Обнаружение фторидов и кремнефторидов
1 Реакция травления стекла. Исследуемый патматериал измельчают, помещают в тигель, подщелачивают едкой известью, добавляют раствор аммония нитрата, высушивают и прокаливают при температуре около 500 °С до полного сжигания. После этого часть золы в тигле (свинцовом) смачивают несколькими каплями воды и обливают концентрированной серной кислотой. Тигель быстро закрывают часовым стеклом нижняя поверхность которого покрыта воском или парафином, на котором предварительно делают надпись или знак. Тигель оставляют на 24 часа, снимают слой парафина и наблюдают реакцию травления стекла. Чувствительность 2-3 мг фтора в пробе.
2. Реакция желатинирования капли воды. В пробирку помещают 0,1-0,2 гр исследуемой соли удобрения и приливают несколько капель концентрированной серной кислоты. В отверстие пробирки помещают стеклянную палочку с каплей воды. Если при этом капля мутнеет и желатинируется, то препарат представляет кремфторид. В присутствии фтористого натрия и других соединений фтора капля воды желатинируется лишь при нагревании пробирки.
3. Реакция с калия хлоридом. В пробирку с насыщенным водным раствором фтора содержащего препарата добавить несколько капель 10%-го раствора калия хлорида. В присутствии ионов фтора осадка не образуется, тогда как в присутствии иона кремнефтористого натрия выпадает студневидный осадок.
4. Реакция с роданидом железа. В пробирку помещают 1-2 мл исследуемого водного раствора роданида аммония, смешивают, затем по каплям добавляют 3%-ного раствора хлорногожелеза. Быстрое исчезновение красно-коричневого окрашивания говорит о присутствии в растворе иона фтора.
5. Ализаринцирконевая проба. Основа на том, что в солянокислом растворе соли циркония окрашиваются ализаринсульфонофокислым натрием в красно- фиолетовый цвет. При взаимодействии фтористых солей красно-фиолетовая окраска переходит в желтый цвет – образуется устойчивое комплексное соединения фтористого циркония. Проведению реакции мешают оксалаты, фосфаты, сульфаты, дающие комплексные соединения с цирконием.
Для исследования в химический стаканчик помещают 5-10 гр патологического материал, заливают его 10-20 мл 5%-ного раствора соляной кислоты, перемешивают в течение 30 минут и фильтруют в пробирку, в которую предварительно помещают 0,2-0,3 гр активированного угля. Пробирку с фильтратом взбалтывают 1-2 минуты и снова фильтруют. Фильтрат должен быть бесцветным, в противном случае обработку углем повторяют.
К полученному фильтрату по каплям при встряхивании прибавляют цирконализариновый лак, окрашивающий фильтрат в красный цвет. При наличии фтора филтрат обесцвечивается и становится желтым. При отсутствии фтора фильтрат остается красно- фиолетового цвета.
6. Капельная реакция (экспресс метод). При нанесении на фильтровальную бумагу, пропитанную цирконализариновым лаком капли испытуемого фильтрата, в присутствии фтора – бумага обесцвечивается и в месте нанесения капли образуется желтое пятно.
Количественное определение фторидов
Реакция основана на обесцвечивании розового цирконализаринового лака ионами фтора вследствие образования прочного комплексного соединения. Окраска зависит от содержания фтора и моеьт изменяется от розовой до желтой.
Для определения фтора в пробирку наливают 1 мл исследуемого фильтрата и добавляют 1 мл рабочего раствора ализаринциркониевого лака, перемешивают и доводят дважды дистиллированной водой до объема 16 мл и оставляют на 2 часа. После этого производят колориметрирование при этом смотрят на белом фоне сверху вниз. Затем производят расчет на весь исследуемый объект (таблица).
Содержание фтора в кг материала (в мг)
Объект исследования |
Допустимое содержание |
При остром отравлении |
Мышцы Печень Почки Легкие Кожа Кости Молоко |
0,14-0,58 0,4-2,2 0,52-1,1 0,44-1,2 4,8-24,0 153,0-348,0 0,09-0,35 |
15,1 16,2 20,7 28,2 - - - |
Определение фтора в мышцах. Реакция основана на том, что в присутствии фтористого натрия животная мышца способна разрушать глюкозу с образованием ацетона.
Берут 20-25 гр тщательно измельченных мышц от павшего или вынужденного убитого животного помещают в химический стаканчик и добавляют 30-50 мл 5%-ного раствора глюкозы выдерживают в течение 12 часов при комнатной температуре, периодически помешивая стеклянной палочкой содержимое стаканчика. После этого фильтруют, берут 5 мл полученного фильтрата и подщелачивают 2-3 каплями аммиака и добавляют 1-2 капли свежеприготовленного крепкого водного раствора нитропруссида натрия. При наличии ацетона появляется фиолетовое окрашивание. Фтор блокирует гликозид, инактивируя фермен энолазу, что ведет к накоплению диоксиацетона, который дает реакцию с нитропруссидом.
Обнаружения бария. 10-30 гр измельченного патматериала заливают 10-20 мл 5%-ного раствора соляной кислоты, нагревают на водяной бане при частом помешивании. Полученную смесь охлаждают и фильтруют. Исследуемый материал обрабатывают соляной кислотой 3-4 раза, фильтруя через один и тот же фильтр в одну и ту же фарфоровую чашку. Собранные фильтраты выпаривают на водяной бане досуха. Полученный осадок после охлаждения растворяют в 3-5 мл дистиллированной воды. Если раствор мутный, его фильтруют через смоченный бумажный фильтр. Обнаружения бария в фильтрате ведут, используя следующие реакции:
1 Проба с серной кислотой. К 1 мл фильтрату добавляют 2 мл 10% серной кислоты – при наличии бария образуется осадок бария сульфата, нерастворимый ни в щелочах, ни в кислотах.
2 Проба с калием хроматом. На часовое стекло наносят 2 капли 10% раствора калия хромата, который не растворяется в едких щелочах.
3 Проба с калием иодатом. На
предметное стекло наносят 2-3 капли
соляно-кислого фильтрата, доливают 1-2
капли 5 % раствора калия иодата –
образуется характерный криссталический
осадок бария иодата в виде палочек или
розеток. Чувствительность – 1 мг бария
в 100 гр
4 Дифференциация бария хлорида от
бария карбоната. Патматериал
берут в две пробирки. В одной готовят
вытяжку дистиллированной водой, в другой
5% раствором соляной
5 Обнаружение сольбара ( барияполисульфида). При добавлении к исследуемому порошку в пробирке 5% раствора соляной кислоты образуется сероводород, который обнаруживают по запаху либо пробой с свинцовой бумагой.
При минерализации патматериала пергидролем с серной кислотой барий переходит в осадок. Минерализат разбавляют водой (1:4), фильтруют. Осадок на фильтре промывают водой и исследуют на барий.
На предметное стекло наносят две капли концентрированной серной кислоты и вносят на кончике ножа осадок. Смесь подогревают. После охлаждения образуются кристаллы бария сульфата в виде мелких крестов и прямоугольных пластинок. Этим методом обнаруживают 0,015 мг бария в 100 гр материала.
Контрольные вопросы:
1 В каких случаях возможно отравления фторидами?
2 Что лежит в основе токсикодинамики отравления фтором?
3 Какие соли бария представляют наибольшую токсическую опасность?
4 По каким характерным клиническим признаком можно заподозрить отравление фтором?
5 Какие экспресс-методы можно использовать при обнаружении фтора и бария?
Тема: Определение содержание фтора в воде, биологическом
материале и минеральных веществах
Цель занятия: Определить содержание фтора в воде, биологическом материале и минеральных веществах.
Материалы и оборудование: вода, корм, реактивы, отгонная колба.
Реактивы:
1 Серная кислота, освобожденная от фтора кипячением на электроплите в течение 1 часа с момента появления густых белых паров. Готовят раствор ее на дистиллированной воде в соотношении 1:1 или 1: 1,5.
2 Ферросилиций растертый и прокаленный в муфеле при 200°С в течение 2 часов порошок. Вместо него можно использовать чистый кварцевый песок или измельченное стекло после обработки их в платиновой чашке концентрированной серной кислотой и нагревания до появления белых паров с последующим прокаливанием при 700°С.
3 Раствор ализаринового красного «С» (моносульфата натрия) – навеску 0,75 г растворяют в 1 литре бидистиллированной воде.
4 Раствор азотнокислого (или оксихлорида) циркония – 0,295 г азотнокислого циркония или 0,354 г оксихлорида циркония растворяют в 800 мл. бидистиллированной воде. Медленно помешивая, добавляют 33 мл концентрированной соляной кислоты до метки в 1 л мерной колбе.
5 Стандартный раствор фтора: 50 г натрия фторида растворяют в 100 мл бидистиллированной воды, фильтруют затем упаривают на водяной бане до появления на поверхности твердой корки, которую снимают и высушивают на воздухе. 0,221 г перекристаллизованного натрия фторида растворяют в 1 литре дистиллированной воды.
Определяя фтор, берут навеску измельченных проб мяса и внутренних органов 25-50 г высушенных проб кормов, фекалий 10-30 г , мочи 50-200 мл, обезжиренных автоклавированием (при 1,5-2 атм.) проб костей 0,5-1 г, проб минеральных кормовых добавок 1-25 г (в зависимости от содержание фтора). К жидким пробам биологического материала и кормов добавляют 0,5-1 г окиси кальция, к сухим (кроме костей) – взвесь гидрата окиси кальция, настаивают в течение суток, затем высушивают, повышая постепенно температуру до 170-180°С и сжигают в муфельной печи при 400-550°С до полного озоления.
После осторожного смачивания водой содержимое чашки количественно переносят в отгонную колбу установки и нагревают до 140°С и только после этого пускают пар из кипящего парообразователя. При помощи электротрансформатора во время отгона поддерживают температуру в колбе в пределах 135-145°С
Из водяного холодильника в колбу собирают дистиллят в количестве 400 мл (при низком содержании фтора можно 100-200 мл), подщелачивая его раствором едкого натрия под контролем фенолфталеина. Отгон проводят в 2-3-х параллелях, обязательно ставя холостой опыт их 10 мл. бидистиллированной воды.
После отгона берут 100 мл дистиллята и добавляют по 5 мл раствора ализарина моносульфата и азотнокислого циркония, смешивают и ставят в темное место. Ровно через 60 минут определяют интенсивность окраски с помощью ФЭК-М при зеленом светофильтре в кюветах с шириной рабочих граней 50мл.
Концентрация фтора определяют по калибровочному графику приготовленному заблаговременно из стандартного раствора натрия фторида, содержащего фтор 0 до 0,3 мг/100мл.
Контрольные вопросы:
1 Определение фтора в воде?
2 Определение фтора биологическом материале и минеральных вещест
вах?
Тема: Ферментный метод определения ФОС (по А.А. Покровскому в модификации Д.Д. Полозова и В.А. Полецкого)
Цель занятия: Изучить ферментный метод определения фосфорорганических соединений.
Принцип метода основан на определении интенсивности угнетения активности ацетилхолиноэстеразы при инкубации нормальной сыворотки крови лошади, экстракта из патматериала и раствора ацетилхолинхлорида. Степень угнетения фермента устанавливают по изменению окраски бромтимолового синего под воздействием образующейся уксусной кислоты от синей до зеленовато-желтой.
Реактивы
Раствор № 1. Берут 200 мг бромтимолового синего и растирают в ступке с 20 мл 0,1 н. раствора едкого натра до растворения. Синий раствор из ступки переносят в литровую мерную колбу. В нее вливают 50 мл 0,1 М раствора борной кислоты в 0,1 М растворе хлористого калия и доводят дистиллированной водой до 1 л. Раствор должен иметь интенсивно-синюю окраску и рН 8,4.
Раствор № 2. К 9,75 мл раствора № 1 добавляют 0,25 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты. Раствор должен иметь желтое окрашивание и рН 3,5.
Раствор № 3. К 1,8 мл раствора № 1 добавляют 0,2 мл 1%-ного раствора ацетилхолинхлорида (9:1).
Ход анализа. К 25 г измельченной навески добавляют 25 мл бензола и экстрагируют при помешивании в течении 1 ч. 0,025 мл экстракта микропипеткой вводят в уленгутовскую пробирку. Туда же добавляют 0,025 мл лошадиной сыворотки крови и 2 мл раствора № 3. Одновременно готовят колориметрический стандарт (раствор № 2) и контроль. В контрольную пробирку вместо экстракта заливают дистиллированную воду. По скорости изменения окраски от интенсивно-синего до желтого в пробирке с исследуемым экстрактом по сравнению с контролем определяют наличие ил отсутствие фосфорорганического пестицида в пробе.
Этот метод используют для определения остатков ДДВФ, димброма, циодрина; после концентрирования экстрактов – хлорофоса и амидофоса.
Контрольные вопросы:
1 Токсикодинамика при отравлений ФОС?
2 Метод определение ФОС?
Тема: Определение фосфорорганических соединений в воде и кормах
Цель занятия: Ознакомить студентов с методами качественного обнаружения ФОС в воде и кормах.
Материальное обеспечение: Необходимые реактивы и растворы пробы зерна, дистиллированной воды со следами ФОС.
Для группового обнаружения ФОС в воде и кормах используют гидроперикисную реакцию (реакция Шанемана), основанную на способности ФОС увеличивать скорость окисления бензидина и других окислительно-восстановительных индикаторов. При действии перекиси водорода на ФОС образуется гидроперекись этого соединения, а вщелочной среде происходит окисление бензидина, при этом появляется желтовато –оранжевое окрашивание.
Определение ФОС в воде. В пробирку наливают 5 мл воды, добавляют 0,5 мл 0,2 % водно-спиртового раствора солянокислого бензидина, 0,5 мл 2% раствора перекиси водорода тщательно перемешивают и добавляют 1 мл 1 % раствора лимоннокислого натрия. Затем пробирку нагревают в течение 10-15 минут на водяной бане при температуре 75-80°. При наличии ФОС раствор окрашивается в желтый или оранжевый цвет. Чуствительность реакции 10-100 мг на 1 л.
Определение ФОС в кормах. В колбочку помещают 10 г измельченного корма и заливают 15 мл винного спирта, закрывают пробкой и энергично перемешивают в течение 25 минут. Полученную массу фильтруют через бумажный фильтр. Для обесцвечивания фильтрата его помещают в пробирку в количестве 5 мл и добавляют 1 г активированного угля, смешивают и нагревают на водяной бане в течение 2-5 минут, периодически помешивая. Горячую смесь фильтруют через бумажный фильтр предварительно смоченного спиртом.
Обесцвеченный фильтрат в количестве 3 мл наливают в чистую пробирку и добавляют 2 мл дистиллированной воды, а затем добавляют те же реактивы и в таком количестве, что и при определении ФОС в воде, все тщательно перемешивают и нагревают в течение 5-10 минут на водяной бане при температуре 75-80°. При наличии ФОС раствор окрашивается в желто-оранжевый цвет.
В случае развития слабой окраски к содержимому пробирки добавляют 0,5 мл толуола и тщательно перемешивают. При наличии ФОС отстоявшийся слой толуола приобретает реакции 10-100 мг на кг.
Для идентификации и количественного определения ФОС в объектах ветеринарного надзора используют методы тонкослойной, газа- жидкостной и газовой хроматографии.
Помимо химико- аналитических методов определение ФОС в кормах, воде, биологических средах определенное значение для диагностики отравлений имеет метод биологического контроля. Он основан на использовании высокой чувствительной лабораторных (белые мыши) и других животных, особенно молодх, к токсическому действию ФОС,
С помощью биологического метода можно обнаружить ФОС в следующих концентрациях: трихлорметафос-3 1:45, Хлорофос 1:100, метилмеркаптофос и фосфамид 1:500, октаметил и ДДВФ 1: 2500.
Лабораторным животным экстракты из корма, патматериала, воды вводят подкожно или перорально. За подопытными животными ведут наблюдения, а результаты учитывают через 24 часа. При наличии ФОС в исследуемом материале в значительных количествах у подопытных мышей развивается характерная клиника отравления: возбуждение, слюнотечение, миоз, тремор, судороги, дефекация и асфиксация. При отсутствии у подопытных мышей характерной судорожнопаралитической клиники отравления им повторно вводят через 24 часа после первого введение по 0,5 мл 10% спиртового раствора исследуемой вытяжки и ведут наблюдение в течение последующих суток. Появление у белых мышей характерных симптомов отравления свидетельствует об опасной степени загрязнения ядами исследуемых кормов или продуктов животноводства. При отсутствии характерной клиники исследуемые корма и продукты животноводства считают безвредным.
Контрольные вопросы:
1 Назовите причины возникновения отравления ФОС?
2 Назовите препараты контактного и системного действия и укажите сроки их пер систентности?
3 Что лежит в основе токсического действия ФОС на животный организм.
4 Опишите характерные симптомы острой интоксикации ФОС?
5 Как поступить с мясом от вынужденного убитого животного с характерными признаками интоксикации ФОС?
6 Назовите средства антидотной и симптоматической терапии при отравлении ФОС?
7 Как поступить с молоком от коров, подвергшихся воздействию ФОС?
8 Через какие сроки возможна сдача скота на убой при обработке его хлорофосом?
9 Назовите основные пути профилактики отравлений ФОС?
Тема: Определение хлорорганических соединений в воде, кормах и биологических объектах, методом тонкослойной хроматографии
Цель занятия: Ознакомить студентов с методами отбора проб, экстракцией, очистки и методом хроматографии в тонком слое.
Материальное обеспечение: Исследуемый пробы на ХОС, необходимые реактивы и посуды, хроматографические пластинки, пипетки, шприцы для нанесения на пластинку растворов, ртутно-кварцевая лампа.
Отбор проб. Из средней пробы отбирают: овощей, грибов, зерна, творога-500гр, сыра – 100 гр, мяса, рыбы 2520гр, масла сливочного, сливок 200гр, травы 200 гр, сухих грибов, сена 50 гр, вина, воды, молока 500 мл. Масло растапливают, овщи, фрукты и т.п. измельчают, тщательно перемешивают и анализируют навеску.
Экстракция препарата из пробы и очистки экстрактов. Вода, пробы воды и вина отбирают только в стеклянную посуду 200 мл пробы в колбе с притертой пробкой трижды экстрагируют в течение 15 минут на приборе для встряхивания гексаном или петролейным эфиром по 30 мл или диэтиловым эфиром порциями по 40-50 мл. Экстракты объединяют. Насыпают в экстракт: безводного натрия сульфата (около 10г) и оставляют на 15-20 минут для удаления влаги. Экстракт переносят в прибор для отгонки растворителей и доводят обьем до 0,1 мл.
Овощи, фрукты. 50 г измельченной пробы трижды экстрагируют в течение 15 минут по 30 мл гексана или петролейного эфира. Экстракты объединяют, сушат и отгоняют до обьема 0,1.
Зерно. 10 г зерна размельчают, заливают гексаном или петролейным эфиром по 30 мл и ставят на 15 минут для встряхивания. Экстракты объединяют, прибавляют 10 мл насышенного раствора безводного натрия сульфата в серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и повторяют обработку пока кислота не станет бесцветной. Экстракт сушат и отгоняют до 0,1 мл.
Трава и сено. 10г травы или 5 г сена измельчают, заливают 50 мл ацетона, встряхивают в течение 2-3 минут, прибавляют охлажденной до 0 петролейного эфира дистиллированной воды и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Экстракт сливают и фильтруют, экстракцию повторяют. Ацетоно-водные вытяжки объединяют, отгоняют ацетон, а из водного слоя экстрагируют препарат гексаном илипетролейным эфиром порциями по 10 мл 2 раза в течение 10 минут. Очистку экстракта проводят также как и в случае с зерном.
Рыба и мясо. Мясо пропускают через мясорубку. Рыбу очищают от чешуи и внутренних органов и измельчают. 25 г пробы заливают 40 мл гексана, взбалтывают 2 минуты и оставляют на 30 минут. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты объединяют в делительной воронке, сушат насыщенным раствором натрия сульфата в серной кислоте, отделяют органическийслой и отгоняют до обьема 0,1 мл.
Молоко. К 50 мл молока прибавляют концентрированную серную кислоту до полного почернения пробы. После охлаждения до 10-15°С переносят исследуемый раствор в делительную воронку и экстрагируют гексаном 2 раза по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 минуты и оставляют на 30 минут, для полного разделения слоев. В случае образования эмульсии прибавляют 1-2 мл спирта. Экстракты объединяют в делительной воронке, прибавляют 10мл концентрированной серной кислоты, насыщенной безводным натрия сульфатом, встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и очистку повторяют пока кислота не будет бесцветной, сушат очищенный экстракт над серно-кислым натрием и отгоняют до небольшого объема.
Кровь, желчь, моча. 0,2-2 мл цельной крови, 2-4 мл желчи, 10-20 мл мочи помещают в пробирку с притертой пробкой и экстрагируют 3 раза порциями по 5-10 мл диэтилового эфира в течение 15 минут. Экстракт декантируют. Объединяют все порции, сушат и отгоняют растворитель до небольшого объема.
Кал. 5 г кала в колбе заливают концентрированной серной кислотой, насышенной безводным натрия сульфатом. Перемешивают и приливают 20 мл гексана, встряхивают 2 минуты и оставляют на 30 минут, периодически перемешивая. Экстракцию повторяют 2 раза. Объединенные экстракты очищают, сушат и отгоняют до 0,1 мл.
Хроматография. На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от нижнего края при помощи медицинского шприца или градуированной пипетки наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Колбачку экстрактом 3 раза смывают небольшими порциями (0,2 мл) деиэтилового эфира, которые затем также наносят на пластинку в центре пятна. С права и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартный растворы исследуемых препаратов, содержащих 1,5 или 10 мкг препарата.
Пластинку с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой налит гексан за 30 минут до начало хроматографирования. Край пластинки с нанесенными растворами помещают в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см.
После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку опрыскивают из пульверизатора проявляющим раствором и облучают ртутно - кварцевой лампой в течение 10-15 минут на расстоянии 20см от источника света. При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета. Количественное определение производят путем сравнивания размеров пятна и стандарта визуально, либо путем измерения площадей. Расчет результатов анализа производят по формуле:
где Х- содержимое препарата в пробе, в мг/кг или мг/мл;
А- количество препарата, найденное путем визуального сравнивания со стандартным раствором, в мкг;
В- навеска исследуемой пробы в г или мл;
- содержание препарата в стандартном растворе, мкг;
- площадь пятна стандартного раствора, в мм;
- площадь пятна пробы, мм;
В том случае, когда известно, какой из хлорорганических препаратов находится в пробе, параллельно с анализируемой пробой наносят стандартный раствор ДДТ. После проявления расcсчитывают величину Rf и Rc.
Rf- это отношение расстояния от точки нанесения пробы до центра пятна от точки нанесения пробы до линии фронта растворителя.
Rc- это отношение Rf неизвестного препарата к Rf ДДТ. По величине Rf и Rc идентифицируют исследуемое вещество.
Контрольные вопросы:
1 Назовите основные пути поступления ХОС в организм животных?
2 Какова персистентность ХОС во внешней среде?
3 Какие органы больше всего кумулируют ХОС?
4 Какие препараты применяют как инсектициды, гербициды и фунгициды?
5 Какова токсикодинамика ХОС в организме животных?
6 Назовите основные симптомы отравления ХОС?
7 Какие лечебные мероприятия проводят в случаях отравления ХОС?
8 Основные пути профилактики отравления ХОС?
Тема: Определение гексахлорциклогексана в комбикормах.
Определение полихлорпинена и полихлоркамфера в кормах, тканях животных и молоке
Цель занятия: Изучить методы определение гексахлорциклогексана в комбикормах, полихлорпинена и полихлоркамфера в кормах, тканях животных и молоке.
Определение гексахлорциклогексана в комбикориах
40 г комбикорма увлажняют 60 мл воды и оставляют на ночь, после чего переносят в делительную воронку и 2 раза экстрагируют сначала 50 мл, затем 100 мл гексана-ацетона (1:1). Промывают 50 мл воды. После разделения водный слой сливают и снова 3 раза экстрагируют 40 мл гексана. Затем экстракты объединяют, сушат испаряют до 30 мл и очищают концентрированной серной кислотой.
Подвижный растворитель – н-гексан. Проявляющий реагент – аммиачно-ацетоновый раствор нитрита серебра в ацетоне (0,5г нитрита серебра растворяют в 5 мл воды, добавляют 5 мл аммиака и доводят объем ацетоном до 100 мл). после опрыскивания пластинки облучают УФ-лучами под лампой ПРК – 4. Гексахлорциклогексан проявляется в виде черных пятен на белом фоне с величиной Rf на окиси алюминия для гаммаизомера 0,3; для альфа-изомера 0,34.
Определение полихлорпинена и полихлоркамфена в кормах, тканях животных и молоке (по В.Н.Поляковой и Г. А.Трондиной)
Навеску измельченного корма или тканей животных массой 25 г заливают в склянке с притертой пробкой 50 мл н-гексана и экстрагируют дважды в течении 2 часов. Навеску жира массой 5 г расплавляют в 50 мл нагретого гексана.
В пробу молока (25 мл) добавляют 5 мл раствора оксалата калия, 5 мл насыщенного раствора натрия хлорида, 75 мл ацетона. Смесь встряхивают в течение 2 мин и фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 500 мл, добавляют 200 мл воды и трижды экстрагируют гексаном пропорциями по 20 мл.
Во всех случаях объединенные экстракты очищают серной кислотой, концентрируют до необходимого объема и хроматографируют.
Подвижный растворитель – смесь н-гексана и изопропилового спирта (1:1). Прявляющий реактив – раствор нитрата серебра с аммиаком или раствор нитрата серебра с 2-феноксиэтанолом (0,3 г нитрата серебра в мерной колбе на 100 мл растворяют в 2 мл воды, добавляют 10 мл 2-феноксиэтанола и доводят ацетоном объем до метки) с последующим облучение УФ-светом.
Контрольные вопросы:
1 Определение гексахлорциклогексана в комбикориах?
2 Определение полихлорпинена и полихлоркамфена в кормах, тканях животных и молоке?
Тема: Определение кельта в органах и тканях животных
Цель занятия: Изучить методы определение кельта в плазме крови, мясе, внутренних органах и кале.
Принцип метода. Метод, основан на извлечении кельтана из биологических объектов гексаном: очистке экстракта из кала через слой сернокислого натрия, а из мышц и внутренних органов – через слой силикагеля ЛС (для тонкослойной хроматографии) с последующей элюацией смесью бензола с гексаном; концентрации экстракта и разделении его методом хроматографии в тонком слое, проявлении раствором аммиаката серебра в ацетоне с последующим ультрафиолетовым облучением. Количественное определение проводится путем измерения площадей пятен проб и стандартных растворов.
Определение в плазме крови. В центрифужную пробирку с 1-2 каплями гепарина берут 6-8 мл крови и центрифугируют 10-15 мин при 8 тыс. об/мин 3-5 мл полученной плазмы подкисляют 0,1 N раствором соляной кислоты до рН 5-6, перемешивают с 2-3 мл гексана в течение 3-5 мин (избегать образования эмульсии). Гексановый слой отстаивают и отсасывают пипеткой со шприцем. Экстракцию повторяют второй раз, объединенный экстракт упаривают в токе воздуха до малого объема.
Определение мяса, внутренних органов. 10 мг мяса, 5 г печени, почек тщательно измельчают ножницами, растирают в ступке с кварцевым песком, заливают дистиллированной водой, подкисленной 0,1 N раствором соляной кислоты до рН 5-6 (1:10). Смесь выдерживают 8-12 часов при комнатной температуре, периодически встряхивая. В делительной воронке смесь тщательно перемешивают 3-5 минут (не встряхивая). Гексановый слой отделяют, экстракцию повторяют второй раз. После этого объединенный экстракт фильтруют через воронку, в нижней части которой уложена вата (не более 50 мг), насыпан слой 3-4 см силикагеля ЛС (для тонкослойной хроматографии).
Перед употреблением воронку промывают 20 мл гексана. Из воронки кельтан элюируют смесью бензола с гексаном (3:1) два раза порциями по 20 мл. Элюат упаривают в токе воздуха до малого объема или досуха.
Определение в кале. 0,1 г кала заливают 15-20 мл гексана, интенсивно 1-2 минуты встряхивают и оставляют на 30 минут при периодическом помешивании. Экстракт фильтруют через бумажный складчатый фильтр, смоченный гексаном. После этого пропускают через воронку, в нижней части которой вата (не более 50 мг), сверху насыпан слой 2-3 безводного сернокислого натрия. Воронку перед употреблением промывают 20 мл гексана. Экстракт упаривают в токе воздуха до малого объема.
В упаренном до малого объема экстракте из плазмы крови, мышечной ткани, внутренних органов, кала кельтан определяют методом хроматографии в тонком слое. Для этого пятна испытуемой пробы, полученной на хроматографической пластинке сравнивают со стандартным раствором препарата (10 мг кельтана хч растворяют в 100 мл гексана). В качестве подвижного растворителя используют смесь гексана с ацетоном (1:6).Реактив для проведения пятен пестицида готовят в день употребления по прописи: 0,1г азотнокислого серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном. К готовому реактиву прибавляют 2 мл раствора аммиака (уд вес 0,9). После проявления пластинки подвергают действию ультрафиолетовых лучей в течение 10-15 минут. Rf кельтана при гексано-ацетоновом подвижном растворителе равен 0,4.
Контрольные вопросы:
1 Определение кельта в плазме крови и в кале?
2 Определение кельта в мясе и внутренних органах?
Тема: Определение производных 2,4-Д
Цель занятия: Изучить методы определение производных 2,4-Д
Навеску пробы (5 г) измельчают в фарфоровой ступке с чистым песком, заливают 0,5%-ным раствором едкого натра (20 мл) и в течении 30 мин периодически перемешивают. Содержимое ступки переносят в химический стакан, куда вносят 10 мл насыщенного раствора фосфорно-вольфрамовой (фосфорно-молибденовой) кислоты и 10 мл концентрированной соляной кислоты. После смешивания выдерживают 15 мин и фильтруют. Осадок промывают 10%-ным раствором соляной кислоты.
Фильтрат переносят в делительную воронку
и заливают 50 мл хлороформа (эфира).
Содержимое осторожно перемешивают в
течение 2-3 мин и хлороформенную фазу
сливают в конический стакан. Экстрагирование
Экстракты объединяют, выпаривают в водяной бане до сухого остатка. К осадку добавляют 2 мл спирт-эфира, тщательно перемешивают и упаривают до 0,2 мл. этот объем наносят на хроматографическую пластинку.
Подвижный растворитель – циклогексан, бензол, ледяная уксусная кислота (10:2:3). Проявляющий реагент – 0,1 н. раствор нитрата серебра в 3 н. растворе азотной кислоты.
После подсушивания проявителя пластинку облучают 10-15 мин ультрафиолетовым светом. При наличии гербицидов группы 2,4 – Д появляются темно-серые пятна, площадь которых и Rf сравнивают со свидетелем.
Определение мочевины диметилглиоксимным методом
Принцип метода основан на образовании мочевиной с диметиглиоксимом (ДМГ) при нагревании в кислой среде желтого окрашивания, интенсивность которого определяют на ФЭК-М при синем светофильтре в кюветах с шириной рабочих граней 5 мл.
Реактивы.
1.1г ДМГ растворяют в 100 мл этилового спирта.
Раствор стойкий.
2.Реактив Ратнера: к 150 мл воды осторожно приливают 50 мл ортофосфорной кислоты, затем 50 мл концентрированной серной кислоты. Реактив стойкий.
Ход анализа. 1 г комбикорма, помещенного в мерную колбу на 100 мл, заливают до метки водой.
После тщательного смешивания фильтруют через слой ваты, затем к 5 мл фильтрата добавляют 5 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты или этилового спирта, затем фильтруют через бумажный фильтр.
Контрольные вопросы:
1 Приготовление экстракта?
2 Определение мочевины диметилглиоксимным методом
Тема: Методы обнаружение щелочей
Цель занятия: Изучить качественные и количественные методы определение щелочей.
Качественная проба
Красная лакмусовая бумага, смоченная вытяжкой, при наличии щелочей синеет.
1 При добавлении к вытяжке раствора фенолфталеина в присутствии щелочей образуется красное окрашивание жидкостей. Для дифференциации карбонатов и силикатов от истинных щелочей к 2 мл вытяжки с фенолфталеином добавляют 1-2 мл 10%-ного раствора бария хлорида.
Если при взбалтывании розовый цвет исчезает, значит присутствуют
карбонаты и силикаты.
2 Для обнаружения аммиака к вытяжке подносят стеклянную палочку, смоченную концентрированной соляной кислотой. В присутствии аммиака образуется белый дым аммония хлорида. На красную лакмусовую бумажку наносят каплями вытяжку, образуется синее пятно, которое при высыхании исчезает, потому что синяя аммонийная соль лакмусовой кислоты разлагается на воздухе.
3. Чтобы отличить эндогенный аммиак от экзогенного в коническую колбу помещают часть фильтрата (патматериала) и закрывают ее пробкой, к нижней поверхности которой прикрепляют три бумажки: красную лакмусовую, фильтровальную, смоченную раствором меди сульфата и третью- фильтровальную, смоченную раствором свинца ацетата. Посинение двух первых бумажек и отсутствие изменения цвета третьей указывает на наличие экзогенного аммиака (отравление карбомидом, аммиачной водой). Легкое посинение лакмусовой бумаги и почернение свинцовой указывает на разложение белков – аммиак эндогенного происхождения.
4. Для обнаружения натрия и калия едкого берут часть вытяжки и выпаривают почти досуха. Затем на платиновую или медную петлю помещают капли вытяжки, слегка посушивают над пламенем горелки, а затем вносят в пламя горелки. Окрашивание пламени в желтый цвет указывает на наличие натрия едкого, а фиолетовый- калия едкого.