Нормальные значения показателей общеклинического исследования крови.

Показатель	Норма
Гемоглобин:
-женщины	120-140 г/л
-мужчины	130-160 г/л
-дети	120-240 г/л
Эритроциты:
-женщины	3,9-4,7 10*12/л
-мужчины	4,0-5,0 10*12/л
-дети	4,9-7 10*12/л
Цветовой показатель	0,86-1,1
Гематокрит:
-женщины	36-42%
-мужчины	40-48%
-дети	50-55%
СОЭ:
-женщины	2-15 мм в час
-мужчины	1-10 мм в час
Ретикулоциты:
-взрослые	2-10%
-дети	2-20 %
Тромбоциты	180-320 10*9/л
Лейкоциты:
-взрослые	4,0-9,0 10*9/л
- дети	4-12 10*9/л

РАБОТА 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОЭ ПО ПАНЧЕНКОВУ.

Кровь при движении - устойчивая суспензия. При помещении ее в стеклянный сосуд, эритроциты в силу их тяжести оседают.

Скорость оседания эритроцитов зависит от состояния организма. При некоторых физиологических состояниях (например, беременность) и при целом ряде заболеваний (туберкулез, ревматизм и др.) оседание эритроцитов бывает незначительно ускоренным.

Р ис. 1. Аппарат Панченкова для определения СОЭ

Для определения СОЭ применяют прибор Панченкова, состоящий из штатива, в котором могут быть зажаты в вертикальном положении специальные капилляры. Капилляры градуированы в миллиметрах. Метка 0 стоит на расстоянии 100 мм от конца. На капилляре есть еще две метки: К (кровь) - на высоте нуля и метка Р (реактив) - на уровне 50 мм.

Для работы необходимо: прибор Панченкова, часовое стекло, стерильный скарификатор, вата, 5% раствор цитрата натрия, спирт, эфир, йод. Работу проводят на человеке.

Ход работы. Капилляр промывают 5% раствором цитрата натрия. Затем набирают цитрат натрия до метки Р на уровне 50 мм и выдувают его на часовое стекло. Затем в тот же капилляр набирают кровь из пальца человека до метки К дважды.

Следует иметь в виду, что для успешного взятия крови прокол должен быть довольно глубоким; капилляр следует держать горизонтально, погрузив его кончик в каплю крови, при этом кровь сама наполняет капилляр.

Обе порции выпускают на часовое стекло, смешивая с имеющимся там цитратом натрия. Полученную таким образом на часовом стекле смесь крови с цитратом натрия в отношении 4:1 набирают в капилляр до метки 0 и ставят капилляр в штатив. Через час смотрят, какова высота в миллиметрах образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре. Его величина и является мерой СОЭ. В норме СОЭ составляет от 4 до 10 мм/ч; показания от 10 до 15 мм/ч расцениваются как незначительное ускорение; 15-30 мм/ч - среднее ускорение, 30 мм/ч и выше - резкое ускорение.

Примечание. Для практической работы допустимо набирать половинное количество крови и цитрата натрия, т.е. цитрата – до 25 мм, крови – до 100 мм в капилляре Панченкова.

РАБОТА 3. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА ЭРИТРОЦИТОВ.

Унифицированная методика математического подсчета эритроцитов.

Осуществляется с помощью счетчиков и гематологических анализаторов, выпускаемых различными фирмами, например, “Coultronics France SA” (Франция), “ToA Medical Electronics СО” (Япония), “Hoffnian-La Roche” (Швейцария), “Serono” (США) и др.

При работе с гематологическими счетчиками подготовка пробы (разведение) осуществляется вручную. При использовании гематологических анализаторов отбор пробы крови и ее обработка происходят без участия лаборанта.

Принцип работы большинства анализаторов основан на кондуктометрическом методе: определенное количество разведенной изотоническим раствором натрия хлорида или другого электролита крови пропускается через микроотверстие, проходящая через него клетка увеличивает сопротивление между электродами, и возникаю­щий импульс передается на счетное устройство цифровой индикацией.

Исследование выполняется в соответствии с инструкцией, прилагаемой к анализатору.

ПОДСЧЕТ КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ.

В крови содержится в среднем 4,5-5 х 10¹²/л (в 1 мкл - 1 мм³ крови обычно содержится эритроцитов у мужчин 4500000—5000000, у женщин: 4000000—4500000.

Для подсчета форменных элементов кровь, взятую из пальца, разбавляют в специальных смесителях (меланжерах), чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для подсчета числа эритроцитов пользуются счетной камерой. Каков бы ни был внешний вид камеры, принцип ее устройства один и тот же. На предметном стекле в углублении высотой 0,1мм расположена сетка. В камере Горяева (рис.а), кото­рой чаще всего пользуются, сетка состоит из 225 больших квад­ратов. Из них 25 квадратов дополнительно разделены на 16 ма­леньких. Каждый разделенный квадрат со всех сторон окружен неразделенными, что облегчает счет (рис.б).

Для подсчета форменных элементов кровь разбавляют чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют 3% гипертонический раствор хлорида натрия, в котором эритроциты сморщиваются.

Ход работы:

1. Перед началом работы необходимо разобраться в устройстве сетки счетной камеры. Для этого помещают камеру под микроскопом и сначала на малом, а затем под большим увеличением рассматривают сетку, находят малые квадратики и большие квадраты.

2. В предварительно высушенную чистую коническую пробирку точно отмеривают 4 мл физиологического раствора и осторожно выдувают в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь набирают в капилляр из гемометра Сали). Получается разведение 1:200. Взвесь тщательно перемешивают (пробирочный способ Н.М.Николаева).

3.Выпустив предварительно наружу 1-2 капли, наносят капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стёклышком. На предметное стекло в том месте, где на нем расположена сетка, поместите покровное стекло и тщательно прижмите его большими пальцами рук (рис. 3). До появления н ьютоновых колец – окрашенных в цвет радуги полосок. Одну треть содержимого смесителя выпустите на ватку, а следующую каплю вы­дуйте на предметное стекло подпокровное. Поместите предметное стекло на столик микроскопа, найдите при малом увеличении сетку. Затем, установив большое увеличение, произведите подсчет. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении (окуляр х 7, объектив х 40).

Несмотря на перемешивание, эритроциты не совсем равно­мерно распределяются в поле зрения. В этом можно убедиться, если подсчитать количество эритроцитов в нескольких соседних малых квадратах. Чтобы быть уверенным в точности подсчета, обычно эритроциты сосчитывают в 80 малых квадратах (5 больших квадратов, расположенных в разных местах сетки, например по диагонали). Рекомендуется вначале на листе бумаги нарисовать пять больших квадратов, разделить их на 16 маленьких и в каждый маленький квадратик вписать найденное число эритроцитов. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границах между маленькими квадратиками, руководствуются правилом Егорова: «Относящимся к данному квадратику являются эритроциты, лежащие внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе в данном квадратике, не считаются».

Подсчитав т.о. число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадратике А/80. Сторона одного малого квадрата равна 1/20 мм, следовательно, его площадь 1/400 мм². Глубина камеры—0,1 мм, отсюда объем пространства над одним ма­лым квадратом составит 1/400·1/10=1/4000 мм³. Если в объеме над 80 ма­лыми квадратами найде­но А эритроцитов, то на один малый квадрат при­ходится А/80. Это в объеме 1/4000 мм³, Зная, что объем части камеры под одним маленьким квадратиком равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получается число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на разведение – 200, получают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови. Т.о., формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х =	А · 4000 · 200	В 1 мл крови	Х – искомое число эритроцитов
	80		А – число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках
Х =	А · 4000 · 200 · 106	В 1 л крови
	80

где Х - искомое число эритроцитов,

А - число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках.

РАБОТА №4. НОРМАЛЬНАЯ МИЕЛОГРАММА.

Костный мозг закладывается в конце 3 месяца эмбрионального развития. С 4 месяца начинается костномозговое кроветворение, которое к концу внутриутробного развития и на протяжении всего постнатального развития становиться основным. Главное отличие костного мозга детей до 3-х лет жизни от костного мозга взрослых состоит в повышенном содержании в нем лимфоцитов.

Для клинико-лабораторной диагностики в детской гематологии совершенно необходимо исследование клеточной формулы пунктатов костного мозга. Сейчас лейкозы являются самой частой формой злокачественный новообразований у детей, поэтому любой врач-педиатр должен иметь представление о нормативах не только общеклинического анализа крови, но и костного мозга. Ниже приводиться пример клеточного состава миелограммы здоровых детей.

Клеточные формы	1мес.-1год	1-2 года	старше 3 лет
Ретикулярные клетки	0-5	0	0,1-0,5
Миелобласты	1-8	1-2	0,7-6,7
Бласты	0	0	0,2-1,9
Микромиелобласты	1,5-11,5	2,5-1	0,7-6,7
Метамиелоциты эозинофильные	0-3	0-2,5	0-3,5
Палочкоядерные эозинофилы	0-0,9	0-1,5	0-0,9
Сегментоядерные эозинофилы	0-4	0-1	0,9-5,1
Эритробласты	7-20	0-22	0-1,6
Нормобласты	0-4	0-0,4	0-4,1
Лимфоциты	6-16,5	10-16,5	2,0-8,0
Плазматические клетки	0-3	0-2	0-2
Мегакариобласты	0-0,25	0-3,5	0-0,4
Индекс созревания нейтрофилов	1-6,3:1	1,5-4,3:1	0,7-1,45:1

При оценке пунктата костного мозга, кроме количества подсчитанных клеток, необходимо учитывать и соотношение между молодыми и более зрелыми формами нейтрофилов - так называемый костно-мозговой индекс созревания нейтрофилов (ИСН). В норме этот индекс меньше единицы и, по Г.А. Алексееву, равен 0,6-0,8. Индекс определяется по следующей формуле:

промиелоциты + миелоциты + метамиелоциты

ИСН = ——————————————————————

палочкоядерные + сегментоядерные

Индекс созревания эритробластов (ИСЭ) - это соотношение количества гемоглобинсодержащих нормобластов (в патологии - мегалобластов) к количеству всех клеток эритробластического ряда:

полихроматофильные + оксифильные эритробласты

ИСЭ = ————————————————————————

эритробласты + пронормобласты + полихромато-

фильные + оксифильные эритробласты

В норме этот индекс по Г.А. Алексееву равен 0,8.

Наличие большого количество ретикулоцитов позволяет заподозрить скрытое кровотечение.