5. Методика выполнения практической работы.

Практические задания:

Задачи в плане УИРС:

1. Виды лейкоцитов и их функции.

2. Дифференцировка видов лейкоцитов.

3. Подсчет лейкоцитарной формулы.

4. Работа с картой оценки Т- и В- системы иммунитете человека.

РАБОТА 1. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ВИДОВ ЛЕЙКОЦИТОВ.

В окрашенных мазках периферической крови дифференцировать все виды лейкоцитов. При этом учитывать размеры видимых под микроскопом клеток, насыщенность цитоплазмы, наличие или отсутствие гранул, особенности формы ядра.

РАБОТА 2. ПОДСЧЕТ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЫ.

Подсчет рекомендуется производить всегда в одном порядке: поло­вину клеток считать в верхней, половину - в нижней части мазка, не заходя на самый край и середину, по зигзагу (3-4 поля зрения вдоль мазка, 3-4 поля под правым углом к середине мазка, затем 3-4 поля в сторону параллельно краю, вновь под прямым углом вверх и т.д. в од­ну сторону).

считаем с тонкой части вниз до конца мазка

10 см

10 см

э

м

с

п

п

э

с

с

с

э

Считаем в 100 клетках

В современных автоанализаторах Культер "ДИФФЗ" и техникой "Гемалог Д" подсчет лейкоцитарной формулы производится автомати­чески с помощью специальных систем.

Нормальная лейкоформула

Гранулоциты			Агранулоциты
нейтрофилы
юные	палочко- ядерные	сегментоя- дерные	базофилы	эозинофилы	лимфоциты	моно- циты
Относ.0-1%	2-4%	45-65%	0-1%	1-4%	26-40%	2-6%
Абсол --	80-320	2200-4800	0-40	40-320	1040-3200	80-480

При появлении в ОАК молодых форм ( юные, палочкоядерные) говорят о сдвиге влево, появление зрелых (сегментоядерных нейтрофилов) – вправо.

РАБОТА 3 РАБОТА С КАРТОЙ ОЦЕНКИ Т- И В-СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА У ЧЕЛОВЕКА.

Оценка т-системы иммунитета (клеточный иммунитет).

Т- лимфоциты — это клетки-регуляторы, которые действуют как рубильники: включают и выключают действие иммунной системы. Команды они отдают, выделяя сигнальные молекулы, которые называются цитакинами. Эти молекулы переносят сигналы от Т-лимфоцитов к другим клеткам. B-лимфоциты вырабатывают специальные белки — антитела.

Антитела — это специальные белки, которые с удивительной точностью — как ключ, подогнанный к замку, — узнают тот субстрат, против которого они направлены. Антигены — это белки или фрагменты белков, несущие признаки чужеродности и вызывающие иммунный ответ при введении в организм. Все клетки иммунной системы — и Т-лимфоциты, и В-лимфоциты, и макрофаги — обладают способностью очень быстро мигрировать по всему организму. Лучше всего передвигаются Т-лимфоциты и вспомогательные клетки, несколько хуже — В-лимфоциты.

Для оценки Т-системы иммунитета пользуются следующими методами:

1.Метод "спонтанных" розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) - определяют количество Т-лимфоцитов в крови.

2. Реакция бласттрансформации лимфоцитов in vitro под влиянием ФГА или в микст культуре.

3. Определение динамики бласттрансформации.

4.Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета.

Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов факторов; угнетающим их миграцию (MIF), выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода in vitro можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.

5. Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулезы, трихофитин). 6. Контактная аллергия к динитрохлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероятность контакта индивидуума с данными редкими химическими соединениями ничтожна, проба ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развить гиперчувствительность замедленного типа, т.е. функциональной активности Т-системы иммунитета.

7. Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция тоже относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированному организму по отношению к трансплантационным агентам, что может оказаться нежелательным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.

8. Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимус-зависимых областей вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрении на комбинированные иммунодефициты и злокачественные образования.