Модульная единица 1.1 Морфология и физиология микроорганизмов

ЗАНЯТИЕ 1.1.4 Дата______________

Физиология микробов. Питание и дыхание бактерий. Методы выделения и идентификации чистых культур аэробов и анаэробов

Цель занятия:

1. Изучить культуральные и биохимические свойства бактерий.

2. Изучить основные биологические свойства аэробов и анаэробов.

3. Изучить методы выявления чистых культур аэробов и анаэробов с целью их

идентификации.

Студент должен знать:

1. Особенности метаболизма бактерий.

2. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.

3. Питание бактерий.

4. Основные принципы культивирования.

5. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной активности.

6. Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение).

7. Методы культивирования анаэробов.

Студент должен уметь:

■ Применять бактериологический метод диагностики для идентификации бактерий.

Студент должен владеть:

алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей

Работа № 1. Методы выделения и идентификации аэробных и анаэробных бактерий

Цель: изучить основные методы выделения и идентификации аэробов и анаэробов

(см. теоретическую справку)

I

II

III

А ) *

IV

III

Ж)

Б)

Г)

)

Е)

В) Д)

Реакция агглютинации

I. Сбор исследуемого материала

II. Посев исследуемых микроорганизмов на простые, ДДС и элективные питательные

среды с целью получения изолированных колоний

III. Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде

IV. Идентификация выделенной чистой культуры

А) изучение морфологических и тинкториальных свойств

Б) изучение культуральных свойств

В) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными сыворотками

Г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса

Д) определение чувствительности микробов к антибиотикам, с помощью метода бумажных дисков

Е) проба с бактериофагами (реакция фаголизабельности)

Ж) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания, нейтрализацию токсина

* проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции (фаготипирование)

Особенности культивирования анаэробов:

1._________________________________________________________________________

2._________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Работа № 1

Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3х до 5ти суток, а в отдельных случаях и более.

Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил:

1. Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений.

2. Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.

3. Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования:

- фамилия, имя, отчество, возраст пациента;

- предполагаемый диагноз заболевания;

- предшествующая антимикробная терапия;

- характер материала;

- дата и время взятия материала;

- цель исследования;

- название лечебного учреждения, номер отделения, палаты;

- подпись лечащего врача.

Бактериологический метод осуществляется в два этапа.

1. Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток).

2. Идентификация чистой культуры (1-3 суток).

На первом этапе проводится посев исследуемого материала на твердую или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств, отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенности и персистентных свойств.

Работа № 2. Техника посева на питательные среды

Цель: ознакомиться с техникой посева на жидкие и плотные питательные среды и указать значение метода (см. теоретическую справку)

Самостоятельная работа: рассмотреть готовые посевы, зарисовать, описать назначение каждой техники посева.

название	рисунок	значение
Седиментация по Коху
Посев по Дригальскому
Посев по Шукевичу
Метод укола
Посев на скошенный агар

Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2 Теоретическая справка

Техника посева на жидкие и плотные питательные среды

Методы, основанные на механическом разобщении микробов

Метод Дригальского

Берут 3 чашки Петри с МПА, стерильной пипеткой материал помещают на поверхность МПА в чашку № 1

посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом)

Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на

Тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате-

поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят

нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи,

шпателя, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят

чашку МПА. и на других секторах.

На последних секторах вырастают

отдельные колонии.

1 2 3 1 2

изолированные колонии 4 3

4 сектор - изолированные колонии

С нижение концентрации микробов

Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине.

Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).

Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов

Метод Шукевича

Техника посева. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Для получения чистой культуры ее отсевают с верхнего края посева.

Метод прогревания

Позволяет отделить спорообразующие бациллы от не споровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80° ,С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают.

Бактериостатический метод (метод ингибирования)

Основан на избирательном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы. Например, антибиотики позволяют очистить исследуемый вируссодержащий материал от сопутствующей бактериальной флоры. Серная кислота (5% р-р) быстро убивает большинство бактерий, а туберкулезная палочка выживает в этих условиях.

Метод заражения лабораторных животных или растений

Применяют в целях выделения и идентификации патогенных микроорганизмов и отделения их от сапрофитной флоры. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или сорта растений.

После появления у зараженных организмов признаков болезни их убивают и производят посев органов и тканей на питательные среды. При выделении в изучении облигатных паразитов этот метод является основным и единственным

Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах

(культуральные свойства)

Цель: изучить характер роста бактерий на основных и дифференциально-диагностических питательных средах; изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных средах.

Самостоятельная работа: рассмотреть готовый посев на плотной питательной среде, описать культуральные свойства колоний

Критерии	Описание	Колонии
Форма
Размер
Характер края
Пигмент (цвет)
Поверхность
Прозрачность
Структура
Консистенция (вязкость)

Вывод:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

К работе № 3 Теоретическая справка

Микроорганизмам как всему живому присущи три основные физиологические функции: питание, дыхание и размножение.

Питание необходимо для синтеза в клетке всех органических структур, оно осуществляется с поглощением энергии. Основным источником энергии являются окислительно-восстановительные процессы (дыхание). По типу питания микробы делятся на аутотрофов и гетеротрофов. Аутотрофы усваивают азот и углерод из неорганических веществ (углекислый газ и др.), а гетеротрофы - из сложных органических соединений (аминокислоты, моносахара и др.), синтезированных ранее другими живыми организмами. Гетеротрофы в свою очередь делятся на сапрофиты и паразиты. Сапрофиты нуждаются в органических соединениях мертвого субстрата, а паразиты получают питательные вещества в организме-хозяине. Паразиты могут быть облигатными (внутриклеточными) и факультативными. Облигатные внутриклеточные паразиты (хламидии) лишены способности жить и размножаться вне клеток хозяина, т.к. зависят от их метаболизма. Факультативные паразиты (гонококки, стафилококки и др.) могут питаться как в организме, так и вне его, поскольку обеспечены автономными ферментными системами при образовании веществ и энергии.

Колония – видимое невооруженным взглядом скопление микробов на плотной питательной среде, выросшее из одной клетки.

Колония - это потомство микробов, выросших из одной клетки. Т.к. все микробы в колонии выросли из одной клетки, они относятся к одному виду, т.е. в каждой изолированной колонии (отдельно стоящей, не сливающейся с другими колониями) содержится чистая культура.

Чистая культура – популяция микроорганизмов, состоящая из особей одного вида.

Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Цель: изучить характер роста бактерий на жидких питательных средах; изучить особенности роста микроорганизмов

Самостоятельная работа: зарегистрировать характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах.

Опыт №1 Опыт №2 Опыт №3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель столбняка) (возбудитель холеры)

Характер роста:

________________ _________________ ________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________