ЗАНЯТИЯЕ 1.1.2 Дата_____________________

Морфология прокариот. Методы выявления: окраска, микроскопия

Цель занятия:

изучить морфологию прокариот; особенности ультраструктуры бактерий, функции отдельных структур; ознакомиться с методами приготовления и окраски микропрепаратов.

Студент должен знать:

1. Основные формы и размеры бактерий.

2. Постоянные и непостоянные структуры бактериальной клетки.

Функциональное значение отдельных структурных компонентов.

3. Различия в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Химический состав. Функции.

4. Протопласты, сферопласты и L-формы бактерий.

5. Механизмы взаимодействия красителей с клеточной стенкой бактерий в

окраске по Граму.

6. Методы изучения микроорганизмов в нативном и окрашенном состоянии.

Простые и сложные методы окрашивания. Методы Грама, Циля-Нильсена,

Ожешко, Нейссера, Бурри-Гинса, Романовского-Гимза.

Студент должен уметь:

• приготовить нативные и фиксированные препараты

• окрасить препараты простым методом и методом Грама.

Студент должен владеть:

методами окраски структурных компонентов бактерий (клеточной стенки)

Работа № 1. Морфология микроорганизмов

Цель: сравнить формы и размеры микроорганизмов на примере кишечной палочки, стафилококка и гриба кандиды (см. теоретическую справку).

Самостоятельная работа: микроскопируйте готовые препараты-мазки, оцените морфологические свойства микроорганизмов.

Кишечная палочка Результат:

Стафилококк

Результат:

Кандида Результат:

Вывод:

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Изучение строения бактериальной клетки и структуры клеточной стенки

Цель: изучить строение бактериальной клетки и структуру клеточной стенки бактерий; освоить технику приготовления фиксированных препаратов.

Самостоятельная работа: приготовить мазок из смеси культур стафилококка и кишечной палочки и окрасить по Граму (см. теоретическую справку). Оценить морфологические и тинкториальные свойства.

Результат:

Вывод:

Работа № 3. Техника приготовления нативных (живых) препаратов. Изучение подвижности микроорганизмов

Цель работы: изучить непостоянные структуры бактериальной клетки.

Самостоятельная работа: по характеру подвижности микроорганизмов определить расположение жгутиков.

Результат

Препараты

(схема): «висячая» капля «раздавленная» капля

Вывод:

Теоретическая справка

к работе № 1

Морфология прокариот

Бактерии - это одноклеточные прокариоты растительного происхождения, но лишенные хлорофилла. Видны в световой микроскоп, размеры их измеряются в микрометрах. Размножение происходит бинарным делением.

Бактерии

патогенные (паразиты) условно-патогенные непатогенные (сапрофиты)

вызывают болезни челове- вызывают заболевания не вызывают забо-

ка, животных, растений при определенных усло- леваний

виях

Морфология - это форма, размер бактерий, расположение клеток в препарате.

Различают три морфологических формы бактерий:

1 ) кокки 2) палочки 3) извитые

1. Кокки: форма - круглая

размер - мелкие

расположение в препаратах - 6 разновидностей:

а) микрококки б) диплококки в) тетракокки

менингококки

гонококки пневмококки

г) сарцины в) стафилококки д) стрептококки

2. Палочковидные:

• форма - цилиндр

• размер: длина: толщина:

- крупные - толстые

- средние - тонкие

- мелкие

• концы палочек – закругленные (кишечная палочка)

- прямые (сибиреязвенная палочка)

- в виде утолщения (дифтерийная палочка)

• расположение - беспорядочное

- цепочкой (стрептобактерии)

- попарно (диплобактерии)

- в виде римских цифр II, V, X и т.д.

3. Извитые: форма 1. вибрионы

2. спириллы

3. кампилобактерии

4. спирохеты

Структурные компоненты бактериальной клетки и их функции:

Постоянные компоненты и их природа	Функции	Метод выявления
Клеточная стенка Гр + (пептидогликан, тейхоевые кислоты) Гр – (пептидогликан, фосфолипиды, белки, ЛПС)	1) Скелетная 2) Защитная 3) Рецепторная 4) Антигенная 5) Адгезивная 6) Транспортная 7) Нарушение синтеза клеточной стенки ведет к образованию L-форм	Световая микроскопия, окраска по Граму
ЦПМ (цитоплазматическая мембрана) Двойной слой фосфолипидов с внедрёнными белками	1) Основной осмотический барьер 2) Участвует в регуляции роста и синтезе компонентов клеточной стенки 3) Транспорт питательных веществ в клетку и метаболитов из нее 4) Инвагинации участков ЦПМ - мезосомы - содержат ферменты, обеспечивающие биологическое окисление	Электронная микроскопия
Мезосомы Производные ЦПМ	1) Аналог митохондрий, обеспечивают синтез АТФ и процессы дыхания 2) Участвуют в делении клетки 3) Участвуют в спорообразовании	Электронная микроскопия
Цитоплазма Сложная коллоидная система, состоит из воды, растворимых белков, РНК	Обеспечивает функционирование всех органелл	Электронная микроскопия
Рибосомы 70S	Отвечают за биосинтез белка	Электронная микроскопия
Нуклеоид Двунитевая молекула ДНК, замкнута в кольцо, плотно уложена в виде клубка	Расположен в центральной зоне бактерий (одна хромосома) – носитель генетической информации	Электронная микроскопия

Непостоянные компоненты и их природа	Функции	Метод выявления
Капсула Слизистая структура, прочно связана с клеточной стенкой (полисахариды или полипептиды)	1) Защитная 2) Антигенная 3) Адгезивная	Световая микроскопия, окраска по Бурри, Бурри-Гинсу
Жгутики Состоят из белка-флагеллина являющимся Н-антигеном Пили Состоят из белка	Обеспечивают движение бактерий. Пили 1-го порядка обеспечивают адгезию на поражаемой микробной клетке. Пили 2-го порядка – конъюгационные, обеспечивают перенос части генетического материала от донора к реципиенту.	В мазках «висячая капля», «раздавленная капля», при фазово-контрастной микроскопии Электронная микроскопия
Плазмиды Дополнительные факторы наследственности в виде замкнутых колец ДНК с небольшой молекулярной массой	1) Регуляторная – компенсация нарушений метаболизма ДНК клетки хозяина. 2) Кодирующая – внесение в бактериальную клетку новой генетической информации.	Электронная микроскопия
Включения Гликоген, полисахариды, бета-оксимасляная кислота, полифосфаты (волютин)	Запас питательных веществ.	Световая микроскопия. Волютин окрашивают по Леффлеру или Нейссеру
Спора Образуют Гр+ бактерии, из одной клетки образуется спора. Плотная многослойная оболочка, с большим содержанием кальция и липидов, низким содержанием воды	Сохранение генетической информации при неблагоприятных условиях. Расположена: - субтерминально - терминально - центрально	Световая микроскопия, окраска по Ожешко.

к работе № 2