5. Методика выполнения практической работы.

Практические задания:

Задачи в плане УИРС:

1. Определение групп крови.

2. Переливание крови.

3. Определение времени свертывания крови.

4. Анализ ТЭГ и ЭЛКГ. Схема свертывания крови.

РАБОТА 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ.

Для проведения определения групп крови требуются:

1. Стандартные сыворотки I, II, III, IV групп.

2. Кровь, групповую принадлежность которой мы будем определять.

3. Предметное стекло для размещения капель сывороток.

4. Стеклянные лопаточки для перемешивания.

5. Раствор NaCl 0,9% (физиологический раствор).

На предметное стекло помещают отдельно (не смешивая) по капле стандартной сыворотки I, II и III групп. Потом добавляют к каждой капле 2-3 капли крови, групповую принадлежность которой мы хотим определить. Внимание! Ни в коем случае нельзя допустить попадания одной сыворотки к другой, иначе результат будет недостоверен, поэтому перемешивание крови и сыворотки надо производить чистыми стеклянными лопаточками (новой для каждой капли).

Через 2-4 минуты добавляем к каждой капле 1-3 капли раствора NaCl 0,9% для лучшей оценки.

Агглютинация наступила, если заметны невооруженным глазом эритроциты, склеившиеся между собой в виде комочков.

Принцип определения группы крови.

Стандартная сыворотка				Группа
I	II	III	IV		крови
—	—	—	—		1 группа
+	—	+	—		2 группа
+	+	—	—		3 группа
+	+	+	—		4 группа

Примечание: “ + “ - видна агглютинация (склеившиеся эритроциты)

“ — “ - нет агглютинации.

В случае, если во всех трех каплях видна агглютинация, то добавляем каплю стандартной сыворотки IV группы, добавляем к ней 2-3 капли крови и через 2-3 минуты - 1-3 капли физиологического раствора. При отсутствии агглютинации можно предполагать, что кровь IV группы, если агглютинация есть - сменить набор сывороток - определение неверно.

В практике используют одновременно 2 набора стандартных сывороток одновременно, чтобы избежать случайных неправильных результатов при некачественных сыворотках.

РАБОТА № 2 . ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС- ФАКТОРА.

Для проведения требуются:

1. Стандартная антирезус сыворотка.

2. Контрольная сыворотка (не имеет резус-антител).

3. Кровь, наличие или отсутствие резус-фактора в которой мы хотим определить.

4. Физиологический раствор.

5. Предметное стекло.

6. Стеклянные палочки для размешивания.

На предметном стекле делаем пометку К (Контроль) и Rh (резус фактор). Рядом с К капаем 4-6 капель контрольной сыворотки, а рядом с Rh - 4-6 капель стандартной антирезус-сыворотки так, чтобы они не смешивались.

Контроль	Антирезус-сыворотка	Резус фактор
—	+	Положительный
—	—	Отрицательный
+	не имеет значения	Не верно определено

Примечание: “ — “ - Отсутствие агглютинации

“ + “ - Наличие агглютинации.

Рядом с каждой каплей сывороток капаем 2-3 капли крови.

Смешиваем контрольную сыворотку с кровью (обязательно первой, чтобы контроль был чист!), затем - стандартную сыворотку с кровью. К каждой капле добавляем 1-2 капли физиологического раствора - для лучшего определения.

Покачивая предметное стекло, определяем наличие или отсутствие агглютинации.

По результатам исследования делаем вывод.

РАБОТА № 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ.

Моноклинальные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей – носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Имеются и цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ, а также Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В или резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется,

Рис. 1. Определение группы крови с помощью цоликлонов.

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

РАБОТА 4. ПЕРЕЛИВАНИЕ КРОВИ.

Переливание крови - серьезная операция по трансплантации живой ткани человека. Этот метод лечения широко распространен в клинической практике. Переливание крови применяют врачи различных специальностей: хирурги, акушеры-гинекологи, травматологи, терапевты и т. д.

Абсолютными показаниями к переливанию крови считаются острая кровопотеря, шок, кровотечение, тяжелая анемия, тяжелые травматичные операции, в том числе с искусственным кровообращением. Показаниями к переливанию крови и ее компонентов служат анемии различного происхождения, болезни крови, гнойно-воспалительные заболевания, тяжелые интоксикации.

Врач, производящий трансфузию, обязан независимо от проведенных ранее исследований и имеющихся записей лично провести следующие контрольные исследования:

1) определить групповую принадлежность крови реципиента по системе AB0 и сверить результат с данными истории болезни; 2) определить групповую принадлежность эритроцитов донора и сопоставить результат с данными на этикетке контейнера или бутылки; 3) провести пробы на совместимость в отношении групп крови донора и реципиента по системе AB0 и резус-фактору; 4) провести биологическую пробу.

Запрещается переливание донорской крови и ее компонентов, не исследованных на СПИД, поверхностный антиген гепатита В и сифилис. Переливание крови и ее компонентов производится с соблюдением правил асептики одноразовыми пластиковыми системами. Полученная от донора кровь (обычно в объеме 450 мл) после добавления консервирующего раствора может храниться в холодильнике при температуре 4-8°С не более 21 дня. Замороженные при температуре жидкого азота (-196°С) эритроциты могут храниться годами.

Допускается переливание цельной крови и ее компонентов только той группы и резус-принадлежности, которая имеется у реципиента. В исключительных случаях допускается переливание резус-отрицательной крови группы О(I) («универсальный донор») реципиенту с любой группой крови в количестве до 500 мл (за исключением детей). Кровь резус-отрицательных доноров А (II) или В (III) можно переливать не только совпадающим по группе реципиентам, но и реципиенту с АВ (IV) группой независимо от его резус принадлежности. Больной с АВ (IV) группой резус-положительной крови может считаться «универсальным реципиентом».

Кроме того, при отсутствии одногруппной крови может быть перелита кровь (эритроцитная масса) 0(I) резус-положительной группы резус-положительному реципиенту любой группы по системе АВ0. Кровь группы А (II) или В (III) резус-положительная может быть перелита резус-положительному реципиенту с группой АВ (IV). Во всех случаях абсолютно обязательной является проба на совместимость. При наличии антител редкой специфичности требуется индивидуальный подбор донорской крови и проведение дополнительных проб на совместимость.