Тема 16. Производство субъединичных вирусных

ВАКЦИН

Инактивированные вакцины обычно содержат значительное количество посторонних вирусных белков, если в качестве активного компонента вакцины использовался цельный вирус. Концепцию биохимически чистой вакцины можно реализовать, если идентифицировать те компоненты вируса, которые стимулируют в организме реципиента образование нейтрализующих антител. Поэтому были разработаны методы получения очищенных препаратов биологически активных вирусных субъединиц, с целью усовершенствования инактивированных; противовирусных вакцин.

Существуют следующие методы фракционирования вирусных антигенов:

1. Солюбилизация:

- с помощью протеолитических ферментов - метод основан на избирательности действия протеаз и на структурных особенностях поверхностных антигенов;

- с помощью детергентов - использование ионных и неионных детергентах (додецилсульфат натрия и дезоксихолат натрия). При этом происходит практически полное разрушение вирусов. После обработки вирусов детергентами возникает смесь из 9 - 10 белков;

- с использованием органических растворителей - чаще применяют кислую экстракцию смеси хлороформа с метанолом.

2. Сепарация. Обработка вирусной суспензии соответствующим солюбилизирующим агентом приводит к разрушению вирусных частиц и выходу из них необходимых субъединиц. В результате получается смесь вирусных нуклеотидов и поверхностных субъединиц. Получить чистые субъединичные препараты можно только при разделении смеси. Одним из простейших методов отделения является адсорбирование смеси гидроокисью алюминия. Гель гидроокиси добавляется к смеси при надлежащем значении рН, полученная система подвергается центрифугированию. Надосадочную жидкость отделяют, а конгломераты гидроокиси с адсорбированными субъединицами ресуспендируют в нужном разбавителе.

В препаративном масштабе нашел применение метод использования хроматографических колонок. Но гораздо шире применяется метод выделения субъединиц с помощью центрифугирования в градиенте плотности (обычно в градиенте сахарозы). Этот метод применим как в препаративных, так и в крупномасштабных операциях.

Субъединицы, как правило, имеют меньшую плотность, чем вирусные нуклеотиды. Поэтому, когда солюбилизированная смесь центрифугируется через градиент плотности сахарозы, субъединицы и нуклеотиды будут образовывать четкие и хорошо разделяющиеся слои, которые можно собрать как самостоятельные фракции.

После выявления и выделения индивидуальных протективных антигенов возбудителя приступают к конструированию субъединичной вакцины по определенной рецептуре.

Вакцины из расщепленного вириона (сплит-вирусные вакцины) получают путем обработки эфиром цельной вирусной частицы. Такая вакцина содержит в себе осколки разрушенных вирусных частиц со всеми антигенами вируса, включая балластные примеси. Липиды при обработке вирионов этиловым эфиром в основном удаляются, что ведет к снижению пирогенных реакций и лучшей переносимости таких прививок.

Субъединичные вакцины обладают высокой иммуногенностью только при условии правильного их приготовления. Высоко очищенная субъединичная вакцина почти полностью свободна от посторонних белков клеточной или вирусной природы.

Субъединичные вакцины стандартизируют по массе белка на дозу и по специфичности иммунизирующего гликопротеида.