Методика забору крові

 

Підрахунок еритроцитів у камері Горяєва.

Набрати кров у меланжер (змішувач) для еритроцитів до позначки 0,5 і заповнити його до позначки 101 гіпертонічним (3 %) розчином хлориду натрію.

Розведення в 200 разів можна зробити і без змішувача. У суху чисту пробірку відміряти 4 мл розчину хлориду натрію і внести 0,02 мл крові.

На виступаючі бруски чистого й сухого скла із сіткою Горяєва покласти покривне скельце. Рухаючи покривне скельце в сагітальному напрямку, притерти його. Поява кольорових кілець в місцях контакту скляних поверхонь буде свідчити про це. Висота утвореної камери над сіткою Горяєва буде 0,1 мм.

З капіляра змішувача випустити розчинник на вату, а камеру заповнити розчином крові з розширення.

Якщо розведення було в пробірці, то пастерівською піпеткою або іншим капіляром набрати суміш і заповнити камеру. При цьому необхідно слідкувати, щоб в камері не утворились повітряні бульбашки.

Через 1-2 хвилини, коли еритроцити осядуть, підрахувати їх у 5 великих, розділених на 16 малих квадратів, при малому збільшенні мікроскопа в затемненому полі зору. Підрахунок проводити з верхнього квадрата по діагоналі вниз. Кількість еритроцитів у 1 л циркулюючої крові розрахувати за формулою:

х = [(а · 200) : 80] · 4 · 10⁹, де

х – кількість еритроцитів у 1 л крові

а – кількість еритроцитів у 5 великих квадратах

200 – розведення крові

80 – кількість малих квадратів.

У протоколі схематично зобразити сітку Горяєва з розміщеними над нею еритроцитами.

У висновку вказати, чи відповідає встановлена кількість еритроцитів фізіологічній нормі, якщо ні, то розкрити можливу причину цього відхилення.

VIDEO

Методика підрахунку еритроцитів у камері Горяєва.

 

Визначення швидкості осідання еритроцитів

Капіляр Панченкова заповнити розчином цитрату натрію до позначки Р (розчин) і вилити його у фарфорову чашечку. Потім двічі набрати кров до позначки К (кров) і внести її до відміряного цитрату натрію, перемішати. Заповнити капіляр сумішшю до позначки "К" і встановити його в строго вертикальному положенні в апараті Панченкова.

Визначити належну ШОЕ у відповідності з попередньо-отриманими даними кількості еритроцитів за формулою:

ШОЕ = 42-(7,5 • кількість в 1 л) = мм/год, де

42 і 7,5 – коефіцієнти

Співставити належну величину ШОЕ з фактичною

 

Визначення гемоглобіну за допомогою гемометра Салі.

У середню, градуйовану пробірку гемометра Салі до нижньої колової мітки піпеткою налити 0,1 Н хлористоводневої кислоти. Туди ж внести 0,02 мл крові, обережно видуваючи. Вміст пробірки перемішати і залишити на 5 хвилин для перетворення гемоглобіну в хлорид гематин. Дистильованою водою довести вміст середньої пробірки до кольору стандартів. Забарвлення порівнювати в прохідному світлі, тримаючи гемометр на рівні очей.

VIDEO

Визначення гемоглобіну за допомогою гемометра Салі.

 

Визначення гемоглобіну ціанметгемоглобіновим методом

У суху чисту пробірку внести 5 мл трансформуюючого розчину і 0,02 мл досліджуваної крові. Вміст пробірки добре перемішати і залишити на 10 хв. Потім визначити оптичну густину одержаної суміші та стандартного розчину на фотоелектроколориметрі (довжина хвилі 500-600 нм, зелений світлофільтр) проти трансформуюючого розчину.

Вміст гемоглобіну розрахувати за формулою:

Нв г/л = [(Е досл. пр. : Е станд. пр.) • 251] • С, де

Е досліджуваної і Е стандартної проб – оптична густина.

С – концентрація Нв в стандартному розчині – 0,5975 г/л.

251 – коефіцієнт розведення крові.

Для визначення гемоглобіну за реактивами, які зараз є на кафедрі використовуємо формулу: Нв г/л = Е досл. пр. • 367,7, де Е досліджуваної проби – її оптична густина.

VIDEO