Методы качественного определения нитритов

Опыт №1 Проба с реактивом Грисса

Измельченный корм помещают в стаканчик и заливают равным объемом дистилированной воды. Через 15-20 минут берут 1 мл фильтрата и добавляют к нему 1мл реактива Грисса. При положительной реакции на нитриты исследуемый раствор окрашивается в розовый или красный цвет.

Опыт №2 Метод висячей капли

В коническую колбу вносят содержимое желудка или патматериал, подкисленный соляной кислотой. Отверстие колбы закрывают стеклом с висячей каплей дифениламина в концентрированной серной кислоте. При наличии нитритов они под влиянием соляной кислоты переходят в газокись и двуокись азота, в результате висячая капля на протяжении 30 минут окрашивается в синий цвет.

Опыт №3 Проба с сульфаниловой кислотой

К 2 мл вытяжки, содержащей нитриты, добавляют раствор сульфаниловой кислоты в соляной кислоте. Через 10 минут добавляют раствор натрия гидроокись до щелочной реакции и свежий щелочной раствор бета-нафтола. Появляется оранжево-красный осадок или окрашивание.

Методы количественного определения нитритов

В 10 пробирок наливают из микробюретки рабочий (стандартный) раствор нитрита натрия в количествах, указанных в таблице:

Номер Пробирки	Кол-во р-ра в мл	Содержан. нитритов в мг	Номер пробирки	Кол-во р-ра в мл	Содержан. нитритов в мг
1 2 3 4 5	0,2 0,4 0,6 0,8 1,0	0,0015 0,0030 0,0045 0,0060 0,0075	6 7 8 9 10	1,2 1,4 1,6 1,8 2,0	0,0090 0,0105 0,0120 0,0135 0,0150

Затем во все 10 пробирок доливают дистиллированной воды до 10 мл, а в 11 пробирку – 10 мл испытуемого фильтрата. После этого, во все 11 пробирок наливают по 0,5 мл 5% раствора реактива Грисса и через 15 мин сравнивают окраску исследуемого раствора со стандартной шкалой. Количество нитритов в испытуемом растворе (в мг %) находят по формуле:

МА х 100

Х= 

10 х н

где: М – содержание нитритов в 10 мл исследуемой вытяжки (по таблице)

А – общий объём (1%) отфильтрованной вытяжки

н – навеска исследуемого материала

Контрольные вопросы:

1 Объясните механизм токсического действия нитритов и нитратов?

2 Значение химических исследований по качественному и количественному определению нитритов и нитратов в исследуемых кормах?

Тема: Микозы и микотоксикозы. Кормовые отравления

Цель занятия. Ознакомить студентов с методами определения головневых грибов в фураже, карбамида в кормах и содержимом рубца.

Материальное обеспечение. Пробы корма, необходимые реактивы и

посуда.

Определение головневых грибов в зерне. На аналитических весах взвешивают 10 г зерна, освобожденного от мешочков головни и посторонних примесей, и осторожно перетирают его между листками фильтровальной бумаги. Споры головни остаются на бумаге, окрашивая ее в серый цвет. Очищенные зерна взвешивают вновь и по разности между первым и вторым взвешиванием зерна находят вес распыленной головни.

Допустимое количество головни в зерне не должно превышать 0,6%.

Определение спорыньи в размолотом корме (способ Зинина). В стеклянный цилиндр помещают 4,0 исследуемого корма, приливают 12-13 мл 90% этилового спирта, взбалтывают 5-6 минут, затем добавляют 10-15 капель 20%-ного раствора серной кислоты, после чего оставляют стоять 5 минут. При наличии спорыньи вытяжка окрашивается в розовый цвет, а при добавлении к ней насыщенного раствора натрия гидрокарбоната розовый цвет переходит в фиолетовый.

Допустимое содержание спорыньи в кормах не должно превышать 0,1 г.

Определение токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов на гуппиях. Определение общей токсичности. Зерно измельчают, отруби и комбикорм берут без измельчения, навеску 50 г помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют на шуттель-аппарате в течение 2 часов. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в выпаривательную чашку и выпаривают под тягой на водяной бане при 55-60 градусов досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и переносят в химический стакан емкостью 700-800 мл диаметром 11-15 см с 500 мл воды из аквариума комнатной температуры (17-20 градусов). Экстракты из комбикормов, кукурузы, гороха и проса после растворения в воде помещают в бытовой холодильник на 40-45 минут при температуре 6-7 градусов. По истечении срока экстракты фильтруют через небольшой слой ваты, подогревают до исходной температуры. В стаканы с аквариумной водой и экстрактами исследуемых кормов помещают 5 рыбок – гуппий взрослых, независимо от пола, за которыми ведут наблюдение, отмечая их гибель через 24 часа.

Определение микотоксинов. Комбикорм, отруби берут неизмельченными, а зерно измельчают. Навеску 50 г помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании на шуттель-аппарате в течение 2-х часов или в статическом состоянии в течение 20 часов. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в фарфоровой чашке и упаривают на водяной бане при температуре 55-60 градусов до объема 45-50 мл. Остаток переносят в делительную воронку и встряхивают 1 минуту. Затем в воронку вносят 50 мл гексана и встряхивают 1-2 минуты. После разделения слоев нижний слой сливают в другую делительную воронку и дважды ее экстрагируют 40 мл хлороформа (в каждом случае встряхивают 2 мин.). Гексановую фракцию при необходимости исследуют на хлор и фосфорорганические соединения. После разделения слоев хлороформенные фракции (нижний слой) сливают в фарфоровую чашку и упаривают под тягой на водяной бане при температуре 55-60 градусов до исчезновения хлороформа (досуха). Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и переносят его в химический стакан с 500 мл воды (17-20 градусов) взятого из аквариума. В стакан помещают 5 гупий независимо от пола, за которыми ведут наблюдение, отмечая их гибель через 24 часа.

Результаты определения. В зависимости от степени токсичности исследуемого корма гуппий погибают в сроки, указанные в таблице: