них нет. Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет, имеют вид округлых образований размером 2-4 мкм. В обычно окрашенном мазке крови подсчитать тромбоциты не удается, так как на воздухе они легко склеиваются в кучки. Существуют способы для предупреждения склеивания. Для этого капилляр Панченкова промывают 14% раствором магния сульфата. Затем набирают в него 25 делений (до метки 75) этого реактива и переносят на дно серологической пробирки. Кровь из пальца
берут тем же капилляром до метки «0» (К) и перемешивают ее с реактивом. Параллельно берут кровь для подсчета эритроцитов. Из смеси крови с раствором сульфата магния готовят тонкие маз-ки. Высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают краской Романовского в течение 1-2 ч. Окрашенный мазок микроскопируют с иммерсионной системой (Ув. 7 Ч 90). Подсчитывают количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов. Определив одновременно в счетной камере число эритроцитов в 1 л исследуемой крови и, зная, сколько тромбоцитов приходится на каждые 1000 эритроцитов, можно легко вычислить количество тромбоцитов в 1 л крови. Подсчет ретикулоцитов – см. ответ 15 46) Анализ геммограмм
ПРАВИЛА СОСТАВЛЕНИЯ ЗАКЛЮЧЕНИЯ
ПО ГЕМОГРАММЕ:
1. На первом месте в заключении должна находиться самая тяжелая патология, имеющаяся в данной гемограмме (тя-жесть нарушений системы крови по убыванию: лейкоз → анемия тяжелой степени (Hb < 70 г/л) → агранулоцитоз, лейкопения (менее 2 Х 109 /л), → анемия средней степени тяжести, лейкоцитоз →
тромбоцитопения (< 50 Х 109 /л) → легкая анемия.
2. При постановке диагноза «лейкоз» обязательно указать вид лейкоза (острый или хронический миело-, лимфолейкоз или
др.), форму (вариант) лейкоза в зависимости от количества клеток (лейкемическая, сублейкемическая, алейкемическая или лейкопеническая).
3. При наличии анемии необходимо оценить степень тяжести, дать характеристику по цветовому показателю и регенераторной способности костного мозга.
4. При характеристике лейкоцитоза должен быть указан его вид, а в случае нейтрофильного лейкоцитоза – вид ядерного сдвига лейкоцитарной формулы, подсчитать И.Я.С.